W niniejszym artykule opisano proces stosowany w Szpitalu Uniwersyteckim w Örebro do otrzymywania koncentratów płytkowych z warstwy leukocytarnej o podwójnej dawce, przygotowywanych z donacji krwi pełnej i poddawanych inaktywacji patogenów za pomocą systemu INTERCEPT Blood System. Jakość jednostek płytkowych in vitro oceniano w ciągu 7 dni przechowywania.
Artykuł metodologiczny
Przygotowanie i inaktywacja patogenów w koncentratach płytek krwi z podwójnej dawki warstwy leukocytowej z wykorzystaniem systemu INTERCEPT Blood System
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Centra krwiodawstwa mierzą się z wieloma wyzwaniami, w tym z maksymalizacją wydajności produkcji z otrzymanych donacji produktów krwi oraz zapewnieniem najwyższego możliwego poziomu bezpieczeństwa pacjentów poddawanych transfuzji, w tym ochrony przed chorobami przenoszonymi przez krew. Musi być to realizowane w sposób odpowiedzialny finansowo, minimalizujący koszty operacyjne, w tym między innymi koszty materiałów zużywalnych, sprzętu, utylizacji odpadów oraz personelu.
Dostępnych jest kilka metod wytwarzania koncentratów platelets do transfuzji. Jedną z najczęstszych jest metoda warstwy leukocytarnej (buffy coat), w której pojedyncza terapeutyczna jednostka platelets (≥ 2,0 x1011 platelets na jednostkę lub zgodnie z lokalnymi przepisami) jest przygotowywana poprzez łączenie warstwy leukocytarnej z maksymalnie sześciu donacji krwi pełnej. Procedura wytwarzania platelets pochodnych z krwi pełnej w „podwójnej dawce” została opracowana dopiero niedawno.
W niniejszej pracy przedstawiono nową metodę przygotowywania podwójnych dawek koncentratów krwineczek płytkowych pochodzących z krwi pełnej z puli 7 warstw leukocytarnych (buffy coats), a następnie poddawanie tych jednostek o podwójnej dawce działaniu systemu INTERCEPT Blood System w celu inaktywacji patogenów. System INTERCEPT został opracowany w celu inaktywacji wirusów, bakterii, pasożytów oraz zanieczyszczających białych krwinek dawcy, które mogą występować w donowanej krwi. Połączenie systemu INTERCEPT z metodą podwójnej dawki z warstw leukocytarnych poprzez zastosowanie zestawu do przetwarzania INTERCEPT z podwójnymi pojemnikami do przechowywania (tzw. „zestaw DS”), pozwala centrom krwiodawstwa na przetwarzanie każdej jednostki o podwójnej dawce w jednym zestawie do inaktywacji patogenów, co maksymalizuje bezpieczeństwo pacjenta przy jednoczesnej minimalizacji kosztów. Metoda podwójnej dawki z warstw leukocytarnych wymaga mniejszej liczby warstw leukocytarnych i redukuje zużycie materiałów eksploatacyjnych nawet o 50% (np. zestawów do pulowania, zestawów filtracyjnych, roztworów dodatkowych do płytek oraz sterylnych złączy) w porównaniu z przygotowaniem i przetwarzaniem jednostek płytek o pojedynczej dawce z warstw leukocytarnych. Inne oszczędności kosztów obejmują mniejszą ilość odpadów, rzadszą konserwację sprzętu, niższe zapotrzebowanie na energię, zmniejszenie czasu pracy personelu oraz niższy koszt pobrania w porównaniu z techniką aferezy.
Protokół
1. Pobieranie krwi pełnej
- Pobrać krew pełną od ochotników do zestawów do pobierania górno-dolnych o pojemności 450 ml, zgodnie z lokalnymi wytycznymi dotyczącymi pobierania krwi.
- Krew pełną przechowywać przez minimum 2 hr na płycie chłodzącej przed wirowaniem i separacją.
2. Przygotowanie warstwy leukocytarnej (buffy coat)
- Wirować krew pełną z dużą prędkością (hard spin), aby rozdzielić ją na trzy warstwy: erytrocyty, warstwę leukocyto-płytkową (buffy coat) oraz osocze. Zastosowane parametry wirowania to 4 880 RCF przez 11 min w temperaturze 22±2 °C.
