Barwienie trichromowe Massona Goldnera: technika wizualizacji kolagenu w skrawkach serca w celu wykrywania zwłóknienia układu krążenia

Streszczenie

Źródło: Valentin, J., et al. Histologiczna kwantyfikacja przewlekłego zawału mięśnia sercowego u szczurów. J. Vis. Exp.(2016).

Ten film demonstruje różnicowe barwienie włókien kolagenowych, jąder i cytoplazmy w tkance serca, aby zobrazować wzrost zwłóknienia związany z patologiami serca.

Protokół

1. Barwienie trichromowe Massona-Goldnera

1. Wycinać skrawki tkanek z bloków serca zatopionych w parafinie za pomocą ręcznego mikrotomu (grubość: 5 μm).
2. Wybarwić jedno szkiełko z każdej części serca dla każdego szczura (3 - 4 przekroje poprzeczne na szkiełko) za pomocą barwienia trichromowego Massona-Goldnera.
   1. Stopić szkiełka w temperaturze 60 °C w piekarniku. Pod wyciągiem odparafinować je w ksylolu dwukrotnie przez 10 minut każdy. Nawodnij je w 100% etanolu, 95% etanolu, 70% etanolu i wodzie destylowanej przez 3 minuty każde.
   2. Napraw je w roztworze Bouina na noc. Następnie płucz je pod bieżącą wodą z kranu przez 10 - 15 minut. Opłucz je w wodzie destylowanej. Inkubuj je w hematoksynie Mayera przez 3 minuty.
   3. Wyjmij szkiełka i pozostaw je w wodzie destylowanej na 5 minut. Następnie inkubuj je w kwasie Fuchsin-Ponceau przez 5 minut. Opłucz je w 1% kwasie octowym przez 1 min.
   4. Następnie inkubuj je w kwasie fosfomolibdenowym Orange G przez 1 min. Opłucz je w 1% kwasie octowym przez 1 min, inkubuj w jasnozielonym barwniku przez 10 min i płucz w 1% kwasie octowym przez 1 min.
   5. Odwodnić je w 70% etanolu (30 sekund), 95% etanolu (30 sekund) i 100% etanolu (5 minut). Nałóż jedną kroplę żywicznego podłoża mocującego na skrawki tkanki, przykryj je szkiełkami nakrywkowymi i pozostaw do wyschnięcia.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Hematoksylina Mayera	MHS32-1L	Sigma Aldrich
Kwas Fuchsin CI 42685	F8129-50G	Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin CI 16150	P2395-25G	Sigma Aldrich
Pomarańczowy G CI 16230	O3756-100G	Sigma Aldrich
Jasnozielony CI 42095	L5382-25G	Sigma Aldrich
Ksylol	10315083	Honeywell
Absolutny etanol	10303990	Honeywell
Mikroskop sterelogiczny	Zobacz materiał SM2800	Nikon
Formaldehyd	Numer katalogowy: 99340	Reactolab (Laboratorium Rolnicze)
Kaseta do osadzania	Zobacz materiał K113.1	Carla Rotha
Oprogramowanie do pomiaru obrazu Bersoft		Bersoft.com	Licencjonowane oprogramowanie