$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. Metoda kapsułkowa do inaktywacji w zabezpieczeniu biologicznym za pomocą 2% aldehydu glutarowego, a następnie barwienia ujemnego w laboratorium BSL-2
- Procedura inaktywacji wirusa.
- Wewnątrz zabezpieczonego biologicznie BSC dobrze wymieszać zawiesinę wirusa z tą samą objętością 4% aldehydu glutarowego, aby uzyskać końcowe stężenie 2% aldehydu glutarowego.
ostrożność: Aldehyd glutarowy jest niebezpieczną substancją chemiczną i wymaga odpowiedniej ochrony. Aldehyd glutarowy może być stosowany przez krótki czas w normalnym BSC, ale rozszerzony otwarty odczynnik wymaga pracy w kanałowym BSC lub okapie oparów chemicznych.
- Dezaktywować wirusy za pomocą utrwalacza przez co najmniej 24 godziny przed zapakowaniem, odkażeniem i przetransportować do zakładu BSL-2 EM.
- W urządzeniu BSL-2 EM odessać mieszaninę wirusa i utrwalacza do kapsułki zawierającej dwie siatki TEM, przymocowanej do pipety.
- Pipetę należy ustawić poziomo na 10 minut, z kratkami ustawionymi poziomo.
nuta: Ma to na celu zapewnienie równomiernego rozmieszczenia cząsteczek wirusa na siatkach TEM.
- Podnieść pipetę i nacisnąć tłok, aby usunąć wirusa do pojemnika na odpady. Odessać 40 μl wody dI do kapsułek i wyrzucić ją do pojemnika na odpady na 3 cykle płukania.
- Odessać 40 μl 1% octanu uranylu (UA) lub 1% kwasu fosforomanganowego potasu (PTA) do kapsułek przez 30 s.
nuta: Czas barwienia wahał się od 10 s do 1 min w zależności od próbki wirusa.
ostrożność: UA jest emiterem alfa i toksyną kumulatywną. Obchodź się z nim z odpowiednią ochroną.
- Wyjmij kapsułkę z pipety i osusz siatki, dotykając krawędzią kratki kawałka bibuły filtracyjnej. Wysuszyć siatki na powietrzu i przechowywać je do późniejszego obrazowania TEM.