Barwienie papanicolaou: technika wizualizacji cech cytologicznych komórek jajowodów

Streszczenie

Źródło: Chen, H. et al. Cytologia jajowodu jako obiecujące narzędzie do wczesnego wykrywania raka jajnika. J. Vis. Exp. (2017).

W tym filmie demonstrujemy zmodyfikowany protokół barwienia Papanicolaou do badania cytologii jajowodów. Technika ta może być wykorzystana do wizualizacji cech cytologicznych złośliwych i niezłośliwych komórek nabłonka jajowodów.

Protokół

1. Zmodyfikowany protokół barwienia Papanicolaou

1. Wybarwić szkiełka rozmazane tkankami, uruchamiając automatyczną procedurę barwienia bez użycia metody ginekologicznej, jak pokazano w tabeli 1.
   UWAGA: Metoda barwienia stanowi modyfikację techniki barwienia Papanicolaou, którą rutynowo stosujemy w przypadku próbek nieginekologicznych. Używamy automatycznego procesora tkanek do barwienia niektórych szkiełek. W tym badaniu wybraliśmy procedurę barwienia bez użycia ginekologii zamiast procedury barwienia ginekologicznego. Stosowana eozyna to EA-65, zamiast EA-50 stosowanej do próbek ginekologicznych (próbka cytologii). Ponadto OG-6 w procedurze barwienia ginekologicznego, która służy głównie do barwienia komórek płaskonabłonkowych, nie jest objęty procedurą barwienia, ponieważ oczekuje się, że w tym badaniu nie zostaną zaobserwowane żadne komórki płaskonabłonkowe. EA65 (Eosin Azure) to roztwór przeciwbarwiący składający się z 3 barwników: Eosin Y, Fast green FCF i Bismarck brown Y. Procedurę przedstawiono w tabeli 1.
2. Wykonaj ręczną szybką procedurę barwienia cytologicznego w następujący sposób:
   1. Zanurz szkiełko posmarowane tkanką w 95% etanolu 10 razy, przy czym każde zanurzenie trwa około 1 s.
   2. Zanurz szkiełko w H₂O 10 razy, przy czym każde zanurzenie trwa około 1 s.
   3. Wyłaniaj szkiełko w hematoksylinie przez 10 - 60 s.
   4. Zanurz szkiełko w H₂O 10 razy, przy czym każde zanurzenie trwa około 1 s.
   5. Zanurz szkiełko w 95% etanolu 10 razy, przy czym każde zanurzenie trwa około 1 s.
   6. Wysuwanie zjeżdżalni w EA65 na 1 - 3 minuty.
   7. Zanurz szkiełko w H₂O 10 razy, przy czym każde zanurzenie trwa około 1 s.
   8. Zanurz szkiełko w 95% etanolu 10 razy, przy czym każde zanurzenie trwa około 1 s.
   9. Zanurz szkiełko w ksylenie, aż stanie się przezroczyste.
      UWAGA: Jest to zmodyfikowana procedura barwienia Papanicolaou. Ta metoda jest stosowana jako szybsza metoda barwienia w przypadkach o ograniczonym czasie lub przestrzeni, takich jak aspiracja cienkoigłowa na miejscu i próbki STAT. Ta procedura zapewnia porównywalną jakość barwienia, jak zautomatyzowana procedura barwienia Non-Gyn. Procedurę przedstawiono w tabeli 2.

Tabela 1: Etapy barwienia bez ginekologii.

95% etanolu	Czas trwania: 5 min
H2O	10 sekund
Hematoksyliną	15 s - 3 min
Destylowany H2O	Czas trwania: 5 min
95% etanolu	30 sekund
Zobacz materiał EA65	2 - 5 min
95% etanolu	30 sekund
95% etanolu	30 sekund
100% etanol	30 sekund
100% etanol	30 sekund
ksylen	30 sekund
ksylen	Czas trwania: 5 min

Tabela 2: Ręczne szybkie kroki barwienia cytologicznego.

95% etanolu	10 zanurzeń
H2O	10 zanurzeń
Hematoksyliną	10 sek-1 min
Destylowany H2O	10 zanurzeń
95% etanolu	10 zanurzeń
Zobacz materiał EA65	1 - 3 minuty
95% etanolu	10 zanurzeń
100% etanol	10 zanurzeń
ksylen	Zanurzać, aż będzie klarowny

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Plama Papanicolaou, EA 65	Sigma Aldrich	HT40432
95% etanolu	Sigma Aldrich	652261
100% etanol	Sigma Aldrich	493538
ksylen	Sigma Aldrich	214736
Hematoksyliną	Sigma Aldrich	Zobacz materiał H9627