Kolonoskopowy model rany mysiej sterowanej: metoda izolowania łożyska rany wywołanej biopsją od jelita grubego, aby zrozumieć proces gojenia

Streszczenie

Źródło: Montrose, D. C., et al. Wykonywanie biopsji szczyptowych pod kontrolą kolonoskopii u myszy i ocena kolejnych zmian w tkankach. J. Vis. Exp. (2021).

W tym filmie opisujemy procedurę izolowania łożyska rany wywołanego kolonoskopią w odpowiednim momencie do szczegółowej analizy molekularnej. Analiza ta pomaga zrozumieć proces gojenia się ran w stanach zapalnych przewodu pokarmowego.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Pobranie łożyska rany do analizy molekularnej

1. Poddaj mysz eutanazji za pomocą uduszenia CO₂ , a następnie zwichnięcia szyjki macicy (lub równoważnej techniki) w wybranym dniu po biopsji.
2. Zbierz dystalną część okrężnicy, otwierając skórę i mięśnie brzucha, aby odsłonić jamę ciała. Umieść zamknięte nożyczki pod okrężnicą i delikatnie unieś, aby uwolnić ją z leżącej poniżej krezki, a następnie przetnij okrężnicę w jej środku i przy odbycie, aby usunąć ją z myszy.
3. Wypłucz zawartość kału za pomocą igły do szczurów przymocowanej do strzykawki o pojemności 20 ml wypełnionej lodowatym 1x PBS, a następnie połóż okrężnicę na bibule filtracyjnej.
4. Rozetnij okrężnicę wzdłużnie na bibule filtracyjnej, upewniając się, że strona krezkowa przylega do bibuły filtracyjnej. Nałóż 0,2% błękitu metylenowego na błonę śluzową za pomocą pipety do wyciskania, gdy tkanka nadal znajduje się na bibule filtracyjnej, a następnie odcedź nadmiar błękitu metylenowego. Obejrzyj okrężnicę pod mikroskopem preparacyjnym i zlokalizuj łożysko rany (ryc. 1A).
5. Używając 4-calowych nożyczek do mikro tęczówki, przeciąć wokół krawędzi łożyska rany (ryc. 1A, przerywane kółko), uważając, aby nie przeciąć warstwy mięśniowej (chyba że mięsień jest pożądany) i przenieś wypreparowane łożysko rany do rurki za pomocą cienkiej pęsety do szybkiego zamrażania lub pożądanej metody przechowywania.
   nuta: Ilość tkanki pobranej w ten sposób jest wystarczająca do ekstrakcji RNA do sekwencjonowania RNA lub równoważnej analizy.

Wyniki

Rysunek 1: Obrazy ex vivo i przekroje łożyska rany. (A) Okrężnica została pobrana od myszy 2 dni po biopsji, wybarwiona 0,2% błękitem metylenowym i zobrazowana pod mikroskopem preparacyjnym. Przerywany okrąg wskazuje krawędzie łożyska rany. linia wskazuje właściwe miejsce do przecięcia dna rany/okrężnicy na pół przed osadzeniem w celu cięcia. (B) Reprezentatywny obraz wybarwionego H&E fragmentu ...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Kleszcze do biopsji, 3 Fr	Karl Storz	61071ZJ
izofluoran	Chciwość	Numer katalogowy 2905
błękit metylenowy	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał M9140
Nożyczki z mikro tęczówką	Integra	18-1619
Skalpal z ostrzem #10	Hill-Rom	Numer katalogowy: 372610