Chirurgia powierzchownych węzłów chłonnych myszy

Summary

Aby śledzić postęp odpowiedzi immunologicznej w czasie u tej samej myszy, węzły chłonne mogą być sekwencyjnie usuwane chirurgicznie. Tutaj opisujemy, jak można wykonać tę technikę.

Abstract

W dziedzinie immunologii, aby zrozumieć postęp odpowiedzi immunologicznej przeciwko szczepionce, infekcji lub nowotworowi, odpowiedź jest często śledzona w czasie. Podobnie badanie homeostazy limfocytów wymaga eksperymentów w czasie. Przeprowadzenie tych badań na tej samej myszy jest idealne do zmniejszenia zmienności eksperymentalnej, a także liczby wykorzystanych myszy. Pobranie krwi pozwala na przeprowadzenie eksperymentów w czasie, ale dostarcza tylko informacji o krążących limfocytach i dostarcza ograniczoną liczbę komórek^1-4. Ponieważ limfocyty krążące w organizmie i znajdujące się w węzłach chłonnych mają różne właściwości, ważne jest, aby zbadać obie lokalizacje. Sekwencyjne usuwanie węzłów chłonnych za pomocą operacji daje wyjątkową możliwość śledzenia odpowiedzi immunologicznej lub ekspansji komórek odpornościowych u tej samej myszy w czasie. Ponadto technika ta daje od 1 do 2 x 10⁶ komórek na węzeł chłonny, co jest wystarczające do przeprowadzenia charakterystyki fenotypowej i / lub testów funkcjonalnych. Sekwencyjna operacja węzłów chłonnych lub limfadenektomia jest z powodzeniem stosowana przez nas i innych^5-11. Tutaj opisujemy, w jaki sposób można usunąć węzły chłonne ramienne i pachwinowe, wykonując małe nacięcie w skórze znieczulonej myszy. Ponieważ operacja jest powierzchowna i wykonywana szybko, mysz bardzo szybko wraca do zdrowia, dobrze się goi i nie odczuwa nadmiernego bólu. Co drugi dzień możliwe jest pobranie jednego lub dwóch węzłów chłonnych, co pozwala na eksperymenty z biegiem czasu. Technika ta jest zatem odpowiednia do badania charakterystyki limfocytów znajdujących się w węzłach chłonnych w czasie. Takie podejście jest odpowiednie dla różnych projektów eksperymentalnych i uważamy, że wiele laboratoriów skorzystałoby na wykonywaniu sekwencyjnych operacji węzłów chłonnych.

Protocol

1. Przygotowanie przed operacją

Myszy były leczone zgodnie z wytycznymi Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami.

1. Znieczulenie myszy przez wstrzyknięcie ketaminy/ksylazyny (150/300 mg/kg, i.p.) lub przez inhalację izofluranu (2%, 1L tlenu). Jeśli to możliwe, należy stosować izofluran, ponieważ pozwala on na lepszą kontrolę czasu i głębokości znieczulenia. W tym samym czasie podawany jest również tlen, który wspomaga funkcje fizjologiczne zwierzęcia. Ponadto izofluran jest bezpośrednio eliminowany przez płuca, a zatem nie wymaga metabolizmu wątrobowego ani nerkowego.
2. Wstrzyknąć buprenorfinę (0,05 - 0,1 mg/kg mc., s.....

Discussion

Opisaliśmy protokół chirurgii LN, który może mieć zastosowanie w wielu systemach eksperymentalnych. Chociaż jest bardzo przydatna do śledzenia odpowiedzi immunologicznych lub homeostazy komórek odpornościowych, technika ta ma kilka ograniczeń. Po pierwsze, można zebrać tylko cztery LN. Po drugie, badana odpowiedź immunologiczna musi być ogólnoustrojowa lub występować w powierzchownych pachwinach lub ramiennych (drenujących skórę) LN. Wreszcie, na liczbę pobranych komórek ma wpływ jakość usuwania LN, co jest ograniczeniem.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Kleszcze Graefe Fine Pattern Premium	Aparat Harvard	52-2144	Mocno zakrzywiony, 10 cm (4 cale), końcówka 0,8 mm
Michel Clip Kleszcze do nakładania i zdejmowania	Aparat Harvard	52-3779	12,5 cm (5 cali)
Aparat Harvard	Michel Clip 100	52-3746	7,5-1,75 mm
Temgesic (chlorowodorek buprenorfiny)	Merck & Co.
Vetalar (chlorowodorek ketaminy)	Bioniche Animal Health		DIN: 01989529
Rompun (Xylazine)	Bayer AG		DIN: 02169592
Isoflurane	Abbott Laboratories		DIN: 02032384
Maść do oczu Hypotears	Novartis AG		DIN: 02133288
Baxedin (glukonian klorheksydyny 2% w alkoholu izopropylowym 70%)	Inżynieria Omega, Inc.	L0000017	DIN: 02251477