- Użyć automatycznego separatora krwi, aby przenieść osocze do górnego worka satelitarnego, a erytrocyty (RBC) do dolnego worka satelitarnego, pozostawiając warstwę leukocyto-płytkową w pojemniku do pobierania. Docelowa średnia objętość i zakres hematokrytu dla warstwy leukocyto-płytkowej wynoszą odpowiednio około 48 ml i 37%.
- Warstwy leukocyto-płytkowe przechowywać przez noc na agitatorze do płytek w temperaturze 22±2 °C.
3. Łączenie warstw Buffy Coat
- Połącz sterylnie 7 warstw leukocytarnych (buffy coats) i 300 ml roztworu dodatku do płytek SSP+ (PAS) w konfiguracji szeregowej z liniami równoległymi w celu skrócenia długości układu; roztwór PAS powinien znajdować się na górze układu. Zaciśnij zacisk na linii między PAS a pierwszą warstwą leukocytarną.
- Otwórz połączenia sterylne między jednostkami z warstwami leukocytarnymi i pozwól treści warstw leukocytarnych spłynąć do ostatniego pojemnika.
- Otwórz spaw i zdejmij zacisk między PAS a pierwszą warstwą leukocytarną. Pozwól, aby jedna trzecia roztworu dodatku przepłukała kolejno każdy z pojemników z warstwami leukocytarnymi. Powtórz tę czynność jeszcze 2 razy, za każdym razem wykorzystując połowę pozostałego PAS.
- Średnia objętość puli warstw leukocytarnych powinna wynosić około 600 ml. Jeśli zachowana zostanie docelowa objętość i hematokryt poszczególnych warstw leukocytarnych, stosunek plazmy wyniesie 32 - 47%, co jest wymagane dla późniejszego etapu procesu – inaktywacji patogenów metodą INTERCEPT.
- Wyrzuć puste pojemniki po SSP+ i warstwach leukocytarnych.
- Aby uzyskać optymalną odzyskową ilość płytek, pozostaw pulę na agitatorze przez 1 hr przed wirowaniem.
- Połącz sterylnie pojemnik do przechowywania płytek z zintegrowanym filtrem do leukoredukcji z pulą warstw leukocytarnych.
- Wykonaj „miękkie wirowanie” (soft spin) puli warstw leukocytarnych, aby oddzielić erytrocyty od zawiesiny płytek (462 RCF przez 9 min, 20 sec). Odseparuj zawiesinę płytek za pomocą automatycznego separatora krwi przez filtr do leukoredukcji do pojemnika do przechowywania płytek.
- Wcześniej opisane wymagania procesowe zapewniają, że zawiesina płytek spełnia specyfikacje procesu INTERCEPT: objętość 300 ml - 420 ml, dawkę płytek 2.5-7.0 x 1011 oraz zawartość erytrocytów ≤ 4 x 106/ml.
4. Obróbka INTERCEPT
- Przeprowadź zabieg INTERCEPT przed końcem 1. dnia po pobraniu (dzień 0 to dzień pobrania).
- Wyjmij zestaw do przetwarzania INTERCEPT z podwójnymi pojemnikami do przechowywania z przezroczystej plastikowej torebki.
- Połącz sterylnie pojemnik z zawiesiną płytek z drenem pojemnika z amotosalenem w zestawie do przetwarzania INTERCEPT.
- Oznacz pojemniki do przechowywania w zestawie do przetwarzania INTERCEPT odpowiednią identyfikacją produktu krwi zgodnie z lokalnymi wymogami.
- Zawieś płytki i przełam najpierw dolną kaniulę w pojemniku z amotosalenem, pozwalając roztworowi amotosalenu wpłynąć do pojemnika do naświetlania. Przełam górną kaniulę w pojemniku z amotosalenem, umożliwiając przepływ płytek przez pojemnik z amotosalenem do pojemnika do naświetlania.
- Delikatnie wymieszaj płytki z amotosalenem i wypchnij powietrze z pojemnika do naświetlania do pojemnika z amotosalenem.
- Wypchnij niewielką ilość mieszaniny płytek do drenu, wypełniając około 4 cm drenu. Zapewnia to, że płytki zarówno w drenie, jak i w pojemniku do naświetlania zostaną poddane zabiegowi inaktywacji patogenów.
- Zaciśnij dren między pojemnikiem do naświetlania a pojemnikiem z amotosalenem. Pozostaw nie więcej niż około 4 cm drenu wystającego z pojemnika do naświetlania. Zdejmij i utylizuj puste pojemniki po płytkach i amotosalenie oraz zamknij zaciski w woreczkach do pobierania próbek.
