Mysi model przeszczepu wysp trzustkowych: chirurgiczna metoda wprowadzania wysp trzustkowych do żyły wrotnej i zapobiegania krwawieniu pooperacyjnemu

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Gou, W. et al. Minimalizacja krwawienia z żyły wrotnej po infuzji podczas dowątrobowego przeszczepu wysp trzustkowych u myszy. J. Vis. Exp. (2021)

W tym filmie opisujemy procedurę wprowadzania komórek wysp trzustkowych do żyły wrotnej wątroby, a następnie aplikacji pianki żelowej, aby skutecznie zapobiec krwawieniu. Krwawienie pooperacyjne jest częstą przyczyną wysokiej śmiertelności podczas przeszczepu wysp trzustkowych.

Protokół

1. Przeszczep wysp trzustkowych

Indukuj i utrzymuj mysz w znieczuleniu ogólnym za pomocą 2% izofluranu. Sprawdź, czy nie ma odruchów pedałowania, aby zapewnić prawidłowe znieczulenie zwierzęcia.
Ogol i usuń sierść w okolicy brzucha myszy.
Należy podać pojedynczą przedoperacyjną dawkę buprenorfiny (0,1 mg/kg i.p.).
Zdezynfekuj obszar operacyjny trzema naprzemiennymi chusteczkami zawierającymi 2% jodu i 75% alkoholu.
Wykonaj laparotomię mikronożyczkami, aby wygenerować nacięcie o długości 1-1,5 cm.
Otwórz jamę otrzewnej za pomocą retraktora. Postępuj zgodnie z metodą A lub metodą B, jak opisano poniżej.

Metoda A: (zatamować krwawienie za pomocą pianki żelowej, Rysunek 1A)

Przygotowanie myszy
1. Umieść sterylną gazę wokół nacięcia.
2. Delikatnie wyciągnij jelito za pomocą kleszczy i trzymaj je na gazie.
3. Zidentyfikuj żyłę wrotną na podstawie jej lokalizacji i dobrze ją wyeksponuj.
4. Przykryj jelito ciepłą gazą mokrą od soli fizjologicznej podczas całego zabiegu.
Wprowadzić wstępnie załadowaną igłę strzykawki insulinowej z wyspami trzustkowymi przez żyłę wrotną w pobliżu dwunastnicy (ryc. 1B). W tym celu należy przytrzymać igłę otworem (skosem) skierowanym w dół i ustawić kąt powierzchni otworu równolegle do ściany żyły wrotnej przed przebiciem przez ścianę.
1. Pociągnąć za tłok, aby pobrać trochę krwi (20-50 μl) do strzykawki, aby najpierw wymieszać wyspy trzasnkowe.
2. Powoli wprowadzaj wysepki do żyły wrotnej, wielokrotnie ciągnąc i popychając zanurzenie.
3. Umieścić kawałek pianki żelowej (o wymiarach około 0,5 cm x 0,5 cm) tak, aby pokryć miejsce wstrzyknięcia.
4. Dociśnij piankę żelową bawełnianą końcówką, jednocześnie wyciągając igłę z żyły wrotnej.
5. Kontynuuj naciskanie żelu przez około 2 minuty, aby upewnić się, że nie ma aktywnego krwawienia.
6. Przewróć bawełnianą końcówkę na wierzch i odsuń ją od pianki żelowej, aby upewnić się, że pianka żelowa dobrze zakrywa żyłę wrotną.

Metoda B: (zatamować krwawienie z poduszeczki tłuszczowej, Rysunek 1C)

Dokładnie odsłoń żyłę wrotną.
1. Użyj dwóch bawełnianych końcówek, aby przytrzymać odsłoniętą żyłę wrotną zarówno z lewej, jak i prawej strony.
2. Zidentyfikuj poduszeczkę tkanki tłuszczowej między dwunastnicą a żyłą wrotną.
3. Przeniknąć przez poduszeczkę tłuszczową przed wprowadzeniem igły do żyły wrotnej (ryc. 1D).
4. Zaparzyć wysepki, postępując zgodnie z podobną procedurą opisaną powyżej w metodzie A.
5. Wyciągnij igłę, dociskając tłuszcz bawełnianą końcówką.
6. Kontynuuj naciskanie na poduszeczkę tłuszczową przez 1 minutę po wyjęciu igły.
Po upewnieniu się, że nie ma krwawienia z żyły wrotnej, delikatnie przywróć jelito do jamy otrzewnej w pierwotnym położeniu.
Pozostawić 0,5 ml ciepłej soli fizjologicznej (36-37 °C) w jamie brzusznej przed zamknięciem.
nuta: Ciepła sól fizjologiczna ułatwia pooperacyjne przemieszczanie jelit i rekonwalescencję oraz zapobiega martwicy jelit.
Zamknij warstwę mięśniową szwem 5-0.
Zamknij warstwę skóry szwem 4-0.
Umieść mysz w czystej klatce na poduszce grzewczej, aż do całkowitego wyzdrowienia ze znieczulenia.
Kontynuuj podawanie leku przeciwbólowego (np. buprenorfiny 0,1 mg/kg i.p.) co 12 godzin i dodatkowego ogrzewania przez 48 godzin po zabiegu.
UWAGA: Procedura przeszczepu wysp trzustkowych trwa około 15-20 minut.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rycina 1: Ilustracja procedur przeszczepu wysp trzustkowych wewnątrz wątroby.(A, C). Schematy kluczowych etapów stosowanych w metodzie A i metodzie B. (B, D). Wyspy trzustkowe wstrzykiwano bezpośrednio przez żyłę wrotną (C) lub pośrednio przez oklepywanie tłuszczu (D).