1. Opieka przedoperacyjna
- Odbrać pokarm szczurowi w noc poprzedzającą operację.
- Wprowadzić w stan znieczulenia w komorze przy użyciu 4-5% isofluranu i przepływie O2 wynoszącym 2 l/min.
- Ogolić brzuch od mostka do miednicy za pomocą golarki elektrycznej.
- Umieścić znieczulonego szczura w pozycji na plecach na izotermicznej macie grzewczej.
- Nałożyć maść do oczu (Vitagel) przed umieszczeniem pyska szczura w masce nosowej.
- Utrzymywać znieczulenie przy stężeniu isofluranu 2-3% i przepływie O2 wynoszącym 2 l/min.
- Zdezynfekować skórę roztworem Betadine.
- Potwierdzić głębokość znieczulenia poprzez uciśnięcie pęsetą przestrzeni między palcami tylnej łapy.
- Podać 5,7 mg/kg Enrofloksacyny dootrzewnowo jako okołoperacyjna profilaktyka antybiotykowa oraz 1 mg/kg Fluniksyny w celu przeciwbólowym.
2. Laparatomia pośrodkowa
- Wykonaj nacięcie w linii pośrodkowej za pomocą skalpela, zaczynając tuż poniżej wyrostka mieczowatego (ostrze nr 10).
- Odseparuj skórę obwodowo od leżących pod nią mięśni brzucha, używając nożyc Metzenbauma.
- Otwórz jamę brzuszną.
- Zamocuj rozieracze, aby zapewnić jak najlepszą ekspozycję pola operacyjnego.
3. Odcinek żółciowo-trzustkowy i pokarmowy
- Zlokalizuj miejsce, w którym dwunastnica lub proksymalna część jelita czczego przebiega pod okrężnicą.
- Przetnij jelito cienkie około 10 cm dystalnie (aboralnie) od tego miejsca i podwiąż oba końce jelita (PDS 5-0).
- Umieść proksymalny pień z dwóch końców w lewym górnym kwadrancie jamy brzusznej, ponieważ zostanie on później wykorzystany do utworzenia odgałęzienia biliopankreatycznego w rekonstrukcji typu Roux-en-Y.
- Umieść dystalny pień z dwóch końców w prawym górnym kwadrancie jamy brzusznej, ponieważ zostanie on później wykorzystany do utworzenia odgałęzienia pokarmowego w rekonstrukcji typu Roux-en-Y.
4. Jejunostomia-jejunostomia
- Zidentyfikuj kątnicę wraz z zastawką kątniczą oraz jelito cienkie (ileum).
- Przesuń się wzdłuż jelita cienkiego w kierunku ustnym na odległość około 25 cm. W tym miejscu zostanie wykonana jejuno-jejunostomia, stanowiąca początek wspólnego kanału w rekonstrukcji typu Roux-en-Y.
- Wyodrębnij pętlicę żółciowo-trzustkową z lewego górnego kwadrantu jamy brzusznej i ułóż ją obok wspólnego kanału w miejscu planowanej jejuno-jejunostomii.
- Zabezpiecz pętlicę żółciowo-trzustkową i wspólny kanał za pomocą szwu retencyjnego (PDS 6-0).
- Nacinaj obie pętle na długości około 10 mm, używając mikronożyczek.
- Wykonaj jejuno-jejunostomię poprzez zespolenie bok-do-boku przy użyciu szwów przerywanych (PDS 6-0).
- W pierwszej kolejności zamknij stronę grzbietową, a następnie stronę brzuszną zespolenia.
5. Woreczek żołądkowy
- Zidentyfikuj przejście żołądkowo-przełykowe.
- Uwolnij ten obszar, preparując więzadła żołądkowo-wątrobowe i żołądkowo-śledzionowe za pomocą nożyczek Metzenbauma.
- Przesuń tętnicę żołądkową lewą oraz włókna nerwu błędnego lewego wiązki okołoprzełykowej bocznie, aby zapobiec poważnym krwawieniom i uszkodzeniu nerwu błędnego podczas tworzenia małego woreczka żołądkowego.