- Umieść zestaw do przetwarzania w naświetlaczu, tak aby pojemnik do naświetlania znajdował się w dużej komorze po lewej stronie, a organizer w mniejszej komorze po prawej stronie.
- Za pomocą ręcznego skanera kodów kreskowych wprowadź do naświetlacza identyfikator donacji, kod produktu oraz numer serii zestawu do przetwarzania. Zamknij metalową osłonę i, gdy pojawi się komunikat w graficznym interfejsie naświetlacza, zamknij szufladę. Naciśnij „Start”, aby rozpocząć naświetlanie.
- Po naświetlaniu wyjmij zestaw do przetwarzania z naświetlacza. Naświetlacz automatycznie wydrukuje raport z zabiegu dla przetworzonych jednostek płytek.
- Wyjmij pojemniki z organizera i zawieś płytki oraz zestaw do przetwarzania, przełam kaniulę przy wylocie z pojemnika do naświetlania i pozwól płytkom wpłynąć do pojemnika z urządzeniem do adsorpcji związków (CAD).
- Uważając, aby nie zgiąć wkładu CAD, wypchnij powietrze z pojemnika CAD do pojemnika do naświetlania za pomocą ekstraktora plazmy.
- Zaciśnij dren w pobliżu portu wlotowego pojemnika CAD. Zdejmij i utylizuj pusty pojemnik do naświetlania.
- Umieść pojemnik CAD z dołączonymi pojemnikami do przechowywania na wstrząsaczu do płytek na co najmniej 6 hr, ale nie więcej niż 16 hr. Doprowadzi to do redukcji pozostałego amotosalenu do stężenia ≤ 2 μM.
- Po zabiegu CAD zdejmij jednostki płytek z wstrząsacza. Zawieś płytki. Przełam kaniulę i pozwól płytkom wpłynąć do pojemników do przechowywania.
- Wypchnij powietrze z pojemników do przechowywania do pojemnika CAD. Pozwól pozostałemu koncentratowi płytek spłynąć z powrotem do pojemników do przechowywania siłą grawitacji. Zaciśnij dren powyżej rozdzielacza Y i zdejmij pusty pojemnik CAD.
- W razie potrzeby rozdziel objętość między pojemnikami do przechowywania. Korektę objętości wykonuje się poprzez ważenie pojemników do przechowywania. Zaciśnij dren do każdego pojemnika do przechowywania kilka centymetrów powyżej wlotu do pojemnika; ułatwia to pobranie sterylnej próbki z produktu końcowego, zgodnie z opisem w punkcie 5.2.
5. Pobieranie próbek produktu
- W przypadku rutynowych testów kontroli jakości (QC), z końcowych pojemników do przechowywania można pobrać próbkę jednorazowo, korzystając z worka do pobierania próbek znajdującego się na pojemnikach. W tym celu należy upewnić się, że jednostka płytek jest dobrze wymieszana, następnie otworzyć zacisk worka i kilka razy go ścisnąć. Po napełnieniu worka płytkami należy uszczelnić dren. Przenieść próbkę płytek do odpowiedniej probówki laboratoryjnej i niezwłocznie wykonać analizy.
- Aby uzyskać próbki w wielu punktach czasowych w trakcie przechowywania, na przykład na potrzeby badania walidacyjnego, należy sterylnie połączyć nowy pojemnik do pobierania z drenem pojemnika do przechowywania płytek. Przed przeniesieniem do pojemnika do pobierania należy upewnić się, że płytki są dobrze wymieszane.
6. Ocena funkcji in vitro
- W ramach niniejszego badania walidacyjnego ocenę in vitro przeprowadzono po zastosowaniu CAD (w dniu 1. lub 2., w zależności od czasu trwania CAD), a następnie ponownie w dniu 4. (lub 5.) oraz w dniu 7. Pomiary in vitro obejmowały objętość, liczbę płytek krwi, pH, gazy krwi (pO2, pCO2), poziom glukozy, mleczanów oraz ocenę zjawiska swirlingu.
- Objętość określono na podstawie masy, przyjmując gęstość płytek w roztworze z dodatkiem równą 1,01 g/ml.
- Zanieczyszczenie hemoglobiną oceniono wizualnie poprzez porównanie ze skalą kolorystyczną.
- Zjawisko swirlingu określono wizualnie.
