Erratum: Reagregacja kultur grasicy

Podsumowanie

Wprowadzono poprawkę do publikacji: Reaggregate Thymus Cultures. Ze względu na błąd wydawcy ponownie opublikowano poprawione streszczenie.

Streszczenie

Dokonano korekty w materiale: Reaggregate Thymus Cultures. Z powodu błędu wydawcy ponownie opublikowano poprawione streszczenie. Streszczenie zostało skorygowane na:

Komórki zrazowe w tkankach limfatycznych są zorganizowane w struktury trójwymiarowe, które tworzą rusztowanie uważane za kluczowe dla kontroli migracji i rozwoju komórek krwiotwórczych. Co istotne, utrzymanie tej trójwymiarowej organizacji wydaje się krytyczne dla prawidłowej funkcji komórek zrazowych, podczas gdy dwuwymiarowe hodowle monowarstw często wykazują zdolność do wspierania jedynie poszczególnych fragmentów funkcji tkanki limfatycznej. W grasicy złożone sieci nabłonkowych komórek korowych i rdzeniowych pełnią rolę ramy kontrolującej rekrutację, proliferację, różnicowanie i przeżycie progenitorów limfoidalnych w trakcie wieloetapowego procesu wewnątrzgrasiczowego rozwoju limfocytów T. Zrozumienie funkcjonalnej roli poszczególnych przedziałów zrazowych w grasicy jest niezbędne do określenia, w jaki sposób grasica wprowadza rozróżnienie między własnymi a obcymi antygenami. W niniejszej pracy opisujemy technikę, w której wykorzystujemy plastyczność tkanek płodowych do ponownego łączenia się w nienaruszone struktury trójwymiarowe in vitro po ich enzymatycznej dysagregacji. Rozdział płatów grasicy płodu na heterogeniczne mieszaniny komórkowe, a następnie ich separację na poszczególne komponenty komórkowe, łączy się z ponownym łączeniem in vitro wybranych typów komórek w trójwymiarowe struktury reaggregatów w określonych proporcjach, co stwarza możliwość badania konkretnych aspektów rozwoju limfocytów T w zdefiniowanych warunkach komórkowych. (Artykuł ten opiera się na pracy opublikowanej po raz pierwszy w Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 strony 185-196).

z

W grasicy niedojrzałe tymocyty CD4+8+ wykazujące losowo przearanżowane geny łańcuchów α i β receptora komórek T podlegają procesom selekcji pozytywnej i negatywnej w zależności od ich zdolności do rozpoznawania cząsteczek własnych peptydów/głównego układu zgodności tkankowej (MHC) eksprymowanych przez komórki zrębu grasicy. Analiza in vivo roli komórek zrębu grasicy podczas selekcji wewnątrzgrasicowej jest utrudniona ze względu na złożoność komórkową mikrośrodowiska grasicy w stanie spoczynku u dorosłych osobników oraz brak odpowiednich strategii celowania w celu manipulacji ekspresją genów w konkretnych przedziałach zrębu grasicy. Wykazaliśmy, że mikrośrodowiskiem grasicy można łatwo manipulować in vitro przy użyciu kultur organowych z reaggregowanych tkanek grasicy, które umożliwiają przygotowanie trójwymiarowych płatów grasicy z określonych komórek zrębu i limfoidalnych. Chociaż inne systemy in vitro wspierają niektóre aspekty rozwoju komórek T, kultura organowa z reaggregowanych tkanek grasicy pozostaje jedynym systemem in vitro zdolnym do wspierania efektywnych procesów selekcji tymocytów zależnych od MHC klasy I i II, a zatem może być stosowana jako skuteczne narzędzie do badania regulacji komórkowej i molekularnej selekcji pozytywnej i negatywnej w grasicy.

Protokół

Wprowadzono poprawkę do publikacji: Reaggregate Thymus Cultures. Z powodu błędu wydawcy ponownie opublikowano poprawione streszczenie. Streszczenie zostało zmienione na:

Komórki stromy w tkankach limfatycznych są zorganizowane w struktury trójwymiarowe, które stanowią rusztowanie uważane za kontrolujące migrację i rozwój komórek krwiotwórczych. Co istotne, utrzymanie tej trójwymiarowej organizacji wydaje się być kluczowe dla prawidłowego funkcjonowania komórek stromy, podczas gdy dwuwymiarowe hodowle monowarstw często wykazują zdolność do wspierania jedynie poszczególnych fragmentów funkcji tkanki limfatycznej. W grasicy złożone sieci komórek nabłonkowych korowych i rdzeniowych pełnią rolę szkieletu kontrolującego rekrutację, proliferację, różnicowanie i przeżywalność progenitorów limfoidalnych w trakcie wieloetapowego procesu wewnątrzgrasiczowego rozwoju limfocytów T. Zrozumienie funkcjonalnej roli poszczególnych przedziałów stromy w grasicy jest niezbędne do ustalenia, w jaki sposób grasica narzuca rozróżnienie między swoimi a obcymi antygenami. Opisujemy tutaj technikę, w której wykorzystujemy plastyczność tkanek płodowych do ponownego łączenia się w nienaruszone struktury trójwymiarowe in vitro po ich enzymatycznej dysagregacji. Dysocjację płatów grasicy płodu do heterogenicznych mieszanin komórkowych, a następnie ich rozdzielenie na poszczególne komponenty komórkowe, łączy się z ponownym łączeniem in vitro wybranych typów komórek w trójwymiarowe struktury reaggregatów w określonych proporcjach, co stwarza możliwość badania konkretnych aspektów rozwoju limfocytów T w zdefiniowanych warunkach komórkowych. (Niniejszy artykuł opiera się na pracy opublikowanej po raz pierwszy w Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380 strony 185-196).

z

W grasicy niedojrzałe tymocyty CD4+8+, wykazujące losowo przearanżowane geny łańcuchów α i β receptora komórek T, podlegają procesom selekcji pozytywnej i negatywnej w zależności od ich zdolności do rozpoznawania cząsteczek własnych peptydów/głównego układu zgodności tkankowej (MHC) eksprymowanych przez komórki stropowe grasicy. Analiza in vivo roli komórek stropowych grasicy podczas selekcji wewnątrzgrasiczej jest utrudniona ze względu na złożoność komórkową mikrośrodowiska grasicy w stanie spoczynku u dorosłych osobników oraz brak odpowiednich strategii celowania w celu manipulacji ekspresją genów w konkretnych przedziałach stropowych grasicy. Wykazaliśmy, że mikrośrodowiskiem grasicy można łatwo manipulować in vitro za pomocą hodowli organowych z reaggregatów grasicy, które umożliwiają przygotowanie trójwymiarowych płatów grasicy z określonych komórek stropowych i limfoidalnych. Chociaż inne systemy in vitro wspierają niektóre aspekty rozwoju komórek T, hodowla organowa z reaggregatów grasicy pozostaje jedynym systemem in vitro zdolnym do wspierania efektywnych procesów selekcji tymocytów zależnych od MHC klasy I i II, a zatem może być wykorzystywana jako skuteczne narzędzie do badania regulacji komórkowej i molekularnej selekcji pozytywnej i negatywnej w grasicy.