Fluorescencyjny test paraliżu reporterowego: technika oceny związanego z wiekiem postępującego tworzenia się fluorescencyjnego reportera poliglutaminy i związanego z nim paraliżu w Caenorhabditis elegans

Streszczenie

Źródło: Lazaro-Pena, M. I. et al. Kwantyfikacja swoistego tkankowo spadku proteostazy u Caenorhabditis elegans.J. Vis. Exp. (2021)

Ten film demonstruje test oparty na obrazowaniu in vivo, który pozwala określić spadek proteostazy spowodowany starzeniem się. W teście wykorzystuje Caenorhabditis elegans eksprymujące białko fuzyjne poliglutaminy YFP w mięśniach ścian ciała w celu zmierzenia związanej z wiekiem agregacji poliglutaminy i indukcji proteotoksyczności, co prowadzi do paraliżu.

Protokół

1. Pomiar spadku proteostazy w tkance mięśniowej za pomocą zwierząt wykazujących ekspresję poliglutaminy

UWAGA: Do identyfikacji spadku proteostazy w komórkach mięśniowych można użyć dwóch metod: obrazowania powstawania agregatów białkowych podczas starzenia się (1.1) i pomiaru proteotoksyczności, jaką te agregaty powodują z wiekiem poprzez nadejście paraliżu (1.2).

1. Obrazowanie tworzenia agregatów poliglutaminy w mięśniach podczas starzenia
   nuta: Zależną od wieku progresję agregacji białek w komórkach mięśniowych obrazuje się za pomocą powtórzeń poliglutaminy (polyQ) połą....

Wyniki

Rycina 1: Ekspresja polyQ::YFP w mięśniach C. elegans powoduje postępującą akumulację ognisk i paraliż podczas starzenia. (A) Ekspresja C. elegans unc-54p::Q35::YFP w 1 i 4 dniu dorosłości (odpowiednio górny i dolny panel). Strzałki wskazują reprezentatywne ogniska. (B) Kwantyfikacja ognisk fluorescencyjnych w ciągu pierwszych 4 dni dorosł.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Szkiełka mikroskopowe szklane	Firma VWR	Numer katalogowy: 160004-422
Azek sodu, CAS #26628-22-8	Sigma-Aldrich	S2002
Mikroskop Zeiss Axio Imager M2m z oprogramowaniem AxioVision v4.8.2.0	Zeiss
Mikroskop Zeiss StemiSV11 M2 Bio Quad	Zeiss