Wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa: technika wstępnego rozdzielania i oznaczania ilościowego lipidów z neutrofili

Abstract

Źródło: Brogden, G., et al. Metody badania zmian lipidowych w neutrofilach i późniejszego tworzenia pułapek zewnątrzkomórkowych neutrofili. J. Vis. Exp. (2017).

Ten film demonstruje technikę wstępnego oddzielania i ilościowego oznaczania lipidów od neutrofili pochodzących z ludzkiej krwi obwodowej. Technika ta pomaga we wstępnej ocenie docelowych analitów przed przystąpieniem do HPLC.

Protocol

1. Wysokosprawna chromatografia cienkowarstwowa (HPTLC) do półilościowego określenia ilości kilku lipidów, w tym cholesterolu, fosfolipidów i sfingomieliny

1. Przygotuj następujące cztery roztwory bieżące i roztwory barwiące.
   1. Roztwór 1: Wymieszaj octan etylu (26,6%), 1-propanol (26,6%), chloroform (26,6%), metanol (26,6%) i chlorek potasu (9,6%). Przygotować KCl, rozpuszczając 0,25 g KCl w 100 ml wody o jakości HPLC.
   2. Rozwiązanie 2: Wymieszaj n-heksan (73%), eter dietylowy (23%) i kwas cytrynowy (2%).
   3. Rozwiązanie 3: 100% n-heksanu.
   4. Przygotuj roztwór barwiący, mieszając wodę destylowaną (90 ml) z 7,5 g siarczanu mied....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
1-propanol	Sigma-Aldrich	Numer katalogowy: 33538
Strzykawka 10 μL	Hamilton	701 NR 10 μl
Dietylowy	Sigma-Aldrich	346136
Octan etylu	Carla Rotha	7336.2
Siarczan miedzi(II) pentahydrat	Merck	1027805000
chloroform	Carla Rotha	7331.1
Oprogramowanie CP ATLAS	Lazarsoftware (oprogramowanie lazarskie)	cyfra arabska
metanol	Carla Rotha	7342.1
n-heksan	Carla Rotha	7339.1
kwas fosforowy	Sigma-Aldrich	Numer katalogowy: 30417
Chlorek potasu	Merck	49 361 000
Żel krzemionkowy HPTLC 60	Merck	105553