Monitorowanie aktywności elektrycznej neuronów wywołanej napadami padaczkowymi w wycinkach mózgu za pomocą układów mikroelektrod

Streszczenie

Źródło: Panuccio, G., et al. Rejestracja i modulacja aktywności epileptiform w wycinkach mózgu gryzoni sprzężonych z układami mikroelektrod. J. Vis. Exp. (2018)

Ten protokół polega na użyciu układu mikroelektrod (MEA) do rejestrowania aktywności elektrycznej w wycinku mózgu wystawionym na działanie leku wywołującego drgawki. Procedura obejmuje umieszczenie wycinka mózgu w komorze rejestracyjnej MEA, zastosowanie stymulacji elektrycznej w celu wywołania sztucznych napadów i analizę uzyskanych sygnałów.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały sprawdzone i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

1. Przygotowanie konfiguracji MEA

Uwaga: Rozpocznij 15 minut przed nagraniem.

1. Przenieść pozostałą objętość 4AP-ACSF (sztuczny płyn mózgowo-rdzeniowy 4-aminopirydyny) do kolby Erlenmeyera o pojemności 500 ml.
2. Umieścić kolbę Erlenmeyera na półce nad wzmacniaczem MEA (matryce mikroelektrod) i użyć przewodów, aby umożliwić ciągłe podawanie roztworu do strzykawki o pojemności 60 ml. Wyregulować wysokość kolby Erlenmeyera i strz....

Wyniki

Rysunek 1: Sprzęt niestandardowy używany w tym protokole. (A) Komory do odzysku, wstępnego ogrzewania i wstępnej inkubacji w 4AP są montowane za pomocą zlewki i szalki Petriego. Szalka Petriego powinna mieć mniejszą średnicę niż młot i jest utrzymywana na miejscu za pomocą tłoka strzykawki. Dno szalki Petriego jest zastąpione nylonową siatką (z miękkich pończoch) przyklejoną cyjanoa.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Poli-D-lizyna	Sigma-Adrich	Zobacz materiał P7886	Potrzebny do powlekania MEA
Zawartość NaCl	Sigma-Adrich	Numer katalogowy S9888	chemiczny
Kcl	Sigma-Adrich	Zobacz materiał P9541	chemiczny
KH2PO4	Sigma-Adrich	795488	chemiczny
CaCl2*2 H2O	Sigma-Adrich	Zobacz materiał C3306	chemiczny
D-glukoza	Sigma-Adrich	Zobacz materiał RDD016	chemiczny
NaHCO3	Sigma-Adrich	Zobacz materiał S5761	chemiczny
MgCl2*6 H2O	Sigma-Adrich	Zobacz materiał M2670	chemiczny
MgSO4*6 H2O	Sigma-Adrich	Zobacz materiał M5921	chemiczny
sacharoza	Sigma-Adrich	Płyta RDD023	chemiczny
Kwas pirogronowy, 98%	Sigma-Adrich	Numer katalogowy: 107360	chemiczny
4-aminopirydyna	Sigma-Adrich	Numer referencyjny A78403	Lek konwulsyjny
Zobacz materiał STG-2004	System wielokanałowy	STG4004-1,6 mA	4-kanałowy generator bodźców z wyjściem napięciowym (±8 V) i prądowym (±1,6 mA)
MEA1060	System wielokanałowy	N/a	Wzmacniacz MEA
płaski MEA	System wielokanałowy	60MEA500/30iR-Ti bez pierścienia	Musi być bez pierścienia, aby umożliwić korzystanie z niestandardowej komory nagrywania
McRack	System wielokanałowy		Oprogramowanie do nagrywania
McBoździec II	System wielokanałowy		STG4004 oprogramowanie sterujące
Zobacz materiał TC02	System wielokanałowy	Zobacz materiał TC02	Termostat 2-kanałowy
PH01	System wielokanałowy	PH01	Podgrzewanie kaniuli perfuzyjnej
Mph	System wielokanałowy	Mph	Uchwyt magnetyczny do PH01 i igły ssącej
Elastostil E43	Wacker	E43	Uszczelniacz elastomerowy używany do montażu niestandardowej komory nagraniowej na MEA
Komora celna MEA	Instrument Crisel	Komora SKE MEA	Niestandardowa komora nagraniowa
Elektroda Ag/AgCl, granulowana, 1,0 mm	Instrument Crisel	64-1309	Elektroda referencyjna do niestandardowej komory nagraniowej
Tergazyme powiedział:	Sigma-Adrich	Z273287-1EA	Enzymatyczny środek czyszczący
MATLAB (MATLAB)	Matematyka		Środowisko programistyczne do mapowania elektrod
VT1000S	Leica Biosystems	VT1000S	Wibratomizm
	Instrumenty Warnera	64-1309	Ag-AgCl Elektroda w postaci granulki 1,0 mm (E205). Elektroda referencyjna.

TGL powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: powiedział: