Test wzrostu oparty na lucyferazie do ilościowego określenia wewnątrzkomórkowej reprodukcji pasożytów

Streszczenie

Źródło: Key, M., et al., Określenie skuteczności inhibitora chemicznego przeciwko wewnątrzkomórkowemu wzrostowi Toxoplasma Gondii przy użyciu testu wzrostu opartego na lucyferazie. J. Vis. Exp. (2020)

W tym filmie pokazujemy test lucyferazy do ilościowego określenia wzrostu wewnątrzkomórkowego patogenu Toxoplasma gondii. Wykorzystując szczep Toxoplasma, który eksprymuje enzym lucyferazy po zakażeniu komórek gospodarza, aktywność lucyferazy jest wykrywana w zakażonej kulturze komórkowej w celu określenia pomyślnego rozmnażania pasożyta.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Test wzrostu Toksoplazmy na bazie lucyferazy

1. Wysiewaj ludzkie fibroblasty napletka (HFF) na 1 tydzień przed inokulacją pasożyta, aby upewnić się, że komórki gospodarza są w pełni zlewne. Wykonaj próbny test na przezroczystej płytce, aby upewnić się, że pasożyty pozostają wewnątrzkomórkowe przez cały okres oceny.
   nuta: W tym przypadku test przeprowadza się w 96-dołkowych mikropłytkach. W zależności od potrzeb eksperymentalnyc....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Biotek Synergy H1 Hybrydowy wielomodowy czytnik mikropłytek	Instrumenty BioTek
Coelenterazine h	Prolume (Krzew)	301-10 hCTZ
oprogramowanie
Oprogramowanie GraphPad Prism (wersja 8)