Źródło: Dai, Q., et al. Test hodowli osteoklastów myszy oparty na Ten film demonstruje technikę barwienia kwasową fosfatazą odporną na winian w celu wykrycia obecności granulek zawierających TRAP wewnątrz osteoklastów. Technika ta tworzy purpurowe osady granulek barwnika w cytoplazmie osteoklastów, czyniąc je widocznymi pod odwróconym mikroskopem.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Barwienie kwaśną fosfatazą odporną na winian: technika in vitro do wykrywania hodowanych osteoklastów zawierających enzym TRAP
7.8K wyświetleń
⸱
8 lipca 2025
W tym artykule
Streszczenie
Protokół
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Przygotowanie
- Wygeneruj myszy z delecją specyficzną dla osteoklastów Raptor (Raptorfl / fl; Ctsk-cre, dalej RapCtsk) przez kojarzenie myszy Raptor fl/fl z myszami Ctsk-cre. Użyj myszy Raptor fl / fl jako kontroli WT w tym badaniu.
- Miej pojemnik z lodem, aby utrzymać odizolowaną kość.
- Przygotuj pożywkę hodowl....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Rycina 1: Reprezentatywny widok osteoklastów.(A) Gigantyczne osteoklasty zaobserwowane w jasnym polu w dniu 6. Czerwona linia wyznaczała granicę osteoklastów. (B) Typowo gigantyczny, wielojądrowy, TRAP-dodatni (winnoczerwony) osteoklast. strzałka wskazywała dwa jądra wielojądrowego osteoklastu.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Nie stwierdzono konfliktu interesów.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Myszy Raptorfl/fl | Laboratorium Jacksona | Numer katalogowy: 13188 | |
| Myszy Ctsk-cre | prezent od S. Kato, Uniwersytet Tokijski, Tokio, Japonia | ||
| α-MEM | Corning | 10-022-CVR | |
| glutamina | Gibico (powiat Gibico | 25030081 | |
| Penicylina streptomycyna | Gibico (powiat Gibico | 15140122 | |
| Surowica cielęca płodu | BioInd | 04-001-1A | |
| Rekombinowane mysie białko M-CSF | Prace badawczo-rozwojowe | Q3U4F9 | |
| Rekombinowane mysie białko RANKL | Prace badawczo-rozwojowe | Q3TWY5 | |
| Bufor do lizy RBC | Beyotime | Zobacz materiał C3702 | |
| Trypan niebieski | Sigma-Aldrich | 302643 | |
| aceton | Shanghai Chemical Co., Sp. z o.o. | ||
| Roztwór cytrynianu | Sigma-Aldrich | Z numerem 915 | |
| Roztwór formaldehydu | Shanghai Chemical Co., Sp. z o.o. | ||
| Zestaw fosfatazy kwaśnej, leukocytów (TRAP) | Sigma-Aldrich | Zobacz materiał 387A-1KT | |
| Szybki roztwór bazowy GBC | Sigma-Aldrich | 3872 | |
| Roztwór azotynu sodu | Sigma-Aldrich | Z numeru 914 | |
| Roztwór fosforanu naftolu AS-BI | Sigma-Aldrich | Numer katalogowy: 3871 | |
| Roztwór octanu | Sigma-Aldrich | 3863 | |
| Roztwór winianu | Sigma-Aldrich | 3873 | |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami firmy Dulbecco | Corning | 21-031-CVR | |
| 37% formaldehydu | Xilong naukowy | ||
| Zobacz materiał IX71 | Olympus | ||
| Strzykawka 0,45 mm | |||
| Nożyczek | |||
| Kleszcz komarów |