- Metodykę pozostałych analiz przedstawiono w „Tabeli sprzętu”.
7. Reprezentatywne wyniki
Proces otrzymywania koncentratów płytkowych z podwójnej dawki warstwy leukocytarnej (buffy coat) rozpoczyna się od przygotowania pojedynczych warstw leukocytarnych, które spełniają określone specyfikacje dotyczące objętości i hematokrytu. Ponieważ pomiar hematokrytu poszczególnych warstw leukocytarnych podczas końcowej walidacji procesu nie jest praktyczny, w pierwszej kolejności podjęto oddzielne działania w celu optymalizacji warstw leukocytarnych, aby zapewnić spójne osiąganie docelowej objętości i hematokrytu. Jak pokazano w Tabeli 1, zoptymalizowane warstwy leukocytarne wykazały wyniki zgodne z wartościami docelowymi zarówno dla objętości, jak i hematokrytu, wynosząc odpowiednio 46 ± 2 ml oraz 37 ± 3%.
Po połączeniu objętość i hematokryt puli warstwy leukocytarnej przed wirowaniem z niską prędkością (soft spin) powinny wynosić odpowiednio około 600 ml i 20%. Jak przedstawiono w Tabeli 2, nasze pule warstwy leukocytarnej miały średnią objętość 615 ± 5 ml, a średni hematokryt wynosił 19 ± 1%.
Centryfugacja z niską prędkością obrotową (soft spin) pozwala na uzyskanie koncentratu płytek krwi o podwójnej dawce, który spełnia wymagania wejściowe dla inaktywacji patogenów z wykorzystaniem zestawu procesowego INTERCEPT Blood System DS. Kluczowe parametry wejściowe dla obróbki systemem INTERCEPT obejmują objętość, liczbę płytek krwi, stosunek osocza oraz zawartość RBC. Dodatkowo dążymy do odzyskania ≥ 75% płytek w koncentracie płytek krwi w porównaniu z pulą warstwy leukocytarnej (buffy coat). Zgodnie z lokalnymi wymogami, zanieczyszczenie leukocytami (WBC) musi wynosić <1x106/jednostkę. Koncentraty płytek krwi w naszej walidacji spełniły kluczowe parametry dla obróbki systemem INTERCEPT, a także cele dotyczące zanieczyszczenia WBC i odzysku płytek, co przedstawiono w Tabeli 3.
Proces INTERCEPT służący do inaktywacji patogenów jest przeprowadzany na koncentracie płytek krwi w podwójnej dawce przy użyciu jednego zestawu do przetwarzania INTERCEPT. Zestaw do przetwarzania zawiera dwa zintegrowane pojemniki do przechowywania, które pozwalają na rozdzielenie przetworzonej jednostki na dwie indywidualne terapeutyczne dawki płytek krwi po zakończeniu procesu inaktywacji patogenów. Wytyczne europejskie wymagają, aby 75% badanych jednostek zawierało ≥ 200x109 płytek na dawkę terapeutyczną1; lokalne wymogi w Szwecji wymagają, aby 75% badanych jednostek zawierało >240x109 płytek na dawkę. Po zabiegu INTERCEPT średnia zawartość płytek wynosiła 265 ± 22 x109 (n=24). Ponadto 88% jednostek spełniło lub przekroczyło wartość 240x109 płytek na dawkę terapeutyczną; mieści się to w granicach zarówno wytycznych europejskich, jak i szwedzkich regulacji. Ilustrację procesu przygotowania warstwy leukocytarnej (buffy coat) w podwójnej dawce oraz procesu zabiegu INTERCEPT przedstawiono odpowiednio na Rysunkach 1 i 2.
W ramach tej walidacji zmierzono charakterystykę in vitro koncentratów płytek krwi po zastosowaniu metody INTERCEPT (tj. po rozdzieleniu na poszczególne pojemniki do przechowywania); parametry mierzono przez 7 dni przechowywania. Obliczono średnią i odchylenie standardowe dla dawki płytek krwi, pH, pO2, pCO2, produkcji mleczanów oraz zużycia glukozy.
Rycina 3 przedstawia średnią początkową dawkę płytek w koncentracie płytek o podwójnej dawce przed procesem INTERCEPT oraz średnią dawkę płytek w każdym z produktów rozdzielonych po procesie INTERCEPT w ciągu 7 dni przechowywania. Strata płytek podczas przechowywania wyniosła około 9%. Redukcja ta nie różni się od oczekiwanej utraty płytek podczas przechowywania konwencjonalnych koncentratów płytek.2
Tabela 4 podsumowuje charakterystykę in vitro płytek INTERCEPT po obróbce i rozdzieleniu na pojedyncze jednostki.
Zgodnie z wymogami europejskimi, pH płytek krwi musi pozostać powyżej 6,4 do końca okresu ważności. Podczas przetwarzania pH koncentratów płytek spada nieznacznie w zależności od stężenia płytek, objętości oraz przepuszczalności gazowej pojemnika do przechowywania płytek. Rysunek 4 przedstawia pH produktów z rozdzielonych płytek krwi w ciągu 7 dni przechowywania. Podczas przechowywania pH jest stabilne i utrzymuje się na poziomie zgodnym z wymogami przetwarzania.
Jak pokazano na rycinach 5A i 5B, zużycie O2 oraz produkcja CO2 przez płytki krwi wskazują na utrzymujące się oddychanie w płytkach INTERCEPT w pojemniku PL2410 podczas 7 dni przechowywania. Ryciny 6A i 6B przedstawiają poziomy mleczanu i glukozy w ciągu 7 dni przechowywania. Zużycie glukozy i produkcja mleczanu przez płytki krwi są ze sobą spójne w ciągu 7 dni przechowywania. W 5 jednostkach poziom glukozy był niższy niż 1,11 mmol/l (dolna granica oznaczania glukozy).
Przygotowanie warstwy leukocy تارnej (buffy coat) oraz walidacja łączenia jednostek pozwoliły na uzyskanie koncentratów płytkowych spełniających kryteria wejściowe dla procesu INTERCEPT; w szczególności w zakresie objętości, liczby płytek krwi, stosunku osocza oraz stopnia zanieczyszczenia erytrocytami. Końcowe jednostki spełniały kryteria walidacyjne przez 7 dni przechowywania, w tym w odniesieniu do dawki płytek i pH.
| Parametr | Zakres docelowy | Średnia wyników ± SD |
| Objętość (ml) | ~ 48 | 46 ± 2 |
| Hematokryt (%) | ~ 37 | 37 ± 3 |
| Czas oczekiwania przed łączeniem | przez noc na agitatorze | przez noc na agitatorze |
Tabela 1. Charakterystyka poszczególnych warstw leukocytarnych (n=19).
| Parametr | Zakres docelowy | Wyniki Średnia ± SD |
| Objętość (ml) | ~ 600 | 615 ± 5 |
| Hematokryt (%) | ~ 20 | 19 ± 1 |
| Czas oczekiwania przed wirowaniem | 1 hr na mieszadle | 1 hr na mieszadle |
Tabela 2. Charakterystyka pul buffy coat (n=12).
| Parametr | Wartość docelowa | Wyniki średnia ± SD |
| Objętość (ml) | 370 - 420 | 404 ± 8 |
| Liczba płytek krwi (x109/jednostkę) | 250 - 700 | 577 ± 62 |
| Średnia odzyskowość płytek krwi (%) | ≥ 75 | 75 ± 4 |
| Udział plazmy (%) | 32 - 47 | 38 ± 1 |
| RBC (x106/ml) | ≤ 4 | 1.2 ± 0.4 |
| WBC (x106/jednostkę) | ≤ 1 | 0.11 ± 0.1 |
| Czas przechowywania przed INTERCEPT (hr) | ≤ koniec dnia 1 | ≤ koniec dnia 1 |
Tabela 3. Charakterystyka podwójnych dawek koncentratów platelets (n=12).
| Średnia ± SD | Min | Max | |
| Objętość (ml) | 199 ± 16 | 182 | 236 |
| Liczba płytek krwi (x109/unit) | 265 ± 22 | 225 | 292 |
| pH (22 °C) | 6.9 ± 0.1 | 6.8 | 7.0 |
| pO2 (kPa) | 21.4 ± 4.8 | 12.8 | 27.3 |
| pCO2 (kPa) | 4.3 ± 0.4 | 3.3 | 4.9 |
| Mleczany (mmol/l) | 9.1 ± 1.7 | 6.8 | 12.4 |
| Glukoza (mmol/l) | 5.3 ± 0.9 | 3.7 | 6.5 |
Tabela 4. Charakterystyka płytek krwi poddanych działaniu INTERCEPT w dniu 1/2 (jednostki pojedyncze, n=24).
