Instalacja okna obrazowania przyżyciowego trzustki w modelu mysim: zintegrowane okno obrazowania trzustki do poklatkowego obrazowania in vivo mikrostruktury mysiej trzustki

Streszczenie

Źródło: Park, I. et al. Stabilizowana podłużna wizualizacja trzustki na poziomie komórkowym in vivo w modelu mysim z oknem obrazowania przyżyciowego trzustki. J. Vis. Exp. (2021)

Ten film demonstruje procedurę wszczepienia okna obrazowania trzustki w celu oddzielenia trzustki od jelit w celu podłużnego obrazowania poklatkowego w wysokiej rozdzielczości mikrostruktury trzustki.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Chirurgia

1. Przygotuj sterylną platformę chirurgiczną i wysterylizuj powierzchnie 70% etanolem.|
   nuta: W przypadku sesji obrazowania podłużnego niezbędna jest technika aseptyczna.
2. Znieczulenie myszy mieszaniną tiletaminy/zolazepamu (30 mg/kg) i ksylazyny (10 mg/kg).
   nuta: Zaleca się stosowanie tiletaminy/zolazepamu zamiast ketaminy ze względu na jej niekorzystny wpływ na hiperglikemię. Do celu eksperymentu należy dobrać optymalne znieczulenie.
3. Monitoruj temperaturę ciała za pomocą sondy doodbytniczej z poduszką grzewczą sterowaną homeotermicznie.
4. Ogol lewy bok myszy i nałóż trzy rundy naprzemiennego peelingu na bazie alkoholu i jodu.
   nuta: Jeśli używany jest krem do depilacji, nie pozostawiaj go dłużej niż 1 minutę, aby uniknąć oparzeń chemicznych.
5. Wykonaj 1,5 cm nacięcie na lewym boku myszy i wypreparuj skórę i mięśnie.
6. Wykonaj szew sznurkowy z czarnym lub nylonowym szwem 4-0 na marginesie nacięcia.
7. Użyj mikro retraktora na nacięciu i delikatnie odsłoń śledzionę.
8. Ostrożnie połącz śledzionę za pomocą kleszczy pierścieniowych i zidentyfikuj trzustkę.
9. Umieść okienko po boku myszy i przeprowadź śledzionę i trzustkę przez otwartą przestrzeń okna. Manipulacja trzustką musi być bardzo delikatna, ponieważ może spowodować krwawienie lub zapalenie trzustki.
   nuta: Niestandardowy projekt okienka obrazowania przyżyciowego trzustki w celu odizolowania trzustki od jelita w jamie brzusznej (ryc. 1A, B).
10. Delikatnie umieść trzustkę na płytce okienka obrazowego; śledziona zostanie umieszczona na otwartej przestrzeni okienka.
11. Nałóż krople kleju cyjanoakrylowego N-butylu na margines okienka obrazowania.
    1. Aby zminimalizować ilość nałożonego kleju, do aplikacji należy użyć igły do cewnika 31 G. Jeśli ilość kropli jest duża, tkanka przypadkowo przylgnie do okna lub szkła nakrywkowego.
12. Delikatnie przyłóż okrągłe szkło nakrywkowe o średnicy 12 mm do krawędzi okienka obrazowania.
13. Pociągnij pętlę do szwów, aby pasowała do bocznego rowka okna i zawiąż ją trzy razy.
14. Przetnij maksymalne proksymalne miejsce węzła, aby zapobiec przerwaniu ciasnych szwów, gdy te myszy nie śpią.
15. Pozwól myszom dojść do siebie po znieczuleniu (2-3 godziny) i wstrzyknij ketoprofen (5 mg/kg, podskórnie w luźną skórę u podstawy szyi lub biodra zwierzęcia) w celu złagodzenia bólu. Ponownie oceniaj objawy bólu co 12 godzin, a ketoprofen należy rozważać co 24 godziny przez 1-3 dni.
    nuta: Analgezja wpływa na wydzielanie insuliny w odpowiedzi na glukozę. Wybór i czas leczenia analgezyjnego muszą być zindywidualizowane do celów doświadczalnych.
16. Umieść mysz w klatce z wystarczającą ilością ściółki, aby uniknąć kontaktu okna z klatką. Unikaj trzymania domu z myszami bez operacji okna.

Wyniki

Rysunek 1. Projekt i zdjęcie okienka obrazowania przyżyciowego trzustki. (A) Widok 3D i przekrój okienka obrazowania przyżyciowego trzustki. (B) Przednie i tylne zdjęcie okienka obrazowania trzustki.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Okulary nakrywkowe okrągłe	Lotnisko Marienfeld	Numer katalogowy: 111520	Szkło nakrywkowe do okienka obrazowania trzustki
Nożyczki do tęczówki	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	S-1107-10	Ten produkt można wymienić na produkt innej firmy
Loctite 401	Henkel	Rejon 401	Klej cyjanoakrylowy N-butylu
Uchwyt na mikroigłę	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	H-1126-10	Ten produkt można wymienić na produkt innej firmy
Mikro retraktor	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	Numer katalogowy 17004-03	Ten produkt można wymienić na produkt innej firmy
Mikrokleszcze	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1034	Ten produkt można wymienić na produkt innej firmy
Nylon 4-0	AILEE	Zobacz materiał NB434	Szew niewchłanialny
Omnican N 100 30G	B BRAUN	FT9172220S	W przypadku cewnika naczyniowego należy używać tylko części igły
Okno obrazowania trzustki	Inżynieria Geumto	Na zamówienie	Okno obrazowania trzustki - na zamówienie
Apartament fizjoterapeutyczny	Naukowy Kent	Zobacz materiał PS-02	Hometermiczny regulator temperatury
Kleszcze pierścieniowe	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1090-3	Ten produkt można wymienić na produkt innej firmy
Rompun	Bayer	Rompun	Środek znieczulający
Zoletil powiedział:	Wirus Virbac	Zoletil 100	Środek znieczulający
BALB/C Nago	OrientBio	BALB/C Nago	BALB/C Nago

TGL powiedział: