Izolacja jajników noworodków myszy: procedura chirurgiczna mająca na celu pobranie pary jajników z modelu myszy noworodkowej

Streszczenie

Źródło: et al. Morgan, S. Hodowla i współkultura jajników myszy i pęcherzyków jajnikowych. J. Vis. Exp. (2015).

W tym filmie opisujemy zabieg chirurgiczny polegający na izolowaniu jajników od noworodka myszy.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Rozwarstwienie jajników noworodków i posiew

1. Umieścić 1 ml pożywki preparacyjnej (rozpuścić 3 mg/ml BSA w pożywce Leibowitz L15 i przefiltrować, wysterylizować przez filtr o porach 0,2 μm i średnicy 25 mm) w każdym sterylnym szklanym naczyniu na zarodki.
2. Ubiór nowonarodzonych młodych myszy w wieku od 0 do 5 dnia po urodzeniu, ubój przez ścięcie.
3. Chwyć skórę pokrywającą ścianę brzucha za pomocą cienkich kleszczy preparacyjnych i wykonaj duże n....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Leibowitz L15	Invitrogen	11415049
αMEM	Invitrogen	22571020	Dostarczany w postaci wodorowęglanu sodu buforowanego (2 200 mg/l)
Albumina surowicy bydlęcej	Sigma Aldrich	Nr kat. A9418	Do podłoża preparacyjnego
Albumina surowicy bydlęcej	Sigma Aldrich	Samolot A3311	Na pożywkę hodowlaną
Albumina surowicy bydlęcej	Sigma Aldrich	Certyfikat A2153	Do powlekania pipet szklanych
FSH	Merck Serono	Gonal F	Często konieczne jest testowanie wsadowe. Uzupełnić roztwór podstawowy 1 j.m./10 μl w αMEM i przechowywać w temperaturze -20 °C
Filtry strzykawkowe (25 mm, 0,2 μm)	Greiner	Zobacz materiał 16532 tys.	Filtr z octanu celulozy do filtrowania większych (>5 mL) objętości pożywki.
Sterylne probówki	Greiner	187261
Płytka 24-dołkowa	Greiner	Numer katalogowy: 662160
Igły do insuliny	Zaopatrzenie medyczne BD	Numer katalogowy: 037-7606	0,33 mm (29 g) + 1 ml
Szklane naczynia z zarodków	Firma VWR	Nr kat. 720-0579	Wysterylizuj, a następnie ogrzej przed użyciem
Pipety szklane	Fisher Naukowy	10209381	Powłoka BSA przed użyciem
Igły do akupunktury	Acumedic Sp. z o.o.	30 mm x 0,25 Typ C
Roztwór formaliny, buforowany obojętnie, 10%	Sigma Aldrich	HT5014-120 ml
Błony nukleoporowe Whatman	Camlab (Szczemira)	WN/110414	Używaj błyszczącej powierzchni do góry, poliwęglan, średnica 13 mm, wielkość porów 8,0 μm

powiedział: