Paradygmat rezydent-intruz: Standaryzowany test agresji, przemocy i stresu społecznego

Podsumowanie

Niniejszy film przedstawia paradygmat rezydent-intruz u szczurów. Test ten jest wystandaryzowaną metodą pomiaru agresji ofensywnej, zachowań obronnych oraz przemocy w warunkach półnaturalnych. Wyjaśniono również zastosowanie tego paradygmatu w eksperymentach dotyczących stresu społecznego.

Streszczenie

Niniejsza publikacja wideo szczegółowo wyjaśnia protokół eksperymentalny paradygmatu rezydenta-intruza u szczurów. Test ten jest standaryzowaną metodą pomiaru agresji ofensywnej oraz zachowań obronnych w warunkach półnaturalnych. Najważniejsze elementy behawioralne wykonywane przez rezydenta i intruza zostały zaprezentowane w filmie i zilustrowane za pomocą rysunków artystycznych. Wyjaśniono również zastosowanie paradygmatu rezydenta-intruza w eksperymentach dotyczących ostrego i chronicznego stresu społecznego. Na koniec przedstawiono krótkie testy i kryteria pozwalające odróżnić agresję od jej bardziej gwałtownych i patologicznych form.

Wprowadzenie

Zachowania agresywne należą do naturalnego repertuaru behawioralnego niemal wszystkich gatunków zwierząt. Z punktu widzenia biologii zachowania agresywne można uznać za wysoce funkcjonalną formę komunikacji społecznej, której celem jest aktywna kontrola środowiska społecznego. Charakteryzują się one zestawem zachowań typowych dla danego gatunku, wykonywanych w bezpośredniej interakcji z przeciwnikiem. Jawna agresja i konflikty fizyczne są potencjalnie szkodliwe nie tylko dla ofiary, ale również dla agresora. Dlatego w całym świecie zwierząt wykształciły się mechanizmy minimalizujące i kontrolujące agresję fizyczną, aby zapobiec jej potencjalnie niekorzystnym skutkom. Takie mechanizmy obejmują na przykład zachowania zastraszające, które często zapowiadają, a tym samym mogą zapobiegać atakom fizycznym. Innymi mechanizmami utrzymania agresji pod kontrolą są tabu, rytualizacja, uległość, pojednanie i przebłagiwanie. Dotyczy to w szczególności agresji ofensywnej, która jest formą zachowania agresywnego charakteryzującą się inicjatywą sprawcy oraz szeregiem wstępnych, często zastraszających sygnałów behawioralnych przed próbą dotarcia do pleców i karku jako niewrażliwych celów konsumatorycznych ugryzień agresywnych. Mimo tak wysoce adaptacyjnych mechanizmów kontrolnych istnieją przykłady przekształcenia się funkcjonalnej agresji w przemoc, którą można zdefiniować jako raniącą formę agresji ofensywnej, wymykającą się spod kontroli i pozbawioną kontekstu; jest to patologiczna forma zachowania ofensywnego, która nie podlega już hamującym mechanizmom kontrolnym i nie wnosi dodatkowej wartości funkcjonalnej do normalnych zachowań agresywnych w komunikacji społecznej ⁸. Przemoc różni się zatem zarówno ilościowo, jak i jakościowo od normalnej adaptacyjnej ofensywności. Może ona obejmować ataki z ugryzieniami wymierzone w wrażliwe części ciała, takie jak gardło, brzuch i łapy, które normalnie są niedostępne ^{5, 13, 20, 24}.

Agresja obronna to forma zachowania agresywnego występująca w odpowiedzi na atak innego osobnika. Wyraźnie różni się ona od agresji ofensywnej pod względem ekspresji behawioralnej oraz mechanizmów hamujących ⁵. Należy zauważyć, że ekstremalne formy zachowań obronnych mogą mieć charakter gwałtowny.

Większość badań nad agresją w fazie przedklinicznej prowadzi się na terytorialnych samcach szczurów lub myszy rezydujących, które konfrontują się z intruzem z tego samego gatunku. Ten tak zwany paradygmat rezydent-intruz umożliwia spontaniczną i naturalną ekspresję zarówno agresji ofensywnej, jak i zachowań obronnych u gryzoni laboratoryjnych w półnaturalnych warunkach laboratoryjnych. Poprzez rejestrowanie częstotliwości, czasu trwania, latencji oraz wzorców czasowych i sekwencyjnych wszystkich obserwowanych aktów behawioralnych i postaw uczestników walki podczas tych konfrontacji, uzyskuje się szczegółowy obraz ilościowy (etogram) agresji ofensywnej (rezydenta) i obronnej (intruza). Szczegółowe opisy poszczególnych zachowań znajdują się w publikacjach ^{3, 12, 18}. Paradygmat ten opiera się na fakcie, że dorosły samiec szczura ustanowi terytorium, jeśli zapewni mu się wystarczającą przestrzeń życiową. Terytorialność jest silnie wzmocniona w obecności samic i/lub przez doświadczenie seksualne ¹. W konsekwencji terytorialności rezydent zaatakuje nieznane samce wdzierające się do jego klatki domowej. Zatem agresję ofensywną można badać, wykorzystując rezydenta jako zwierzę doświadczalne. Aby określić gwałtowny charakter agresji, można ocenić, czy atak następuje poza kontekstem i kontrolą hamującą, stosując różne typy intruzów, takie jak samice, samce znieczulone lub nowe środowisko. Szczegółowa analiza ilościowa repertuaru zachowań ofensywnych jest niezbędna, aby ujawnić, w jakim stopniu obserwowana agresja jest poza kontrolą.

W paradygmacie rezydent-intruz osobniki pełniące rolę intruzów wykazują zachowania obronne w odpowiedzi na agresywne ataki rezydenta. Paradygmat ten pozwala zatem na badanie zachowań obronnych oraz stresu społecznego, wykorzystując intruza jako zwierzę doświadczalne. Formę przewlekłego stresu społecznego można wywołać poprzez wielokrotne wykorzystanie zwierzęcia doświadczalnego w roli intruza lub poprzez umieszczenie go w klatce (terytorium) rezydenta, z oddzieleniem ich za pomocą siatki z drutu ⁴.

Jak każdy paradygmat stresowy, paradygmat rezydent-intruz nie jest wolny od kwestii etycznych. Chcielibyśmy zatem przedstawić szereg rozważań etycznych. Agresja, przemoc i stres społeczny stanowią poważne problemy w naszym społeczeństwie. Raport Światowej Organizacji Zdrowia wskazuje, że przemoc interpersonalna jest nie tylko główną przyczyną zgonów na całym świecie, ale także głównym źródłem poważnych problemów zdrowotnych u osób, które przeżyły agresję ¹⁹. W związku z tym istnieje potrzeba zrozumienia tych zachowań w kontekście ich podstawowych mechanizmów przyczynowych i czynników modulujących. Modele zwierzęce są niezbędne do uzyskania eksperymentalnego potwierdzenia przyczynowego wpływu czynników fizjologicznych i środowiskowych. Z biologicznego punktu widzenia agresja jest naturalną, biologicznie funkcjonalną formą zachowania społecznego, mającą na celu ustanowienie terytorium, dominację społeczną i obronę zasobów. Paradygmat rezydent-intruz przenosi tę naturalną formę zachowania do warunków laboratoryjnych, co pozwala na kontrolowane badania zarówno agresora, jak i ofiary. Kwestią budzącą obawy etyczne jest pytanie, w jakim stopniu dobrostan zwierzęcia zostaje naruszony podczas ekspozycji na ten paradygmat. Kilka badań wykazuje, że przejawianie ofensywnych zachowań agresywnych i wygrywanie walki są wysoce satysfakcjonujące i/lub wzmacniające ¹¹. Z tej perspektywy rezydent nie cierpi. Jednak interakcja agresywna wymaga również przeciwnika. Zachowania obronne i uległość należą do naturalnego repertuaru radzenia sobie z dominacją. Porażka i podporządkowanie wyzwalają adaptacyjną odpowiedź behawioralną i fizjologiczną, mającą na celu przyjęcie pozycji podporządkowanej w grupie społecznej. Z tego punktu widzenia początkowa reakcja podczas porażki doprowadzi do powstania dobrze zaadaptowanego zwierzęcia, które niekoniecznie cierpi ¹⁵. Dopiero powtarzająca się ekspozycja na osobnika dominującego oraz izolacja społeczna po porażce mogą doprowadzić do stanu wykraczającego poza zdolności adaptacyjne zwierzęcia. Sprawia to, że paradygmat ten jest odpowiednim modelem zwierzęcym dla patologii stresu o wysokiej trafności ekologicznej ¹⁷. Choć stres wynikający z porażki społecznej ma głównie charakter psychospołeczny, mogą wystąpić obrażenia fizyczne i rany. W normalnej (nieprzemocowej) interakcji społecznej obrażenia fizyczne są ograniczone. Gryzienie występuje głównie w okolicy grzbietu i boków przeciwnika; jest to obszar ciała o grubej i twardej skórze ^{5, 6}. Gryzienie to w rzeczywistości krótkie przygryzanie skóry, pozostawiające niewielkie odciski siekaczy. Ten rodzaj uszkodzenia skóry nie wymaga opieki weterynaryjnej. Jednak biologicznie funkcjonalna agresja może przekształcić się w patologiczną, gwałtowną formę agresji, która jest niekontrolowana i pozbawiona kontekstu. W takich sytuacjach mogą wystąpić poważniejsze rany, zadawane w szczególności w wrażliwych regionach ciała (brzuch, gardło i łapy) ¹⁴. Aby systemy modeli eksperymentalnych gwałtownych zachowań agresywnych były istotne klinicznie, muszą być trafne, a ten rozwój stwarza centralny dylemat etyczny tego typu badań nad agresją, mianowicie kwestię wyrządzania krzywdy i obrażeń. Badania te rządzą się dwiema przeciwstawnymi zasadami: trafność zewnętrzna (face validity) zostaje osiągnięta, gdy zachowanie jest potencjalnie szkodliwe i powoduje obrażenia, a jednocześnie każda etyczna wytyczna badawcza kładzie nacisk na redukcję i unikanie ryzyka wyrządzenia krzywdy lub obrażeń. Każde pytanie badawcze i protokół muszą analizować, jaka ilość krzywdy i obrażeń jest niezbędna lub akceptowalna, aby wygenerować naukowo trafne informacje, które mogą zostać przełożone na problemy systemu zdrowia publicznego. Gdy głównym celem eksperymentu są badania nad przemocą, oczywiste jest, że należy otoczyć ofiarę szczególną opieką w zakresie leczenia ran, a nawet przeprowadzić eutanazję. Obecność poważnych ran w wrażliwych regionach ciała powinna stanowić humanistyczny punkt końcowy dla intruza. Gdy głównym celem eksperymentu jest stres społeczny, interakcję należy przerwać, gdy rezydent wykaże oznaki przemocy powodujące poważne rany pogryzienia w wrażliwych częściach ciała. W końcu psychospołeczna natura paradygmatu stresowego nie powinna być mylona ze stresem wynikającym z ciężkich obrażeń fizycznych. Rezydenci wykazujący takie oznaki przemocy powinni zostać wykluczeni z eksperymentu.

Protokół

1. Układ eksperymentalny

1. Dla każdego osobnika należy przygotować klatkę o powierzchni dna wynoszącej około pół metra kwadratowego. Agresja ofensywna jest wysoce aktywną formą zachowania, która wymaga wystarczającej przestrzeni do pełnej ekspresji. Klatka powinna być wykonana z materiału umożliwiającego dezynfekcję.
2. Przed rozpoczęciem eksperymentów należy przetrzymywać każdego osobnika z samicą przez co najmniej jeden tydzień, co ułatwi rozwój terytorializmu. Jednocześnie zapobiegnie to izolacji społecznej, która jest znana jako czynnik stresowy dla zwierząt społecznych i może prowadzić do obniżenia dobrostanu oraz wystąpienia aberrantnych form zachowań społecznych.
3. Należy wykorzystać samice towarzyszące, wysterylizowane poprzez podwiązanie jajowodów. W ten sposób samica pozostaje nienaruszona hormonalnie i będzie regularnie receptywna, bez ryzyka zapłodnienia i wykształcenia agresji macierzyńskiej.

2. Procedura

1. Umieścić rezydenta (samca) oraz towarzyszącą mu samicę razem w klatce rezydenta na co najmniej jeden tydzień przed rozpoczęciem testów.
2. Nie wymieniać ściółki w klatce podczas tego pierwszego tygodnia ani przed późniejszymi testami, ponieważ terytorialność opiera się w dużej mierze na obecności sygnałów zapachowych. Sygnały te są istotne zarówno dla rezydenta w celu ustanowienia własnego terytorium, jak i dla intruza, aby wiedział, że znajduje się w klatce domowej rezydenta. Należy pamiętać, że to odstępstwo od ogólnych procedur opieki nad zwierzętami może wymagać specjalnej zgody odpowiednich organów.
3. Usunąć towarzyszącą samicę z klatki rezydenta na godzinę przed testem.
4. Na początku testu wprowadzić nieznanego samca do klatki domowej rezydenta. Preferowane jest, aby intruz był nieco mniejszy od rezydenta i nie brał udziału w poprzednich interakcjach z tym samym osobnikiem.
5. Rejestrować zachowanie rezydenta, najlepiej za pomocą kamery wideo czułej na światło.
6. Czas trwania testu wynoszący 10 min jest zazwyczaj wystarczający do ujawnienia pełnego repertuaru zachowań agresywnych. W celu standaryzacji można rozważyć kontynuowanie rejestracji przez dziesięć minut po pierwszym ataku.
7. Po zakończeniu testu usunąć samca intruza z klatki i ponownie połączyć samca rezydenta z towarzyszącą mu samicą.
8. Choć agresja może wystąpić o każdej porze dnia, najlepiej przeprowadzać testy wyłącznie podczas fazy ciemnej, która jest główną fazą aktywności szczurów.
9. Testy można przeprowadzać raz lub dwa razy dziennie. Poziom zachowań agresywnych często wzrasta podczas pierwszych kilku testów, ale zazwyczaj stabilizuje się po trzech lub czterech próbach.

3. Ofensywne zachowania agresywne

1. W zasadzie jako zwierzęta rezydentne można wykorzystać dowolną szczep szczurów. Jednakże szczepy mogą znacznie różnić się pod względem bezwzględnego poziomu zachowań agresywnych. Ponadto w obrębie szczepów może występować znaczna zmienność osobnicza.
2. Należy maksymalnie ustandaryzować zwierzęta intruzów pod względem szczepu, wieku i masy ciała. Należy użyć szczurów z nieagresywnego szczepu, których masa ciała jest nieco niższa niż masa samca rezydenta.
3. U samca rezydenta należy określić czas trwania i częstotliwość następujących parametrów behawioralnych:
   1. Latencja ataku: czas między wprowadzeniem intruza a pierwszym atakiem z chwytaniem
   2. Ruch w kierunku intruza
   3. Eksploracja społeczna
   4. Wąchanie okolic odbytu i narządów płciowych
   5. Stanie na tylnych łapach
   6. Zagrożenie boczne
   7. Postawa wyprostowana
   8. Atak z chwytaniem
   9. Przytrzymywanie przy ziemi
   10. Pościg
   11. Eksploracja niespołeczna
   12. Odpoczynek lub nieaktywność
4. Analizy
   1. Zarejestrowane parametry behawioralne powinny obejmować 100% czasu obserwacji. Ułatwia to bezstronną interpretację wyników, i.e. gdy częstotliwość jednego zachowania wzrasta, drugiego musi spaść.
   2. Redukcję danych można uzyskać poprzez obliczenie wyników dla różnych kategorii behawioralnych; w szczególności:
      1. Całkowity wynik agresji: suma zagrożeń bocznych, postaw wyprostowanych, ataków z chwytaniem, przytrzymywania przy ziemi i pościgów
      2. Wynik eksploracji społecznej: suma eksploracji społecznej, wąchania okolic odbytu i narządów płciowych oraz pielęgnacji społecznej
   3. Dane można przedstawić jako procenty całkowitego czasu obserwacji

4. Przemoc

1. Postępuj zgodnie z protokołem opisanym w sekcji 2
2. Testy behawioralne i kryteria:
   1. Oznacz latencję ataku u samca rezydenta. Bardzo krótka latencja jest pierwszym wskaźnikiem agresji.
   2. Oblicz dla samca rezydenta stosunek częstotliwości groźby bocznej do chwytów (clinch). Stosunek poniżej 1 wskazuje, że zwierzęta atakują bez żadnych zachowań wprowadzających i ostrzeżeń, co jest wiarygodnym wskaźnikiem agresji (braku kontroli).
   3. Miejsca ugryzień:
      1. Ataki z ugryzieniami wymierzone w wrażliwe części ciała, takie jak gardło, brzuch i łapy, są oznaką agresji.
      2. Ugryzienia wymierzone w pysk przeciwnika wskazują na zachowanie obronne osobnika.
   4. Testy poza kontekstem:
      1. W roli intruza wykorzystaj nieznaną samicę. Atak na samicę jest oznaką agresji.
      2. W roli intruza wykorzystaj znieczulonego samca. Atak na znieczulonego samca jest oznaką agresji.
      3. Przetestuj zachowanie agresywne rezydenta w nowym środowisku. Brak zmiany w poziomie agresji w porównaniu z klatką domową jest oznaką agresji. Punktem końcowym tego testu jest pierwszy atak lub upływ dziesięciu minut, jeśli rezydent nie zaatakuje.

5. Zachowania obronne

1. Wybierz grupę dobrze wytrenowanych, wysoce agresywnych, nieprzemocowych samców rezydentów
2. Postępuj zgodnie z protokołem opisanym w sekcji 2
3. Wyznacz u intruza czas trwania i częstotliwość następujących parametrów behawioralnych (dodatkowo do punktu 3c):
   1. Latencja uległości
   2. Postawa uległa
   3. Odsuwanie się
   4. Ucieczka
   5. Obronna postawa wyprostowana
   6. Zastygnięcie
   7. Eksploracja niespołeczna
   8. Stanie na tylnych łapach
4. Analiza
   1. Redukcję danych można uzyskać poprzez obliczenie wskaźnika obrony, który jest sumą czasu spędzonego na ucieczce, obronnej postawie wyprostowanej, uległości i zastygnięciu

6. Stres społeczny

1. Postępuj zgodnie z protokołem opisanym w sekcji 5
2. W przypadku przerywanego stresu społecznego powtórz protokół
3. W przypadku przewlekłego stresu społecznego pozostaw intruza w klatce rezydenta, ale oddziel go od niego siatką drucianą
4. Kontynuuj krok b i/lub c tak długo, jak wymagają tego pytania naukowe i hipotezy.

