$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Pojawienie się mikroskopii przyżyciowej w eksperymentalnych modelach malarii u gryzoni umożliwiło znaczny postęp w wiedzy na temat interakcji pasożyt-gospodarz 1,2. Tak więc obrazowanie in vivo pasożytów malarii w stadiach pre-erytrocytarnych ujawniło aktywne wnikanie pasożytów do węzłów chłonnych skóry 3, całkowity rozwój pasożyta w skórze 4 i tworzenie się merosomu pochodzącego z hepatocytów w celu zapewnienia migracji i uwalniania merozoitów do krwiobiegu 5. Co więcej, rozwój poszczególnych pasożytów w erytrocytach został niedawno udokumentowany za pomocą obrazowania 4D i podważył nasz obecny pogląd na eksport białka w malarii 6. W ten sposób obrazowanie przyżyciowe radykalnie zmieniło nasz pogląd na kluczowe wydarzenia w rozwoju Plasmodium. Niestety, ze względu na ograniczenia techniczne brakuje badań nad dynamicznym przechodzeniem pasożytów malarii przez śledzionę, główny narząd limfatyczny doskonale przystosowany do usuwania zakażonych czerwonych krwinek.
Korzystając z mysiego modelu malarii Plasmodium yoelii u myszy Balb/c, wdrożyliśmy obrazowanie intrażyciowe śledziony i odnotowaliśmy różnicową przebudowę śledziony oraz przyleganie pasożytniczych czerwonych krwinek (pRBC) do komórek barierowych pochodzenia fibroblastycznego w czerwonej miazdze podczas infekcji nieśmiertelnym pasożytem linii P.yoelii 17X, w przeciwieństwie do infekcji śmiertelnym pasożytem P.yoelii 17XL linii 7. Aby dojść do tych wniosków, opracowano specjalną metodologię wykorzystującą bezpłatne oprogramowanie ImageJ, aby umożliwić scharakteryzowanie szybkiego trójwymiarowego ruchu pojedynczych pRBC. Wyniki uzyskane za pomocą tego protokołu pozwalają na określenie prędkości, kierunkowości i czasu przebywania pasożytów w śledzionie, przy czym wszystkie parametry dotyczą przestrzegania zaleceń in vivo. Ponadto przedstawiamy metodologię oznaczania ilościowego przepływu krwi za pomocą mikroskopii przyżyciowej i stosowania różnych barwników w celu uzyskania wglądu w złożoną strukturę mikrokrążenia śledziony.
Oświadczenie etyczne
Wszystkie badania na zwierzętach zostały przeprowadzone w obiektach dla zwierząt Uniwersytetu w Barcelonie, zgodnie z wytycznymi i protokołami zatwierdzonymi przez Komitet Etyki ds. Eksperymentów na Zwierzętach Uniwersytetu w Barcelonie CEEA-UB (Protokół nr DMAH: 5429). Samice myszy Balb/c w wieku 6-8 tygodni uzyskano z Charles River Laboratories.