Barwienie czerwienią Kongo: technika wizualizacji osadów celulozy w sekcjach łodyg roślin

Streszczenie

Źródło: Pradhan Mitra, P., Loqué, D. Barwienie histochemiczne wtórnych elementów ściany komórkowej Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014).

W tym filmie demonstrujemy metodę barwienia czerwienią Kongo, aby uwidocznić osady celulozy w sekcjach łodygi Arabidopsis thaliana.

Protokół

1. Kongo Czerwone zabarwienie

1. Rozpuścić 0,5 g czerwieni kongijskiej w 100 ml wody destylowanej, aby przygotować 0,5% roztwór czerwieni kongijskiej.
2. Przenieść sekcje trzpienia do probówki mikrowirówkowej o pojemności 2,0 ml. Dodać 1 ml 0,5% roztworu czerwieni kongijskiej do probówki. Delikatnie odpipetować 0,5% roztwór czerwieni kongijskiej w górę i w dół, nie naruszając sekcji.
   UWAGA: Należy uważać, aby nie pipetować odcinków do końcówki pipety, ponieważ może to spowodować uszkodzenie sekcji.
3. Inkubować w temperaturze pokojowej przez 10 minut i powtórzyć pipetowanie. Następnie wykonaj kolejne 3 minuty inkubacji w temperaturze pokojowej.
4. Za pomocą pipety o pojemności 1 ml pobrać 700 μl 0,5% roztworu czerwieni kongijskiej. Dodaj 700 μl wody destylowanej, aby wypłukać czerwony roztwór kongo. Powtórz pranie 3-4 razy, aż roztwór myjący będzie klarowny.
5. Należy używać pipety o pojemności 1 ml z końcówką naciętą w taki sposób, aby można było łatwo odpipetować odcinki bez uszkodzeń. Delikatnie odpipetować skrawki do końcówki i na szkiełko mikroskopowe, a następnie przykryć je szkiełkiem nakrywkowym. Obserwować próbki na szkiełku mikroskopowym pod wpływem wzbudzenia światłem niebieskim przy użyciu filtra o pasmie przepustowym 560/40,
   UWAGA: Nie przechowuj skrawków w wodzie na długo przed analizą mikroskopową, ponieważ woda zmyje czerwień kongo w ciągu 10-30 minut.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Czerwony Kongo	Sigma	Zobacz materiał C6277	3,3'-[[1,1'-bifenylo]-4,4'-diylbis(azo)]bis(4-aminonaftaleno1-sulfonian) disodowy [numer CAS 573-58-0]
Probówki do mikrowirówek (0,6 ml)	Axygen Scientific	MCT-060-C
Kamera z chipem CCD bez mechanicznej migawki	Hamamatsu	Zobacz materiał C4742-95
Kolorowa kamera o dużej szybkości	Planowanie jakości	MikroPublisher 5.0 RTV
Oprogramowanie kamery	Urządzenia molekularne	MetaMorph w wersji 7.7.0.0
Wyobrażanie sobie anaylozy	Adobe	Photoshop CS4
Okulary z mikro osłoną, kwadratowe, nr 1	Firma VWR	Numer telefonu 48366-067	22 x 22 mm (7/8 x 7/8")-Szkła nakrywkowe są odporne na korozję, jednolicie grube i płaskie. Grubość nr 1 wynosi od 0,13 do 0,17 mm.
Mikroszkiełka matowe, 1 mm	Firma VWR	Numer telefonu 48312-003	75 x 25 mm - 1 mm
TX2 Kostka filtra	Księga Leica	11513851/11513885	Filtr stosowany do analizy czerwieni kongijskiej o paśmie przepustowym 560/40.