Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Chirurgiczne zakłócenie układu limfatycznego mysiego ogona
- Użyj ośmiu tygodniowych myszy C57BL/6 o równym rozkładzie płci.
- Umieść mysz w znieczuleniu ogólnym w komorze indukcyjnej z 3-4% izofluranem w 100% tlenie, a następnie sedacją podtrzymującą w 1-3% podczas zabiegu.
- Podawać podskórnie 0,5 mg/kg buprenorfiny o przedłużonym uwalnianiu (SR) w celu kontroli bólu.
nuta: Dodatkowe leki przeciwbólowe podawane postop: karprofen raz na 24 h przez co najmniej 48 h oraz bupiwakaina raz po wykonaniu nacięcia lub przed jego zamknięciem, aplikowane przez kapanie na brzegi skóry (utrzymuje się do 4 – 6 h).
- Ustaw mysz grzbietowo i przygotuj ogon 70% alkoholem izopropylowym.
- Przed zabiegiem zmierzyć średnicę ogona w odstępach co 5 mm, zaczynając 20 mm od podstawy ogona za pomocą suwmiarki. Pomiary te zostaną wykorzystane do obliczenia objętości przy użyciu równania ściętego stożka.
- Zaznaczyć wycięcie o obwodzie 3 mm na ogonie w odległości 20 mm od podstawy.
- Wykonaj skrupulatne wycięcie skóry o pełnej grubości 3 mm za pomocą sterylnego ostrza chirurgicznego (rozmiar 15), pozostawiając całe znajdujące się pod nią naczynia krwionośne nienaruszone pod mikroskopijnym powiększeniem chirurgicznym. Naciąć górny znak obwodowy (20 mm od podstawy ogona) najpierw przez skórę właściwą, a następnie nacięcie na całej długości obwodu 3 mm dystalnie do pierwszego nacięcia
- Wykonaj prostopadłe pionowe nacięcie o pełnej grubości, aby połączyć dwa nacięcia. Użyj drobnoziarnistego podbieracza, aby uchwycić krawędź natarcia i użyj mikronożyczek, aby ostrożnie wypreparować głęboko w płaszczyźnie jałowej do skóry właściwej i powierzchownie do żyły przydankowej.
- Wstrzyknąć 0,1 ml błękitu izosulfanowego (1%) podskórnie proksymalnie do końca ogona.
- Zidentyfikuj dwa kanały limfatyczne przylegające do bocznych żył ogonowych pod mikroskopem operacyjnym. Naczynia limfatyczne będą niebieskie z powodu wstrzyknięcia izosulfanu. Przeciąć naczynia limfatyczne za pomocą prostych nożyczek mikrochirurgicznych. Użyj nożyczek, aby ostrożnie wypreparować płaszczyznę między żyłą boczną a limfatyczną. Następnie przełóż końcówkę jednego ostrza nożyczek między naczyniem limfatycznym a żyłą boczną i zamknij ostrza, aby przeciąć naczynie limfatyczne
.
- Opatruj ranę ogona sterylnym, przylegającym, przezroczystym opatrunkiem. Codziennie sprawdzaj nacięcia pooperacyjne, aby upewnić się, że nie są zakażone lub krwawiące, i zapewnij pielęgnację ran przez 2 tygodnie.
- Trzymaj zwierzęta pojedynczo, aby zapobiec dalszym urazom ogona i zapobiec gryzieniu się zwierząt, co mogłoby prowadzić do powikłań chirurgicznych.