- Wyeksponuj przejście żołądkowo-przełykowe, umieszczając tampon z waty za przełykiem.
- Koaguluj małe naczynia przedniej ściany żołądka, używając dostępnego w handlu urządzenia do kauteryzacji – ma to również na celu zapobieganie krwawieniom.
- Przetnij żołądek około 5 mm poniżej przejścia żołądkowo-przełykowego, tworząc woreczek żołądkowy o rozmiarze nieprzekraczającym 2-3% pierwotnej wielkości żołądka, używając delikatnych, zakrzywionych nożyczek.
- Zamknij pozostałą część żołądka (PDS 5-0).
6. Gastrojejunostomia
- Wyciągnąć pęt%';tą alimentarną z prawego górnego kwadrantu jamy brzusznej i ułożyć ją obok woreczka żołądkowego.
- Wykonać gastrojejunostomię poprzez przeprowadzenie anastomozy koniec-bok (PDS 7-0).
- W pierwszej kolejności ukończyć tylną, a następnie przednią ścianę anastomozy.
7. Zamknięcie jamy brzusznej
- Zmniejszyć głębokość znieczulenia poprzez obniżenie stężenia izofluranu do 1,5%.
- Zamknąć warstwę mięśniową ściany brzusznej za pomocą szwów ciągłych (PDS 4-0).
- Podać podskórnie 100 μl roztworu buprenorfiny o stężeniu 0,3 mg/ml w celu zapewnienia analgesii.
- Dalszo obniżyć stężenie izofluranu do 1%.
- Zamknąć skórę za pomocą szwów przerywanych (Vicryl 4-0).
8. Opieka pooperacyjna
- Przerwać podawanie isofluranu i kontynuować podawanie O2.
- Podać 5 ml ciepłej soli fizjologicznej w celu uzupełnienia płynów w trzech depozytach podskórnych.
- Umieścić szczura pod czerwonym światłem do czasu pełnego wybudzenia.
- Przenieść szczura z powrotem do klatki macierzystej.
9. Reprezentatywne wyniki
Zwierzęta i warunki utrzymania
Samce szczurów Wistar (Harlan Laboratories Inc., Blackthorn, UK; Elevage Janvier, Le-Genest-St. Isle, Francja) o masie od 350 do 500 g przetrzymywano indywidualnie w cyklu oświetlenia 12 h /12 h w temperaturze pokojowej 21±2 °C. Woda i standardowa karma były dostępne ad libitum, chyba że zaznaczono inaczej. Wszystkie eksperymenty przeprowadzono na podstawie licencji wydanej przez Home Office, UK (PL70-6669) lub za zgodą Biura Weterynaryjnego kantonu Zurych w Szwajcarii. Wszystkie szczury przeszły tygodniową aklimatyzację przed randomizacją do grupy z pominięciem żołądka lub operacji pozorowanej. Po zabiegu szczury otrzymywały dietę płynną przez 3 dni, przed przywróceniem dostępu do zwykłej karmy.
Masa ciała
Dane z naszego modelu pominięcia żołądka u szczurów są zgodne z wcześniejszymi ustaleniami, według których operacja pominięcia żołądka jest skuteczna w redukcji masy ciała, a w szczególności w utrzymaniu utraty masy ciała (Rycina 2). Średnia masa ciała przed operacją szczurów poddanych pominięciu żołądka oraz operacjom pozorowanym była podobna (sham: 433,4 ± 8,3 g vs. bypass: 420,7 ± 8,4 g, p= 0,28). Pięć dni po zabiegu kontrolne zwierzęta poddane operacji pozorowanej ważyły znacznie więcej w porównaniu ze szczurami po pominięciu żołądka (sham: 422,2 ± 8,3 g vs. bypass: 374,7 ± 7,6 g, p<0,001). W 60. dobie po operacji różnica w masie ciała wynosiła prawie 170 g (sham: 533,2 ± 8,1 g vs. bypass: 366,2 ± 10,8 g, p<0,001).
