Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Ustalenie konfiguracji cęgów napięciowych całej komórki dla zapisów elektrofizjologicznych w wycinkach mózgu

1.3K wyświetleń

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Sunstrum, J. K., et al. Ocena mnogości synaptycznej za pomocą elektrofizjologii klamrów krosowych całych komórek. J. Vis. Exp. (2019 rok)

Ten film pokazuje umieszczanie pipety o cienkim czubku w pobliżu wycinków mózgu, tworząc pieczęć z komórką neuronalną. Zasysanie przerywa błonę komórkową, tworząc w ten sposób klamrę krosową całej komórki, która umożliwia pomiary prądu do eksperymentów elektrofizjologicznych.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Rozwiązania

  1. Roztwór do krojenia
    1. Patrz Tabela 1, aby zapoznać się ze składem roztworu do krojenia.
    2. Przygotować wcześniej 20-krotny roztwór podstawowy i przechowywać go w temperaturze 4 °C przez okres do 1 miesiąca.
    3. Aby uzyskać 1x roztwór do krojenia, rozpuść NaHCO3, glukozę i sacharozę w ddH2O i dodaj 20x bulion. Upewnij się, że osmolarność wynosi od 315 do 320 mOsm i przec....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Strzykawka 1 mlBd309659
10 ostrzyFisher Scientific/inneNumer katalogowy: 35698
Ostrze 22VWR/inne21909-626
Filtry strzykawkowe 22 uMMilipore powiedział:Numer katalogowy: 09-719-000
Adson forecepsInstrumenty HarvardaNr kat. 72-8547
Ostre nożyczki pod kątemInstrumenty HarvardaNr kat. 72-8437
ZaciskUrządzenia molekularneZacisk pClamp 10
Ostrze o podwójnej krawędziFirma VWR74-0002
Bibuła filtracyjnaSigma/inne1001090
Drobny pędzelRybak/różne15-183-35/różne
Rurka dyspersyjna gazuFirma VWRLG-8680-120
IzofluranFresenius Kabi/inniZobacz materiał M60303
Szalony klejrozmaityrozmaity
Mini analizaSynaptosoft (oprogramowanie Synaptosoft)MiniAnaliza 6
Osmomoter (osmomot)Wescor Incnr wzoru 5600
ParafilmSigmaPM-996 (wersja angielska)
Pipeta PasteuraFirma VWRNr kat. 14672-200
miernik pHMETTLER TOLEDOFE20-ATC
Gumowa żarówkaFirma VWRNumer katalogowy: 82024-550
Rękojeść skalpela nr 3Instrumenty HarvardaNr kat. 72-8350
Rękojeść skalpela nr 4Instrumenty HarvardaNr kat. 72-8356
Ostrze z pojedynczą krawędziąFirma VWR55411-050
Krajalnica VibratomeKsięga LeicaVT1200S
System oczyszczania wodyMiliporyMilli-Q Akademicki A10
Pokrywka płytki studzienkiRybak/różne07-201-590/różne
CaCl2 2H2OSigmaZobacz materiał C7902
CdCl2Sigma202908
EGTA (EGTA)SigmaE3889
glukozaSigmaZobacz materiał G5767
HEPESYSigmaH3375
K2-ATP (klasa K2-ATP)SigmaNumer katalogowy A8937
KclSigmaZobacz materiał P9333
K-glukonianSigmaKlasa G4500
MgCl2 6H2OSigmaZobacz materiał M2670
Woda klasy biologii molekularnejSigmaZobacz materiał W4502-1L
Na3GTP powiedział:SigmaTelefon komórkowy G8877
Zawartość NaClSklep biologicznyZobacz materiał SOD001.1
Na-glukonianSigmaZobacz materiał S2054
NaH2PO4SigmaNumer katalogowy: 71504
NaHCO3SigmaZobacz materiał S6014
PikrotoksynaSigmaZobacz materiał P1675
SrClSigma255521
sacharozaSklep biologicznySUC507.1
TGL powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział:

Tagi

Elektrofizjologia plastrów mózgutechnika patch-clamprejestracja z komórek neuronalnychpozycjonowanie pipetytworzenie uszczelnienia błonyprzełamanie ssaniempomiar rezystancjikompensacja pojemnościrejestracja elektrofizjologiczna