Barwienie srebrem fluorescencyjnym: technika wizualizacji białka całkowitego w żelach poliakrylamidowych

Streszczenie

Źródło: Wong, A. Y. H. et al. Fluorescencyjne barwienie srebrem białek w żelach poliakrylamidowych. J. Vis. Exp. (2019 rok)

W tym filmie demonstrujemy metodę barwienia srebrem żeli poliakrylamidowych do wizualizacji całkowitego białka za pomocą sond fluorogenicznych.

Protokół

1. Przygotowanie żelu

1. Wykonaj SDS-PAGE z 4% - 12% żelami białkowymi Bis-Tris (1 mm, 15-dołkowymi) przy użyciu mini zbiornika żelowego wypełnionego buforem kwasu 2-(N-morfolino)etanosulfonowego (MES).
2. Rozcieńczyć próbki mieszaniną wody destylowanej, buforu dodecylosiarczanu litu (LDS) i środka redukującego próbkę.
3. Załaduj pierwszą linię podwójną ilością bulionu (10 μl), a następnie normalną ilością bulionu (5 μl), a następnie serią dwukrotnych rozcieńczeń wywaru (13 rozcieńczeń, od 2x do 8192x).
4. Uruchom żel przy stałym napięciu 200 V przez 30 minut.

2. Utrwalenie żelu

1. Po e....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Bufor próbki LDS (4X)	Thermo Fisher Naukowy	NP0007	Odczynnik
4-12% Bis-Tris Żele białkowe, 1,0 mm, 15-dołkowe	Thermo Fisher Naukowy	NP0323BOX	Żel prefabrykowany
Środek redukujący próbkę (10X)	Thermo Fisher Naukowy	NP0004	Odczynnik
Bufor do biegania MES SDS (20X)	Thermo Fisher Naukowy	NP0002	Odczynnik
Mini zbiornik żelu	Thermo Fisher Naukowy	Nr kat. A25977	sprzęt
Zasilacz 300 W (230 VAC)	Thermo Fisher Naukowy	Konsola PS0301	sprzęt
Niebarwiona drabinka białkowa	Thermo Fisher Naukowy	Numer katalogowy: 26614	próbka
Azotan srebra	Sigma-Aldrich	31630-25G-R	Odczynnik
etanol	Bragg i spółka	Numer katalogowy: 42520J	Odczynnik
kwas octowy	J.T. Bakera	Numer katalogowy: 103201A	Odczynnik
Synteza Milli-Q A10	Merk	-	Dostarcza wodę o pojemności 18,2 MΩ.cm
System dokumentacji żeli (model c600)	Biosystemy Azure	-	sprzęt

powiedział: powiedział: powiedział: