Resekcja wierzchołkowa modelu myszy noworodkowej: zabieg chirurgiczny mający na celu amputację wierzchołka komory w celu zbadania potencjału regeneracyjnego w sercu noworodka myszy

Streszczenie

Źródło: Li, Y. et al. Przeszczepianie makrofagów sercowych u noworodków myszy do dorosłych myszy. J. Vis. Exp. (2021).

W tym filmie pokazujemy procedurę chirurgicznego usunięcia wierzchołka lewej komory serca noworodka myszy.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Operacja resekcji wierzchołkowej u noworodka 1-dniowej myszy Cx3cr1 ^GFP/+ (tło C57BL/6)

1. znieczulenie
   1. Wyjmij wszystkie szczeniaki myszy z klatek i umieść je w czystym, suchym pudełku.
   2. Osadź każdą mysz w lodzie na około 2-3 minuty. Upewnij się, że między lodem a szczeniakiem myszy znajduje się cienka bariera, taka jak lateks lub gaza, aby zapobiec odmrożeniom.
   3. Zidentyfikuj wystarczające znieczulenie, obserwując następujące objawy: blada skóra, brak ruchu kończyn i brak odruchu pedałowania.
2. Torakotomia
   1. Wstępnie schłodzić brązową platformę operacyjną przez noc w temperaturze -20 °C, aby pomóc w utrzymaniu znieczulenia.
   2. Wyjmij znieczuloną mysz z pojemnika na lód i połóż ją na brązowej platformie operacyjnej. Zakotwicz mysz na platformie operacyjnej w pozycji leżącej na plecach za pomocą medycznej taśmy klejącej.
   3. Umieść platformę operacyjną z myszą na niej pod stereoskopem.
   4. Zdezynfekuj klatkę piersiową myszy za pomocą podkładki przygotowawczej nasączonej betadyną i 70% alkoholem lub zgodnie z polityką instytucji.
   5. Naciąć skórę z nacięciem o średnicy 1 cm w czwartym obszarze międzyżebrowym jamy klatki piersiowej, a następnie oddzielić mięśnie międzyżebrowe za pomocą nożyczek mikrochirurgicznych, aż do uzyskania dostępu do serca.
   6. Naprzemiennie uciskaj klatkę piersiową i brzuch za pomocą dwóch kleszczy, aż serce zostanie wyjęte z klatki piersiowej bez żadnych uszkodzeń mechanicznych.
   7. Ustaw żebra poniżej i powyżej małego nacięcia jako naturalne unieruchomienie serca.
3. Resekcja wierzchołka komory
   1. Zlokalizuj wierzchołek lewej komory. Wytnij tkankę wierzchołka komory o średnicy 1 mm za pomocą nożyczek do irydektomii pod stereoskopem.
   2. Upewnij się, że lewa komora komory jest odsłonięta i zacznij sączyć.
   3. Delikatnie dociśnij serce z powrotem do jamy klatki piersiowej za pomocą bawełnianego wacika.
   4. Zszyj mięśnie, żebra i skórę za pomocą 8-0 Szwy prolenowe.
   5. Po operacji dokładnie wyczyść mysz.
4. Opieka pooperacyjna
   1. Przenieś mysz z platformy operacyjnej na koc grzewczy o temperaturze 37 °C, aby rozgrzać ciało natychmiast po operacji.
   2. Potwierdź anabiozę myszy, obserwując następujące objawy: spontaniczne przywrócenie oddychania, zmiana koloru skóry z bladego na różowy i ruch kończyn.
   3. Zabierz operowaną mysz z powrotem do matki, gdy wyzdrowieje.
   4. W razie potrzeby zmieszaj operowaną mysz z materiałami gniazdowymi matki.
      nuta: Ważne jest, aby usunąć wszystkie 1-dniowe młode od matki na raz, a następnie zwrócić je wszystkie naraz po odzyskaniu wszystkich szczeniąt.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Zestaw do dysocjacji serca u noworodków	Miltenyi Bio Tech, Teterow, Niemcy	130-098-373