Rycina 1. Produkcja podwójnej dawki koncentratu krwineczek płytkowych z puli 7 warstw leukocytarnych.
Rysunek 2. Inaktywacja patogenów w koncentracie płytek krwi w podwójnej dawce przy użyciu systemu INTERCEPT Blood System.
Rysunek 3. Średnia dawka płytek krwi przed oraz przez 7 dni po leczeniu INTERCEPT (n=12 przed INTERCEPT; n=24 po INTERCEPT).
Rycina 4. Średnie pH płytek krwi ±SD po zastosowaniu INTERCEPT (n=24).
Rycina 5A. Średnie pO2 ±SD po zastosowaniu leczenia INTERCEPT (n=24).
Rycina 5B. Średnie pO2 ±SD po zastosowaniu INTERCEPT (n=24).
Rysunek 6A. Średnie poziomy mleczanu ±SD po zastosowaniu leczenia INTERCEPT (n=24).
Rycina 6B. Średnie poziomy glukozy ±SD po zastosowaniu INTERCEPT (n=24).
Dyskusja
Przygotowanie płytek krwi z warstwy leukocytaresowej (buffy coat) wymaga kilku etapów przetwarzania, które generują koszty po pobraniu, w tym czas pracy personelu, materiały eksploatacyjne, sprzęt oraz utylizację odpadów, co musi zostać uwzględnione w całkowitym koszcie wytworzenia jednostek płytek krwi. Poprawa wydobycia płytek z każdej warstwy leukocytaresowej (poprzez optymalizację objętości warstwy leukocytaresowej i hematokrytu) umożliwia produkcję jednostki płytek krwi o podwójnej dawce z puli siedmiu warstw leukocytaresowych. Przy zastosowaniu tej optymalizacji liczba warstw leukocytaresowych wymaganych do wytworzenia określonej liczby dawek płytek może zostać zmniejszona, co poprawia ogólną utylizację warstw leukocytaresowych i umożliwia produkcję dodatkowych koncentratów krwinek płytkowych (PC). Czas pracy personelu, jak również koszty materiałów eksploatacyjnych i sprzętu, takich jak zestawy do łączenia, roztwór dodatkowy do płytek krwi, sterylne łączniki waflowe, zestawy filtracyjne oraz procedury wirowania, zostają zredukowane o maksymalnie 50%. Oprócz optymalizacji produkcji płytek i redukcji powiązanych kosztów, ta metoda łączenia pozwala na uzyskanie koncentratu krwinek płytkowych (PC), który spełnia wymagania wejściowe do zastosowania z zestawem do przetwarzania w podwójnym pojemniku do przechowywania INTERCEPT, co pozwala nam zapewnić również zwiększoną ochronę odbiorców transfuzji.
System INTERCEPT Blood System do inaktywacji patogenów wykorzystuje amotosalen oraz światło ultrafioletowe A (UVA) do kowalencyjnego sieciowania DNA i RNA, co zapobiega replikacji kwasów nukleinowych i sprawia, że patogeny nie są w stanie wywoływać chorób.3 Skutecznie inaktywuje on szerokie spektrum patogenów, w tym wirusy, bakterie, pasożyty oraz zanieczyszczające krew leukocyty dawcy.4-6 INTERCEPT stanowi alternatywę dla obecnego modelu testowania w kierunku nowych patogenów, który historycznie wiąże się ze znacznym opóźnieniem podczas opracowywania nowego testu i ostatecznie wymaga dużych nakładów finansowych na jego wdrożenie po udostępnieniu.7,8 Może on również stanowić alternatywę dla redundantnych środków bezpieczeństwa, takich jak detekcja bakterii9 i irradiacja gamma.10-12 Dodatkowo INTERCEPT pozwala nam na przetwarzanie jednostek płytek krwi w podwójnej dawce, co zwiększa wydajność produkcji i pomaga nam w przestrzeganiu budżetów.
Metodę INTERCEPT oraz metodę podwójnej dawki warstwy leukocytowej (buffy coat) można dostosować do różnych standardów pracy centrów krwiodawstwa. Przykładowo, objętość pobranej krwi pełnej można zwiększyć do 500 ml; pobrane jednostki mogą być również przechowywane przez noc w temperaturze 22 °C przed rozdzieleniem. Dodatkowo możliwe jest zastosowanie alternatywnej metody łączenia warstw leukocytowych (np. metody „octopus” zamiast metody „train”) oraz/lub wykorzystanie urządzenia zautomatyzowanego (np. TACSI) do drugiego wirowania i oddzielenia zawiesiny płytek krwi od pozostałych erytrocytów.
