Test chiralności komórek w kształcie pierścienia: technika in vitro do określania chiralności wielokomórkowej na podstawie wyrównania komórek na mikrowzorcach w kształcie pierścienia

Streszczenie

Źródło: Zhang, H. et al. A Micropatterning Assay for Measuring Cell Chirality. J. Vis. Exp. (2022)

W tym filmie opisujemy test chiralności komórek w celu określenia odchylenia wyrównania komórek w ograniczonej granicy geometrycznej, takiej jak mikrowzór pierścieniowy. Chiralność jest nieodłączną właściwością większości typów komórek i jest determinowana przez czynniki genetyczne i środowiskowe. Znajomość chiralności normalnej populacji komórek może pomóc w badaniach przesiewowych komórek leczonych lekami.

Protokół

1. Produkcja znaczków z polidimetylosiloksanu (PDMS)

1. Narysuj tablicę pierścieni w mikroskali za pomocą oprogramowania CAD, o średnicy wewnętrznej 250 μm i średnicy zewnętrznej 450 μm. Wzorzec używany w tym protokole to tablica 10 x 10 z odległością między pierścieniami 850 μm.
2. Wydrukuj przezroczystą maskę wzoru w żądanej rozdzielczości, korzystając z usługi drukowania masek firmy zajmującej się mikrofabrykacją (patrz Tabela materiałów).
   nuta: Udowodniono, że podane wymiary pierścienia sprawdzają się w przypadku wielu typów ogniw.
3. Przeprowadź fotolitografię w ultrafiolecie (UV) przy użyciu maski z....

Wyniki

Rysunek 1. Schemat mikrowzorców komórkowych. (A) Procedura mikrowytwarzania i drukowania mikrokontaktowego do modelowania komórek. Ujemna forma fotorezystu została wykonana przez sieciowanie fotorezystu w ultrafiolecie (UV) za pomocą maski zawierającej cechy mikrowzoru (1-2). Prepolimery elastomerowe z polidimetylosiloksanu (PDMS) odlewano na formę w celu wytworzenia stempli (3-4). .......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
200-procentowy etanol	Koptec	Procesor DSP-MD-43
System mikroskopowy BZX	Klucz	BZX-600
Zmodyfikowana pożywka orła Dulbecco (DMEM), wysoka zawartość glukozy	Gibco (firma Gibco)	11965092
Parownik wiązki elektronów	Temscal (Temscal	BJD-1800	Powłoka złoto-tytanowa
Surowica bydlęca płodu	Firma VWR	89510-186
Fibronektyna z osocza bydlęcego	Sigma	F1141-5MG
Szkiełka mikroskopowe szklane	Firma VWR	Numer katalogowy: 10024-048
Pęseta do szkła	Lek Exelta	390BSAPI (w
Złote granulki odparowujące	Międzynarodowe materiały zaawansowane	AU18
HS-(CH2)11-EG3-OH (EG3)	Prochimia	TH 001-m11.n3-0.2
MATLAB (MATLAB)	Matematyka	MATLAB_R2020b
Ogniwa NIH/3T3	Kontroler ATCC (Kontroler T	CRL-1658
Wyrównywacz kontaktowy OAI	OAI (Język OAI)	200	Fotolitografia UV
Oktadekanotiol (C18)	Sigma	Ø1858-25ML
Wytrząsarka orbitalna	Firma VWR	Numer katalogowy: 89032-088
Solanka fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS)	Międzynarodowy produkt badawczy	Zobacz materiał P32080-100T
Polidimetylosiloksan Sylgard 184	Dow Corning	DC4019862
Wafel krzemowy	Opłatek uniwersytecki	Identyfikator#809
Pirogronian sodu	Thermo fisher naukowy	Numer katalogowy: 11360-070
Fotorezystor SU-8 3050	Mikrochemik	Y311075 0500L1GL
Granulki odparowujące tytan	Międzynarodowe materiały zaawansowane	TI14
Maska przezroczystości (z funkcją)	Outputicity.com	N/a	Usługa drukowania masek
Trypsyna-EDTA (0,25%)	Thermo fisher naukowy	Numer katalogowy 25200-072

) powiedział: języku angielskim) powiedział: szt. powiedział: