Zachowania nawigacyjne larw Drosophila w odpowiedzi na optogenetyczną stymulację węchowych neuronów czuciowych

Streszczenie

Źródło: Clark, D. A., et al. Śledzenie zachowania larw Drosophila w odpowiedzi na optogenetyczną stymulację neuronów węchowych. J. Vis. Exp. (2018).

Ten film pokazuje badanie zachowania nawigacyjnego larw Drosophila w odpowiedzi na optogenetyczną stymulację węchowych neuronów czuciowych (ORN). Transgeniczne larwy Drosophila wykazujące ekspresję światłoczułych kanałów jonowych w ORN są umieszczane na agarozie w obrębie areny behawioralnej. Stymulacja optogenetyczna światłem otwiera kanały, powodując napływ kationów, który wyzwala przekazywanie sygnału do mózgu, a zachowanie nawigacyjne jest rejestrowane.

Protokół

1. Budowanie areny zachowań i przygotowanie sprzętu umożliwiającego stymulację optogenetyczną na arenie zachowań

1. Aby zbudować arenę zachowań pozbawionych światła, skonstruuj pudełko o wymiarach 89 x 61 x 66 cm³ (35" dł. x 24" szer. x 26 "wys.) wykonane z czarnych kolorowych arkuszy akrylowych z pleksi (o grubości 3 mm) (patrz tabela materiałów). Materiały do budowy takiego pudełka powinny być dostępne w lokalnych sklepach ze sprzętem. Umieść to pudełko na blacie stołu w pokoju zachowania (ryc. 1A).
2. Zamontuj monochromatyczną kamerę CCD (USB) 3.0 z urządzeniem sprzężonym z ładunkiem (Cha....

Wyniki

Rycina 1: Arena zachowania i podłoże pełzające larw. (A) Widok z przodu na arenę zachowań czarnej skrzynki. Otwarte drzwi areny odsłaniają kamerę CCD zawieszoną pod sufitem loży. (B) Widok z dołu metalowej platformy zawierającej czerwone paski świetlne LED używane do stymulacji optogenetycznej jest zamontowany wokół kamery CCD. (C) Widok z góry na podłoże pełzające .......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Kamera wideo do rejestrowania ruchu larw
Kamera CCD	Edmund Optyka	106215
Adapter gwintu filtra M52 do M55	Edmund Optyka	59-446
2-calowy uchwyt filtra z gwintem kwadratowym do soczewek obrazowych	Edmund Optyka	59-445
RG-715, 2" kwadratowy filtr długoprzepustowy	Edmund Optyka	Numer katalogowy: 46-066
Elektronika do konfiguracji optogenetycznej
Raspberry Pi 2B	RASPBERRY-PI.org	RPI2-MODB-V1.2
3-kanałowy programowalny zasilacz	newegg.com	9SIA3C62037092
8-kanałowy przekaźnik transoptora	amazon.com	6454319
630nm Czterorzędowe taśmy LED	environmentallights.com	czerwony3528-450-szpula
Taśmy LED 850nm	environmentallights.com	wp-4000K-CC5050-60x2-zestaw
oprogramowanie
Ubuntu MATE w wersji 16.04	Nubuntu	https://github.com/yslo/nubuntu
Pozostałe punkty
Pleksi akryl	Magazyn domowy	MC1184848BL
Pokarm dla much i inne odczynniki
Pokarm dla much Nutrifly	Genesee Scientific	66-112
Agaroza w proszku	Genesee Scientific	20-102
Kwadratowa szalka Petriego 22 cm X 22 cm	VWR Inc.	25382-327
Dmso	Sigma-Aldrich	Zobacz materiał D2650
sacharoza	Sigma-Aldrich	Numer katalogowy: 84097
Wszystkie trans-siatkówkowe	Sigma-Aldrich	Czynnik R2500
Leci
UAS-IVS-CsChrimson	Centrum Akcji Bloomington Drosophila	Numer katalogowy: 55134
Orko-Gal4	Centrum Akcji Bloomington Drosophila	Numer katalogowy: 26818
Or42a-Gal4	Centrum Akcji Bloomington Drosophila	Numer katalogowy 9970
Or7a-Gal4	Centrum Akcji Bloomington Drosophila	Numer katalogowy 23907

Rozdział TGL TGL powiedział: Rozdział SZT. powiedział: powiedział: powiedział: