Artykuł metodologiczny

Mikrorozcięcie laserowe z wychwytem (Laser Capture Microdissection) tkanek ssaków

17K wyświetleń

DOI:

10.3791/309

1 października 2007

W tym artykule

Streszczenie

Mikroskopia z przechwytywaniem laserowym, znana również jako laserowa mikrosekcja (LMD), umożliwia izolowanie niewielkiej liczby komórek lub tkanek z zamrożonych lub utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków tkanek. Techniki LMD opierają się na zastosowaniu membrany termolabilnej, umieszczonej powyżej lub poniżej skrawka tkanki. W jednej z metod skupiona energia laserowa jest wykorzystywana do stopienia membrany z znajdującymi się pod nią komórkami, które następnie można wyjąć ze skrawka tkanki. W drugiej metodzie energia laserowa odparowuje folię wzdłuż „narysowanej” na tkance ścieżki, co pozwala wybranym komórkom wpaść do urządzenia zbierającego. Każda z tych technik umożliwia selekcję komórek z rozdzielczością wynoszącą co najmniej kilka mikronów. Z próbek poddanych mikrosekcji można izolować i analizować DNA, RNA, białka oraz lipidy. W tym filmie prezentujemy zastosowanie instrumentu do laserowej mikrosekcji Leica AS-LMD w siedmiu segmentach, obejmujących: wprowadzenie do zasad LMD, uruchamianie instrumentu, ogólne uwagi dotyczące przygotowania próbek, montowanie preparatu i ustawianie probówek do przechwytywania, ustawianie mikroskopu, regulację parametrów przechwytywania oraz pobieranie próbek tkanki. Laserowa mikrosekcja pozwala badaczowi na izolowanie próbek czystych populacji komórkowych o wielkości zaledwie kilku ekwiwalentów komórkowych. Umożliwia to analizę interesujących badacza komórek wolnych od sąsiednich zanieczyszczeń, które mogłyby zaburzyć wyniki doświadczeń.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

izolacja tkanekprzechwytywanie kom rektopnienie b onykontrola mocy laserawyr wnanie preparatukonfiguracja prob wki zbieraj cejprzetwarzanie skrawk w mro onychprzygotowanie do izolacji RNAinstrument Leica AS LMD

Powiązane artykuły