Wyniki

Występuje znaczna zmienność poziomu agresywnych zachowań ofensywnych pomiędzy szczepami oraz w obrębie tych samych szczepów. Zostało to przedstawione na Rysunku 1, który obrazuje rozkład częstości wyników agresji ofensywnej u szczepu szczurów hodowanych laboratoryjnie, ale pierwotnie dzikich (szczep Wild Type Groningen (WTG)) (Rysunek 1a), oraz u bardziej powszechnego szczepu szczurów laboratoryjnych (Wistar, Rysunek 1b). W szczepie WTG około jedna trzecia zwierząt wykazuje ekstremalną agresję, podczas gdy kolejna trzecia jest nieagresywna lub wykazuje bardzo niską agresję. Kontrastuje to z rozkładem częstości w szczepie Wistar, w którym fenotyp wysokiej agresji nie występuje, a około pięćdziesiąt procent zwierząt można uznać za mało agresywne lub nieagresywne ¹⁶.

Rysunek 2 przedstawia rozkład różnych kategorii behawioralnych w paradygmacie rezydent-intruz z wykorzystaniem szczepu WTG jako rezydentów (Rysunek 2a) oraz szczurów Wistar jako intruzów (Rysunek 2b). Przedstawiono średni skład zachowań ofensywnych u szczura rezydenta WTG oraz średni skład zachowań obronnych u intruza Wistar w odniesieniu do względnej ilości czasu poświęconego na poszczególne zachowania.

Rysunek 3 przedstawia przykład zastosowania paradygmatu rezydent-intruz w farmakologii behawioralnej. Selektywny agonista receptorów serotoninowych 1a, Alnespirone, wywołuje zależną od dawki redukcję agresji ofensywnej, której towarzyszy zależny od dawki wzrost eksploracji społecznej. Brak jakichkolwiek istotnych efektów w zakresie eksploracji niespołecznej i nieaktywności wspiera pogląd, że efekty behawioralne tego związku są specyficzne dla agresji ofensywnej ⁹.

U niektórych osobników agresja ofensywna może przerodzić się w gwałtowną formę agresji. Rozróżnienie między wysokim poziomem agresji a przemocą przedstawiono na Ryc. 4. Pomimo braku statystycznych różnic w wyniku obrazu agresji, dla gwałtownej formy agresji charakterystyczna jest bardzo krótka latencja ataku, atakowanie znieczulonego samca lub samicy, poważne zranienia oraz bardzo niski stosunek ataków zagrażających ⁸.

Rycina 1. Rozkład częstości indywidualnych poziomów agresji ofensywnej u szczurów z linii hodowanej laboratoryjnie, lecz pierwotnie dzikiej (A – panel górny) oraz u samców szczurów linii Wistar (B – panel dolny) ¹⁶.

Rysunek 2. Profil behawioralny rezydentów samców szczurów WTG (A) oraz intruzów szczurów Wistar (B) podczas dziesięciominutowego testu rezydent-intruz.

Rycina 3. Zależna od dawki redukcja agresji ofensywnej przez agonistę 5-HT1a Alnespirone ⁹. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą rycinię.

Rysunek 4. Porównanie samców o wysokim poziomie agresji z samcami gwałtownymi ⁸.

Dyskusja

Paradygmat rezydent-intruz może być wykorzystywany do badania agresji ofensywnej, zachowań obronnych, przemocy i stresu społecznego u szczurów, a po wprowadzeniu niewielkich modyfikacji również u innych gatunków gryzoni. W badaniach nad agresją można wykorzystać zasadniczo wszystkie szczepy szczurów. Jednakże nie wszystkie szczepy są równie odpowiednie. W zależności od dokładnego celu eksperymentu należy wziąć pod uwagę niektóre specyficzne cechy zwierząt. Ważne jest, aby zauważyć, że istnieją duże różnice między szczepami w poziomie i intensywności agresji ofensywnej przejawianej przez rezydenta. Rycina 1 przedstawia rozkład częstości występowania agresji ofensywnej u pierwotnie dzikiego szczepu szczurów (Rycina 1a) oraz u standardowego laboratoryjnego szczepu Wistar (Rycina 1b). Oba szczepy znacznie różnią się liczbą zwierząt, które w ogóle wykazują zachowania agresywne. Ponadto istnieje duża różnica w bezwzględnej skali agresji. U dzikiego szczepu szczurów poziom agresji w naszym standardowym 10 min teście waha się od 0% do 80%, podczas gdy u szczepu Wistar maksimum wynosi 25%; w tym drugim szczepie nie występuje fenotyp silnie agresywny ¹⁶.