Jeśli wymagana jest zwiększona zawartość płytek krwi, dostępne są różne techniki, w tym wstępna selekcja dawców na podstawie liczby płytek, inkubacja krwi pełnej przez noc, dostosowanie parametrów wirowania lub wykorzystanie puli 8 warstw leukocytowych zamiast 7.
Ze względu na ograniczenia w aktualnie dostępnych zestawach do łączenia oraz pojemność koszy wirówki, całkowita objętość puli warstw leukocytowych (buffy coat) powinna wynosić około 600 ml. Proces i ustawienia wirowania opisane w niniejszym protokole zostały zoptymalizowane w celu uzyskania produktu spełniającego parametry INTERCEPT dla puli składającej się z 7 warstw leukocytowych. Ustawienia wirowania muszą zostać zmodyfikowane, jeśli zmieni się liczba warstw leukocytowych w puli.
W niektórych krajach minimalna dawka płytek krwi jest wyższa, a wymagania dotyczące kontroli jakości (QC) są bardziej rygorystyczne niż w Szwecji. W związku z tym nasze wyniki mogą nie być uniwersalne. W tych krajach podwójna dawka koncentratu płytek krwi (PC) przed opracowaniem metodą INTERCEPT będzie musiała zawierać większą liczbę płytek, aby spełnić lokalne wymogi po zastosowaniu procesu INTERCEPT i rozdzieleniu. Ponieważ maksymalna zawartość płytek oraz objętość opracowania dla metody INTERCEPT wynoszą odpowiednio 7x1011 płytek i 420 ml, odsetek jednostek, które przekraczają wymagania procesu INTERCEPT lub mają niewystarczającą zawartość płytek, aby można było je rozdzielić na dwie dawki terapeutyczne, będzie się różnić w zależności od takich czynników, jak lokalne wymagania dotyczące dawki płytek, kryteria QC, wyniki optymalizacji warstwy leukocytarnej (buffy coat) oraz stabilność produkcji.
Jeśli podwójna dawka PC przekracza wymagania przetwarzania INTERCEPT, można ją dostosować ręcznie, aby spełnić te wymagania, a następnie poddać obróbce. W nielicznych przypadkach, gdy pula 7 warstw leukocytowych (buffy coat) dostarcza niewystarczającą liczbę płytek do uzyskania produktu o podwójnej dawce po zastosowaniu INTERCEPT, decydujemy się nie przeprowadzać obróbki INTERCEPT. Alternatywnie, inne centra krwiodawstwa mogą zdecydować o poddaniu PC obróbce za pomocą zestawu INTERCEPT do pojedynczej dawki (i.e. zestawu do dużych objętości) i przechowywaniu PC jako pojedynczej, większej dawki terapeutycznej, przeprowadzając w ten sposób inaktywację patogenów we wszystkich jednostkach. Aby zapewnić spełnienie wymagań QC oraz inaktywację patogenów w jak największej liczbie jednostek płytek, wybieramy warstwy leukocytowe na podstawie liczby płytek u dawców, co po połączeniu w puli zapewni minimalną zawartość 5.6x1011 płytek w puli. Gwarantuje to wystarczającą liczbę płytek do wytworzenia dwóch dawek terapeutycznych po obróbce INTERCEPT.
Nasza walidacja wykazuje, że 7 jednostek warstwy leukocytarnej (buffy coat) uzyskanych z krwi pełnej może zostać z powodzeniem połączonych i poddanych procesowi INTERCEPT dla koncentratów krwineczek płytkowych, co skutkuje otrzymaniem 2 produktów krwineczek płytkowych z inaktywowanymi patogenami, które spełniają kryteria akceptacji dla produkcji (wymagania szwedzkie i wytyczne europejskie) oraz dla wsparcia pacjentów wymagających transfuzji krwineczek płytkowych zgodnie z wytycznymi praktyki klinicznej i standardowymi metodami infuzji krwineczek płytkowych w Szwecji.
Oświadczenia
Produkcja i wolny dostęp do tego artykułu są sponsorowane przez Cerus.
