Trójkomorowy test impedancji oparty na układzie: technika analizy w czasie rzeczywistym do oceny potencjału inwazyjnego komórek rakowych poprzez pomiar impedancji elektrycznej

Abstract

Źródło: Sharif, G. M. et al., Wykrywanie i przechwytywanie inwazyjnych subpopulacji komórek z kokultur w czasie rzeczywistym. J. Vis. Exp. (2022).

Ten film opisuje test inwazji przy użyciu trzykomorowej matrycy opartej na impedancji elektrycznej. Technika ta mierzy potencjał inwazyjny komórek nowotworowych pod wpływem rozpuszczalnych czynników wydzielanych przez rezydentne komórki zrębu w mikrośrodowiskach guza.

Protocol

1. Nowy projekt komory (Rysunek 1)

1. Otwórz nową dwukomorową płytkę analizatora komórek. Odłóż na bok górną komorę z elektrodami.
2. Za pomocą frezarki ogolić 2 mm dolnych studzienek w kształcie litery U płytki analizatora komórek.
3. Przymocuj membranę polieterosulfonową (PES) o wymiarach 2 cm x 7 cm z porami o wielkości porów 0,2 μm do dna ogolonych studzienek za pomocą kleju zabezpieczonego promieniami UV. Odczekaj 30 minut, aby upewnić się, że klej jest całkowicie utwardzony i obojętny.
4. Za pomocą frezarki wytnij dwie podłużne szczeliny (1,5 mm x 5,6 mm) po bokach, aby zatrzasnąć się w grzbietach nowo wyprodukowanej trzeciej komory....

Results

Rysunek 1: Obrazy komór matrycy i ich modyfikacji.

(A) Trzy komory użyte do budowy tablicy. Nie dokonano żadnych modyfikacji w górnej komorze, w której znajdują się elektrody. (B) Ze środkowych studzienek komorowych odcięto wysokość 2 mm i przymocowano membranę do otwartego dna; Z każdej strony dodano podłużne szczeliny (1,5 mm x 5,6 mm)........

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0,05% trypsyna-EDTA	Rybak termiczny	25300-054
klej	Klej optyczny Norland	NOA63
Albumina surowicy bydlęcej (BSA)	Sigma	Nr kat. A9418
Podnośnik komórek	Sarstedt	83.1832 Rozdział 1832
Toksyna z Vibrio cholerae	Rybak termiczny	Numer katalogowy: 12585-014
Płyta CIM	Agilent 5665817001		Płytka analizatora komórkowego
Kolagenaza z Clostridium histolyticum	Sigma	Zobacz materiał C0130
DMEM (DMEM)	Rybak termiczny	Numer katalogowy 11995-065
Zobacz materiał DMEM-F12	Rybak termiczny	Numer katalogowy 11875-093
Płodowa surowica bydlęca (FBS), inaktywowana termicznie	Omega Naukowa	FB-12
HEPESY	Rybak termiczny	15630106
Surowica końska (HS)	Gibco (firma Gibco)	Numer katalogowy 16050-122
Ludzki EGF	Peprotech	AF-100-15
Hydrokortyzon	Sigma	H4001
Insulina Transferyna Selen Etanoloamina (ITSX) (100x)	Rybak termiczny	51500056
Insulina, ludzka rekombinant, roztwór	Sigma	Zobacz materiał C8052
Fibroblasty J2	Komórka macierzysta (RRID:CVCL_W667)	Numer katalogowy: 100-0353
Preparat LymphoPrep	Komórka macierzysta	Numer telefonu 7851	Pożywka o gradiencie gęstości do izolacji komórek jednojądrzastych
Matrigel	Corning	Numer telefonu 354230	Matryca membrany podstawnej
MCFDCIS.com ogniwa (DCIS)	RRID:CVCL_5552
Ogniwa MDA-MB-231	RRID:CVCL_0062
frezarka			Bridgeport Seria 1 pionowy
Solanka fizjologiczna buforowana fosforanami (1x)	Rybak termiczny	10010049
Membrana polieterosulfonowa (PES)	Sterlitech (Sterlitech)	PCTF029030
Roztwór do lizy RBC	Komórka macierzysta	Numer katalogowy: 7800
Analizator RTCA DP	Agilent	3x16	Dwufunkcyjny analizator komórek
trypsyna	Sigma	Zobacz materiał T4799