Erratum: Przygotowanie kultur organowych grasicy traktowanych 2-dGuo

Podsumowanie

Wprowadzono korektę do publikacji: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Ze względu na błąd wydawcy ponownie opublikowano poprawione streszczenie.

Streszczenie

Dokonano poprawki w artykule: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Ze względu na błąd wydawcy ponownie opublikowano poprawione streszczenie. Streszczenie zostało sprostowane na:

W grasicy oddziaływania między rozwijającymi się prekursorami limfocytów T a komórkami zrębowymi, w tym komórkami nabłonkowymi kory i rdzenia, odgrywają kluczową rolę w powstawaniu funkcjonalnie kompetentnej puli limfocytów T. Jednak złożoność rozwoju limfocytów T w grasicy in vivo może ograniczać analizę poszczególnych komponentów komórkowych i konkretnych etapów rozwoju. Systemy hodowli in vitro stanowią łatwo dostępny sposób badania wielu złożonych procesów komórkowych. Systemy hodowli organowej grasicy są powszechnie stosowanym podejściem do badania wewnątrzgrasicowego rozwoju limfocytów T w określonych warunkach in vitro. W niniejszej pracy opisujemy system, w którym płaty embrionalnej grasicy myszy mogą zostać pozbawione endogennych elementów hemopoetycznych poprzez wcześniejszą hodowlę organową w 2-deoksyguanozynie, związku selektywnie toksycznego dla komórek hemopoetycznych. Technika ta, oprócz zapewnienia łatwo dostępnego źródła komórek zrębowych grasicy do badania roli mikrośrodowiska grasiczki w rozwoju i selekcji limfocytów T, stanowi również podstawę dla dalszych podejść eksperymentalnych, obejmujących rekonstrukcję alimpfoidalnych płatów grasicy in vitro z określonymi elementami hemopoetycznymi, transplantację alimpfoidalnych grasic do myszy biorców oraz tworzenie reagregowanych hodowli organowych grasicy. (Artykuł ten opiera się na pracy opublikowanej po raz pierwszy w Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, strony 185-196).

z

W grasiczce niedojrzałe tymocyty CD4+8+, wykazujące losowo przearanżowane geny łańcuchów α i β receptora komórek T, podlegają zdarzeniom selekcji pozytywnej i negatywnej w zależności od ich zdolności do rozpoznawania cząsteczek kompleksu peptyd własny/główny układ zgodności tkankowej (MHC) wykazywanych przez komórki zrębu grasiczki. Analiza in vivo roli komórek zrębu grasiczki podczas selekcji wewnątrzgrasiczkowej jest utrudniona ze względu na złożoność komórkową mikrośrodowiska grasiczki w stanie spoczynkowym u dorosłych oraz brak odpowiednich strategii celowania pozwalających na manipulowanie ekspresją genów w konkretnych przedziałach zrębu grasiczki. Wykazaliśmy, że mikrośrodowisko grasiczki można łatwo manipulować in vitro poprzez zastosowanie kultur organowych grasiczki z reaggregatów, które umożliwiają przygotowanie trójwymiarowych płatów grasiczki z określonych komórek zrębu i komórek limfoidalnych. Chociaż inne systemy in vitro wspierają niektóre aspekty rozwoju komórek T, kultura organowa grasiczki z reaggregatów pozostaje jedynym systemem in vitro zdolnym do wspierania efektywnych zdarzeń selekcji tymocytów zapośredniczonych przez MHC klasy I i II, a zatem może być wykorzystana jako skuteczne narzędzie do badania regulacji komórkowej i molekularnej selekcji pozytywnej i negatywnej w grasiczce.

Protokół

Wprowadzono korektę do: Preparation of 2-dGuo-Treated Thymus Organ Cultures. Z powodu błędu wydawcy ponownie opublikowano poprawione streszczenie. Streszczenie zostało skorygowane w następujący sposób:

W grasicy oddziaływania między rozwijającymi się prekursorami limfocytów T a komórkami stromaльными, w tym komórkami nabłonkowymi korowymi i rdzeniowymi, odgrywają kluczową rolę w powstawaniu funkcjonalnie kompetentnej puli limfocytów T. Jednak złożoność rozwoju limfocytów T w grasicy in vivo może ograniczać analizę poszczególnych komponentów komórkowych i konkretnych etapów rozwoju. Systemy kultur in vitro stanowią łatwo dostępny sposób badania wielu złożonych procesów komórkowych. Systemy kultur organowych grasicy reprezentują powszechnie stosowane podejście do badania wewnątrzgrasiczowego rozwoju limfocytów T w określonych warunkach in vitro. Opisujemy tutaj system, w którym płaty embrionalnej grasicy mysiej mogą zostać pozbawione endogennych elementów krwiotwórczych poprzez wcześniejszą hodowlę organu w 2-deoksyguanozynie, związku selektywnie toksycznego dla komórek krwiotwórczych. Technika ta, oprócz zapewnienia łatwo dostępnego źródła stroma unexpectedlnych komórek grasicy do badania roli mikrośrodowiska grasicy w rozwoju i selekcji limfocytów T, stanowi również podstawę dla dalszych podejść eksperymentalnych, obejmujących rekonstrukcję bezlimfocytowych płatów grasicy in vitro z określonymi elementami krwiotwórczymi, transplantację bezlimfocytowej grasicy do myszy biorcy oraz tworzenie reaglomerowanych kultur organowych grasicy. (Artykuł ten opiera się na pracy po raz pierwszy opisanej w Methods in Molecular Biology 2007, Vol. 380, strony 185-196).

z

W grasicy niedojrzałe tymocyty CD4+8+ wykazujące losowo przegrupowane geny łańcuchów α i β receptorów limfocytów T podlegają procesom selekcji pozytywnej i negatywnej w zależności od ich zdolności do rozpoznawania cząsteczek kompleksu peptyd-główny układ zgodności tkankowej (MHC) ekspresjonowanych przez komórki stromaalne grasicy. Analiza in vivo roli komórek stromałych grasicy podczas selekcji wewnątrzgrasiczkowej jest utrudniona ze względu na złożoność komórkową mikrośrodowiska grasicy w stanie spoczynku u dorosłych oraz brak odpowiednich strategii celowania umożliwiających manipulację ekspresją genów w konkretnych przedziałach stroma lnych grasicy. Wykazaliśmy, że mikrośrodowisko grasicy można łatwo modyfikować in vitro poprzez zastosowanie kultur organowych z reaggregowanych fragmentów grasicy, które umożliwiają przygotowanie trójwymiarowych płatów grasicy z określonych komórek stroma lnych i limfoidalnych. Chociaż inne systemy in vitro wspierają niektóre aspekty rozwoju limfocytów T, kultura organowa z reaggregowanych fragmentów grasicy pozostaje jedynym systemem in vitro zdolnym do wspierania wydajnych procesów selekcji tymocytów zależnych od MHC klasy I i II, a zatem może być wykorzystana jako skuteczne narzędzie do badania regulacji komórkowej i molekularnej selekcji pozytywnej i negatywnej w grasicy.