Zbadaj zachowanie chemounikania u robaków transgenicznych za pomocą testu unikania osmotycznego

Abstract

Źródło: Wang, Q. et al., Z. Caenorhabditis elegans jako modelowy system do odkrywania związków bioaktywnych przeciwko neurotoksyczności za pośrednictwem poliglutaminy. J. Vis. Exp. (2021).

Ten film opisuje test unikania osmotycznego w celu zbadania zachowania chemounikania w modelu transgenicznego robaka. Zachowanie unikania jest testowane na płytce w obecności bariery o wysokiej zawartości osmotycznej i chemoatraktantu. Robaki z funkcjonalną utratą neuronów zostają przyciągnięte przez chemoatraktant, przekraczają barierę wysokoosmotyczną i zostają sparaliżowane w strefie pułapki z powodu roztworu znieczulającego.

Protocol

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

UWAGA: Zobacz Tabelę 1, aby zapoznać się z recepturami rozwiązań używanych w tym protokole.

1. Przygotowanie materiałów do testu Caenorhabditis elegans

1. Utrzymanie szczepów C. elegans
   1. Otrzymać szczepy C. elegans (AM141 i HA759) i Escherichia coli (OP50 i NA22) (patrz tabela materiałów).
   2. Utrzymywać nicienie n....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Szczepy C. elegans
HA759 rtIs11 [osm-10p::GFP + osm-10p::HtnQ150 + dpy-20(+)]	Centrum Genetyki Caenorhabditis (CGC)		https://cgc.umn.edu/strain/HA759
Szczepy E. coli
NA22	Centrum Genetyki Caenorhabditis (CGC)		https://cgc.umn.edu/strain/NA22
Zobacz materiał OP50	Centrum Genetyki Caenorhabditis (CGC)		https://cgc.umn.edu/strain/OP50
Odczynnik
agar	Szanghaj EKEAR Bio-Technology Co., Ltd.	EQ1001-500G	https://www.ekear.com
Butanodion	Sinopharm Chemical Reagent Co., Sp. z o.o.	80042427	https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/d027c00e64c9404d9aa41391fbb 595d0
cholesterol	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał C8667	https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/product/sigma/c8667?context=product
glicerol	Aladdin Co., Sp. z o.o.	G116203	https://www.aladdin-e.com/zh_cn/g116203.html
Pepton	Guangdong HuanKai Nauka i technologia mikrobiologiczna Co., Ltd.	050170B	https://www.huankai.com/show/21074.html
Azydek sodu	Sinopharm Chemical Reagent Co., Sp. z o.o.	80115560	https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/5e981aa807664e26af 551E96FF5F07CD
wodorotlenek sodu	Sinopharm Chemical Reagent Co., Sp. z o.o.	10019718	https://www.reagent.com.cn/goodsDetail/450dfdb1132a4d8a817 D3D8C68EC25E6
Roztwór podchlorynu sodu	Fabryka odczynników chemicznych w Kantonie	7681-52-9	http://www.chemicalreagent.com/product/DetailProduct.aspx?id=125
Trypton	Oxoid Sp. z o.o.	LP0042B	https://www.thermofisher.cn/order/catalog/product/LP0042B#/LP0042B
Ekstrakt drożdżowy	Oxoid Sp. z o.o.	LP0021B	https://www.thermofisher.cn/order/catalog/product/LP0021B#/LP0021B
sprzęt
48-dołkowa płytka do hodowli komórkowej	Nest Biotechnology Co., Sp. z o.o.	748001	https://www.cell-nest.com/page94?_l=en&product_id=85
Szalka Petriego 90 mm	Sangon Biotech (Szanghaj) Co., Ltd.	F611003	https://www.sangon.com/productDetail?productInfo.code=F611003
autoklaw	Panasonic	MLS-3781L-PC
Mikroskop preparacyjny	ChongQing Optical Co., Sp. z o.o.	ZSA0745	http://www.coicuop.com/plus/view.php?aid=64
Mikrowirówka	Firma GeneCompany	GENESPEED X1	https://www.genecompany.com/index.php/Home/Goods/goodsdetails/gid/189.html
Parafilm M	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał P7793-1EA	https://www.sigmaaldrich.cn/CN/en/product/sigma/p7793?context=product
Shakerze bostońskim	Zhicheng Inc.	ZWY-2102C	http://www.zhicheng.net/Product/0865291356.html