Artykuł metodologiczny

Test zubożenia glukozy in vitro: oparta na fluorescencji metoda ilościowego określania wychwytu glukozy w komórkach za pomocą zewnątrzkomórkowego pomiaru wyczerpania glukozy

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Kumar, S. B. et al., Zewnątrzkomórkowe wyczerpanie glukozy jako pośrednia miara wychwytu glukozy w komórkach i tkankach ex vivo.J. Vis. Exp.(2022)

Ten film demonstruje test in vitro do pośredniego pomiaru wewnątrzkomórkowego wychwytu glukozy. Test wykorzystuje znakowany fluorescencyjnie analog glukozy w celu ustalenia korelacji między zewnątrzkomórkowym zubożeniem glukozy a wewnątrzkomórkowym wychwytem glukozy.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

UWAGA: Wszystkie procedury muszą być wykonywane w komorze bezpieczeństwa biologicznego klasy II, przy włączonej dmuchawie i zgaszonym świetle.

1. Przygotowanie materiałów

UWAGA: Wszystkie materiały są wymienione w Tabeli Materiałów.

  1. Przygotować pożywkę 1, pożywkę wirującą 2 oraz roztwory do przechowywania i robocze fluorescencyjnego 2-deoksy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoksadiazol-4-ylo)amino]-D-glukozy (2-NBDG lub FD-glukozy) zgodnie z tabelą 1 w komorze bezpieczeństwa biologicznego klasy II. Chroń FD-glucose przed światłem przez cały czas ....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Rycina 1: Wyczerpanie zewnątrzkomórkowej FD-glukozy korelowane z wewnątrzkomórkowym wychwytem in vitro.Preadipocyty 3T3-L1 inkubowano w pożywce wolnej od glukozy przez 40 minut przed inkubacją z różnymi stężeniami FD-glukozy z insuliną i bez insuliny (1,7 mM; 40 minut inkubacji). (A, B) Zależny od dawki wychwyt FD-glukozy (A) i zewnątrzkomórkowe wyczerpanie.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Mysie fibroblasty 3T3-L1Kontroler ATCC (Kontroler TZobacz materiał CL-173Linia komórkowa
Płytki 96-dołkowesokół353227Wyroby z tworzyw sztucznych
Modułowy wielomodowy czytnik mikropłytek BioTek Synergy H1 (Fisher Scientific, USA)Fisher Scientific, Stany Zjednoczone B-SHTurządzenie
Surowica bydlęcaGibco/ThermoFisherNumer katalogowy: 161790-060Hodowla komórkowa
Surowica cielęcaGibco/ThermoFisher26010-066Hodowla komórkowa
Inkubator komórkowyFormaKurt wodny serii IIurządzenie
Dimetylosulfotlenek (DMSO)Sigma LifeScienceD2650-100 mlOdczynnik
Zmodyfikowany Orzeł Dulbecco MediumGibco/ThermoFisher 11965-092Hodowla komórkowa
etanolSigma AldrichE7023-500 mlOdczynnik
Fluorescencyjna 2-deoksy-2-[(7-nitro-2,1,3-benzoksadiazol-4-ylo)amino]-D-glukoza)Sigma72987-1MGTest
DMEM bez glukozy i czerwieni fenolowejGibco/ThermoFisherA14430-01Hodowla komórkowa
Insulina ludzka 10 mg/mlMiliporeSigmaNr kat. 91077COdczynnik
Penicylina/streptomycyna (P/S)Gibco/ThermoFisherRozdział 15140-122Hodowla komórkowa
Roztwór buforowany fosforanamiSigma-AldrichDA537-500 mlHodowla komórkowa
Bufor do analizy radioimmunoprecypitacjiBiotechnologia Santa CruzSC-24948Test
Trypsyna-EDTA (0,05%)Gibco/ThermoFisher 25300-054Hodowla komórkowa
powiedział:

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Test pobierania glukozyfluorescencyjna deoksyglukozaczytnik mikrop ytekpo ywka bezglukozowastymulacja insulinhodowla kom rek fibroblast wbufor do testu radioimmunoprecypitacjipomiar fluorescencjikom rkowy transport glukozy

Powiązane artykuły