Gdy paradygmat rezydent-intruz jest wykorzystywany do badania zachowań obronnych i stresu społecznego u intruza, w roli rezydentów niezbędne są osobniki o fenotypach wysoce agresywnych. W końcu rezydent musi w sposób niezawodny pokonać każdego intruza wkraczającego na jego terytorium. Oczywiście należy wybrać osobniki najbardziej agresywne, mając świadomość, że nawet w szczepie charakteryzującym się wysoką agresją nie wszystkie osobniki będą odpowiednie do tego celu. Należy użyć dojrzałych samców w wieku co najmniej czterech miesięcy ¹⁰, przy czym można rozważyć wykorzystanie byłych samców hodowlanych. Zaleca się, aby w dniach poprzedzających właściwe rozpoczęcie eksperymentu nad stresem społecznym samce pełniące rolę rezydentów zdobyły dodatkowe doświadczenie w interakcjach z intruzami. Jako intruzów można wykorzystać osobniki dowolnego szczepu. Jednak aby zagwarantować wyraźną wygraną rezydenta i porażkę intruza, zalecamy stosowanie intruzów o nieco niższej masie ciała niż samiec rezydent. Ponieważ sygnały olfaktoryczne są istotne w komunikacji społecznej i terytorializmie, czyszczenie klatki rezydenta przed testem stanowiłoby poważny czynnik zakłócający.

Zaleca się nagrywanie wideo oraz rejestrowanie pełnego repertuaru behawioralnego zwierzęcia doświadczalnego podczas testu. Pozwala to na obiektywną analizę wyników, i.e. gdy częstotliwość jednego zachowania wzrasta, prawdopodobne jest zmniejszenie się innego. Na przykład wyniki przedstawione na Rysunku 3 pokazują, że redukcja agresji po podaniu leku wiąże się ze zwiększeniem eksploracji społecznej, a nie z unieruchomieniem. Stanowi to dowód na to, że wywołany lekiem spadek agresji nie wynika z działania sedatywnego ani z efektu nieaktywności ruchowej. Całkowita punktacja agresji jest wskaźnikiem intensywności agresji, natomiast latencja pierwszego ataku oraz liczba atakujących zwierząt mogą służyć jako miara gotowości do ataku ²².

W eksperymentach nad stresem społecznym należy przyjąć jasne kryterium porażki społecznej. Niezawodnym kryterium porażki społecznej jest sytuacja, w której intruz przyjmuje postawę uległą (patrz wyżej) i utrzymuje ją nawet wtedy, gdy rezydent się oddala. Należy zauważyć, że warunki utrzymywania intruzów są niezwykle ważne w badaniach nad stresem społecznym. Po pierwsze, stres społeczny nie powinien być wywoływany w tym samym pomieszczeniu, w którym przebywają niepoddane stresowi zwierzęta kontrolne. Zwierzęta kontrolne będące świadkami stresu (społecznego) u innych osobników mogą same doświadczyć silnego stresu ^{7, 21}. Po drugie, skutki stresu społecznego są wrażliwe na efekty buforowania społecznego. Zwierzęta poddane stresowi społecznemu, które są utrzymywane w grupach, nie wykazują takich samych długoterminowych konsekwencji, jakie obserwuje się u zwierząt poddanych stresowi społecznemu, które następnie zostają odizolowane społecznie ²³.

Podsumowując, paradygmat rezydenta i intruza umożliwia badanie zarówno przyczyn, jak i skutków zachowań agresywnych. Jest to model o wysokiej trafności zewnętrznej i teoretycznej, który obejmuje nie tylko adaptacyjną biologię zachowań społecznych, ale może być również wykorzystywany do badania aspektów nieadaptacyjnych w kontekście przemocy i patologii stresu społecznego.