Pobór pokarmu
Pobór pokarmu wykazywał podobne trendy jak masa ciała i był zredukowany u szczurów po pominięciu żołądka w porównaniu do szczurów po zabiegu pozorowanym, karmionych ad libitum. Rysunek 3 przedstawia średni dzienny pobór pokarmu dla obu grup (1-60 dzień po operacji). Dzienny pobór pokarmu był konsekwentnie niższy po pominięciu żołądka (pozorowane: 29,9 ± 0,2 g vs. bypass: 25,7 ± 0,3 g, p<0,001).
Hormony jelitowe
Krew od wszystkich szczurów pobrano w dniu zakończenia badania 8,16. Zwierzęta miały dostęp do pożywienia ad libitum w noc poprzedzającą i zostały poddane dekapitacji na początku cyklu świetlnego w 60. dobie po operacji. Pobraną krew niezwłocznie odwirowano przy 3000 rpm przez 10 minut w temperaturze 4°C i przechowywano w -20°C do czasu wykonania analizy próbek w dubletach w jednym serii pomiarowej. Immunoreaktywność typu PYY zmierzono za pomocą specyficznego i czułego testu radioimmunologicznego, który oznaczą zarówno pełną formę (PYY1-36), jak i fragment (PYY3-36). Poziom GLP-1 zmierzono przy użyciu opracowanych wewnętrznie testów radioimmunologicznych17,18. Różnice w spożyciu pokarmu można częściowo wyjaśnić zwiększonymi poposiłkowymi poziomami peptydy YY (PYY) i glukagonopodobnego peptydu 1 (GLP-1) w osoczu, ponieważ u szczurów po pominięciu żołądka odnotowano znacznie wyższe poziomy PYY (grupa sham: 26 ± 2 pmol/L vs. grupa bypass: 141 ± 14 pmol/L, p<0.001) oraz GLP-1 (grupa sham: 40 ± 5 pmol/L vs. grupa bypass: 215 ± 23 pmol/L, p<0.001; Rysunek 4).

Rycina 1. Anatomia pominięcia żołądka. Schematyczny rysunek anatomii jelita cienkiego przed (A) i po (B) operacji pominięcia żołądka. Różne odcienie czerwieni reprezentują odpowiednio poszczególne segmenty jelita cienkiego, gdzie kolor średnio-czerwony oznacza przedjelito (przełyk, żołądek, dwunastnicę i proksymalną część jelita czczego), jasnoczerwony oznacza środkowe jelito (proksymalną i środkową część jelita czczego oraz proksymalną część jelita krętego), a ciemnoczerwony oznacza tylne jelito (jelito kręte, kątnicę).

Rysunek 2. Utrata masy ciała po operacji pominięcia żołądka u szczurów. Zmiana masy ciała dla reprezentatywnej grupy szczurów po pominięciu żołądka (- -) (n=52) oraz szczurów poddanych operacji pozorowanej (- -) (n=52) w okresie obserwacji wynoszącym 60 dni. Dane zostały zgromadzone z poprzednich publikacji6,8-10 i przedstawiono je jako wartości średnie ± SEM (*** = p<0.001).

Rycina 3. Średnia konsumpcja pokarmu po operacji pominięcia żołądka u szczurów. Średnia dzienna konsumpcja pokarmu w reprezentatywnej grupie szczurów po pominięciu żołądka (czarne słupki, n=52) oraz szczurów poddanych operacji pozorowanej (białe słupki, n=52) w ciągu 60 dni okresu pooperacyjnego. Dane zostały zgromadzone z poprzednich publikacji6,8-10 i przedstawione jako wartości średnie ± SEM.

Rysunek 4. Po posiłku poziomy PYY i GLP-1 w surowicy po operacji pominięcia żołądka u szczurów. Po posiłku poziom PYY i GLP-1 w surowicy dla szczurów po pominięciu żołądka (czarne, n=18) i szczurów po operacji pozornej (białe, n=22). Dane zostały zgromadzone z poprzednich publikacji8,16 i przedstawione jako wartości średnie ± SEM.