Podziękowania
Finansowanie publikacji zostało zapewnione przez Cerus Corp, producenta systemu INTERCEPT Blood System.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Pobieranie krwi pełnej, separacja pierwotna i pozyskiwanie koncentratu płytkowego | |||
| Zestaw do pobierania krwi | Fenwal | R6485 | Zestaw górny/dolny |
| Zautomatyzowany ekstraktor komponentów | Fenwal | Optipress-II | |
| System mieszadła do krwi i wagi | Baxter | Easymix V3 | |
| Zestaw do filtracji leukocytów z koncentratu krwineczek* *(Alternative technical translation: Zestaw do leukoredukcji płytek krwi) | Fenwal | K4R7042 | |
| Wirówka | Hettich | Roto Silenta 63 RS | Wersja 5.5 |
| Roztwór dodatkowy do platelets – SSP+ | MacoPharma | SSP2030U | 300 ml |
| Sterylny spawać rurek | Terumo | T-SCD | |
| leczenie metodą INTERCEPT & przechowywanie | |||
| zestaw do przetwarzania INTERCEPT |  Cerus | INT2503 | zestaw do podwójnego przechowywania (DS) |
| Oświetlacz INTERCEPT | Cerus | INT100 | |
| Zestaw próbek PC | Fenwal | FTX 1122 | |
| Inkubator | Helmer | PC2200/PC3200 | |
| Mieszadło | Helmer | PF48H/PF96H | |
| Ocena in vitro Funkcja płytek krwi | |||
| Analizator gazometrii krwi | Radiometr | ABL 735 | Stosowane do pomiaru pH, gazometrii krwi i poziomu mleczanów |
| Układ chemiczny | Ortho Clinical Diagnostics | Vitros 5.1 | Stosowane do pomiaru poziomu glukozy |
| Analizator hematologiczny | Boule Medical AB | Medonic CA620-Cellguard | Stosowane do pomiaru liczby płytek krwi |
| Cytometr przepływowy | BD | FACSCanto | Stosowane do pomiaru liczby białych krwinek |
Bibliografia
- Guide to the preparation, use and quality assurance of blood components. , 16th, Council of Europe. (2010).
- Van Rhenen, D. J., Vermeij, J., Mayaudon, V., et al. Functional characteristics of S-59 photochemically treated platelet concentrates derived from buffy coats. Vox Sang. 79, 206-214 (2000).
- Wollowitz, S. Targeting DNA and RNA in pathogens: mode of action of amotosalen HCl. Transfus. Med. Rev. 31, 11-16 (2004).
- Irsch, J., Lin, L. Pathogen Inactivation of Platelet and Plasma Blood Components for Transfusion Using the INTERCEPT Blood SystemTM. Transfus. Med. Hemother. 38, (2011).
- Lin, L., Dikeman, R., Molini, B., et al. Photochemical treatment of platelet concentrates with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light inactivates a broad spectrum of pathogenic bacteria. Transfusion. 44, 1496-1504 (2004).
- Lin, L., Hanson, C., Alter, H., et al. Inactivation of viruses in platelet concentrates by photochemical treatment with amotosalen and long-wavelength ultraviolet light. Transfusion. 45, 580-590 (2005).
- Allain, J. P., Cianco, C., Blajchman, A., et al. Protecting the blood supply from emerging pathogens: the role of pathogen inactivation. Transfus. Med. Rev. 19, 110-126 (2005).
- Stramer, S., Hollinger, F., Katz, L., et al. Emerging infectious disease agents and their potential threat to transfusion safety. Transfusion. 49, 1S-29S (2009).
- Nussbaumer, W., Allesdorfer, D., Grabmer, C., et al. Prevention of transfusion of platelet components contaminated with low levels of bacteria: a comparison of bacteria culture and pathogen inactivation methods. Transfusion. 47, 1125-1133 (2007).
- Schlenke, P. Protection against Transfusion-Associated Graft-versus-Host Disease in Blood transfusion: Is Gamma-Irradiation the Only Answer? Transfus. Med. Hemother. 31, 24-31 (2004).
- Lin, L., Corash, L., Osselear, J. C. Protection Against TA-GVHD Due to Platelet Transfusion By Using Pathogen Inactivation with the INTERCEPT Blood SystemTM - Gamma Irradiation is Not the Only Answer. Haematologica. 95 (Extra 1), 230-237 (2010).
- Corash, L., Lin, L. Novel processes for inactivation of leukocytes to prevent transfusion-associated graft-verus-host disease. Bone Marrow Transplant. 33, 1-7 (2004).
Przedruki i uprawnienia
