Barwienie niebieskim toluidyny odcinków nerwów obwodowych: technika barwienia mielinowanych włókien nerwowych w celu wizualizacji struktury nerwów obwodowych

Streszczenie

Źródło: Ghnenis, A. B. et al., Barwienie niebieskim toluidyny skrawków osadzonych w żywicy do oceny morfologii nerwów obwodowych.J. Vis. Exp.(2018)

Ten film demonstruje technikę barwienia osadzonych w żywicy, leczonych tetratlenkiem osmu odcinków nerwów obwodowych szczurów za pomocą błękitu toluidynowego. Barwione skrawki nerwów pomagają uwidocznić drobne struktury nerwów obwodowych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Niebieskie barwienie toluidyny

1. Przygotuj 1% roztwór błękitu toluidynowego, rozpuszczając 2 g boranu sodu w 100 ml wody dejonizowanej, następnie dodaj 1 g błękitu toluidynowego i mieszaj aż do rozpuszczenia. Przefiltrować roztwór za pomocą bibuły filtracyjnej (wielkość porów: 11 μm) i przechowywać roztwór w nieprzezroczystej butelce w temperaturze pokojowej przez okres do dwóch tygodni.
2. Za pomocą plastikowej pipety lub mikropipety dodaj kroplę roztworu błękitu toluidynowego na wierzch odcinków nerwowych i pozostaw na 20-30 sekund.
3. Spłucz nadmiar roztworu błękitu toluidynowego, delikatnie zanurzając szkiełka w słoiku z wodą dejonizowaną i powtórz 3-4 razy, aż skrawki będą czyste. Szkiełka należy suszyć przez co najmniej 15 minut w temperaturze 60 °C lub przez noc w temperaturze pokojowej, a następnie przykryć sekcje szkiełkiem nakrywkowym przy użyciu zwykłego środka montażowego. Natychmiast sprawdź zamontowane szkiełka lub przechowuj w temperaturze pokojowej.
4. Zbadaj pod mikroskopem świetlnym. Soczewka immersyjna z olejkiem 100X jest zalecana do szczegółowych obrazów używanych do obliczania współczynników g.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Błękit toluidynowy O	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał T3260
Tetraboran sodu dekahydrat	Acros Organics	205950010
Szklana osłona mikroskopu	Fisher Naukowy	12545102
Mikroprowadnice VWR, Superfrost Plus	Firma VWR	Numer telefonu 48311-703
Piekarnik o mocy 100 W	Milipory	6350115
Bibuła filtracyjna Whatman	Sigma-Aldrich	WHA10010155
Mikroskop fluorescencyjny Olympus			Podwójna kolorowa i monochromatyczna kamera CCD, DP80
Pipeta plastikowa 3 ml	Sigma-Aldrich	Z331740