Przeszczep cienkiego jelita stał się uznaną opcją terapeutyczną dla pacjentów z nieodwracalną niewydolnością jelit. Nasz eksperymentalny model ortotopowego przeszczepu cienkiego jelita u szczurów służy jako niezawodne narzędzie do badania podstawowych procesów immunologicznych i zapalnych, które komplikują transplantację jelita.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ortotopowe przeszczepianie jelita cienkiego u szczurów
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Przeszczepienie jelita cienkiego stało się uznaną opcją kliniczną dla pacjentów z zespołem krótkiego jelita i niepowodzeniem żywienia pozajelitowego (nieodwracalną niewydolnością jelit). W wyspecjalizowanych ośrodkach ulepszone strategie operacyjne i terapeutyczne doprowadziły do doskonałego przeżycia pacjentów i przeszczepów w krótkim i średnim terminie, zapewniając jednocześnie wysoką jakość życia 1,3. W przeciwieństwie do częstszych przeszczepień innych narządów pełnych (t.j. serca, wątroby), wiele podstawowych mechanizmów funkcjonowania przeszczepu i zmian immunologicznych wywołanych transplantacją jelita nie jest w pełni znanych6,7. Epizody ostrego odrzucania, sepsa i przewlekła niewydolność przeszczepu są głównymi przeszkodami wciąż przyczyniającymi się do mniej korzystnych wyników długoterminowych i utrudniającymi szersze zastosowanie tej procedury, mimo rosnącej liczby pacjentów na domowym żywieniu pozajelitowym, którzy potencjalnie odnieśliby korzyść z takiego przeszczepu. Jelito cienkie zawiera dużą liczbę leukocytów pasażerskich, powszechnie określanych jako część tkanki limfatycznej związanej z jelitami (GALT), co jest jedną z przyczyn wysokiej immunogenności przeszczepu jelita. Obecność i bliskość wielu komensali i patogenów w jelitach wyjaśnia ciężkość epizodów sepsy w momencie naruszenia integralności błony śluzowej przeszczepu (na przykład w wyniku odrzucania). Aby rozwinąć dziedzinę transplantacji jelit i wielonarządowej, potrzebne są dalsze dane generowane z niezawodnych i wykonalnych modeli zwierzęcych. Model przedstawiony w niniejszym opracowaniu łączy niezawodność i wykonalność po ustandaryzowaniu jego wdrożenia i może dostarczyć cennych informacji na temat złożonych molekularnych, komórkowych i funkcjonalnych mechanizmów wywoływanych przez transplantację jelita. Opisaną procedurę z sukcesem stosowaliśmy i udoskonalaliśmy w naszym laboratorium przez ponad 5 lat 8-11. Format wideo JoVE jest szczególnie przydatny do zademonstrowania tej złożonej procedury i uniknięcia początkowych błędów przez grupy planujące ustanowienie ortotopowego modelu gryzoni do badania transplantacji jelita.
Protokół
1. Operacja dawcy
- Szczura dawcę należy poddać 24-godzinnej głodówce (zapewniając swobodny dostęp do wody/roztworu glukozy).
- Aby wprowadzić znieczulenie inhalacyjne izofluranem, należy rozpocząć od stężenia 2% przy użyciu standardowego atomizera, a następnie zmniejszyć je do 1% po wykonaniu laparotomii. Sedację należy sprawdzić za pomocą ucisku palca u nogi.
- Należy ogolić brzuch i trzykrotnie oczyścić go preparatem do przygotowania skóry (Kodan). Następnie, po podskórnym podaniu leku przeciwbólowego, należy wykonać cięcie pośrodkowe.
- Po owinięciu przeszczepu gazą nasączoną solą fizjologiczną, należy delikatnie oddzielić fizjolo....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Standardowy przebieg pooperacyjny
Zwierzęta po przeszczepie powinny szybko dojść do siebie po zabiegu pod lampą grzewczą przez około 1 hr. Hipotermia jest główną przyczyną śmiertelności pooperacyjnej i należy jej starannie zapobiegać w trakcie oraz po operacji. Straty płynów w trakcie operacji należy uzupełnić poprzez iniekcję s.c. 2,5 ml soli fizjologicznej oraz 2,5 ml 5% glukozy co 8 hr przez pierwsze 24 hr. Szczury powinny mieć również swobodny dostęp do roztworu glukozy (lub diety żelowej) or.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Chociaż modele przeszczepów jelita u szczurów opisywano już w latach 70. XX wieku 5, większość z niedawno stosowanych modeli opiera się na heterotopowym przeszczepieniu jelita z wykorzystaniem różnych technik 13. O ile procedury heterotopowe mają w ogólności zaletę łatwiejszych technik mikrochirurgicznych i lepszej dostępności przeszczepu do oceny, o tyle heterotopowe przeszczepienie jelita posiada istotną wadę w postaci pominięcia wielokrotnych interakcji przeszczepionego jelita cienkiego oraz jego.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Nie zgłoszono żadnych konfliktów interesów.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Roztwór University of Wisconsin (UW) (ViaSpan) | Bristol-Myers Squibb | ||
| Roztwór Uro-Nebacetin N | Nycomed | 6967855 | |
| Ampicylina | Ratiopharm | ||
| Karprofen (Rimadyl) | Pfizer | ||
| Nieresorbowalna nić chirurgiczna Prolene 10-0 | Ethicon | ||
| Resorbowalna nić chirurgiczna Monocryl 6-0 | Ethicon | ||
| Resorbowalna nić chirurgiczna Vicryl 3-0 | Ethicon | ||
| Kaniula i.v. G 20 1.1x33 mm | Braun | ||
| Kaniula i.v. G 22 0.9x25 mm | Braun | ||
| Kodan Skin Prep | Schülke | ||
| Roztwór infuzyjny NaCl 0.9% | Braun | ||
| Mała pęseta zakrzywiona | FineScienceTools | 11009-13 | |
| Mikropęseta zakrzywiona | AESCULAP | BD 333 | |
| Mikropęseta zakrzywiona | AESCULAP | FD281R | |
| Mikropęseta prosta 1 | WPI | 5 | |
| Mikropęseta prosta 2 | WPI | 2 | |
| Mikroigłowy uchwyt do igieł | WPI | 14081 | |
| Mikronożyczki | FineScienceTools | 15006-09 | |
| Mikroskalpel | MANI | Ophthalmic knife | |
| Mikroklematy | AESCULAP | FB329R |
Bibliografia
- Abu-Elmagd, K. M., et al. Five Hundred Intestinal and Multivisceral Transplantations at a Single Center: Major Advances With New Challenges. Ann. Surg. 250 (4), 567-56 (2009).
- Berney, T., et al.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
