Wykazano, że monitorowanie perfuzji mózgowej poprawia dokładność modeli udaru niedokrwiennego. Trudności techniczne często ograniczają wykorzystanie tego niezbędnego narzędzia do badań naczyń mózgowych. W tym filmie pokazano zoptymalizowany system do uzyskania jedno- lub wielomiejscowego monitorowania hemodynamicznego podczas śródświetlnej niedrożności tętnicy środkowej mózgu u szczurów.
Artykuł metodologiczny
Zoptymalizowany system do monitorowania perfuzji mózgowej w modelu udaru szczura wewnątrzświetlnej niedrożności tętnicy środkowej mózgu
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Potencjał translacyjny badań przedklinicznych nad udarem zależy od dokładności modelowania eksperymentalnego. Monitorowanie perfuzji mózgowej w modelach zwierzęcych ostrego udaru niedokrwiennego pozwala potwierdzić udaną niedrożność tętnic i wykluczyć krwotok podpajęczynówkowy. Monitorowanie perfuzji mózgowej może być również wykorzystywane do badania wewnątrzczaszkowego krążenia bocznego, które staje się potężnym wyznacznikiem wyniku udaru i możliwym celem terapeutycznym. Pomimo uznanej roli laserowego monitorowania perfuzji dopplerowskiej w ramach obecnych wytycznych dotyczących eksperymentalnego niedokrwienia mózgu, istnieje szereg trudności technicznych, które ograniczają jego powszechne stosowanie. Jednym z głównych problemów jest uzyskanie bezpiecznego i długotrwałego mocowania laserowej sondy dopplerowskiej o głębokiej penetracji do czaszki zwierzęcia. W tym filmie pokazujemy nasz zoptymalizowany system monitorowania perfuzji mózgowej podczas przejściowej niedrożności tętnicy środkowej mózgu za pomocą włókna śródświetlnego u szczura. Opracowaliśmy we własnym zakresie prostą metodę uzyskania niestandardowego uchwytu do dwuwłóknistych (głęboko penetrujących) laserowych sond dopplerowskich, które w razie potrzeby umożliwiają monitorowanie w wielu miejscach. Ciągłe i długotrwałe monitorowanie perfuzji mózgowej można było łatwo uzyskać nad nienaruszoną czaszką.
Wprowadzenie
Badania translacyjne nad czynnikami hemodynamicznymi wpływającymi na patofizjologię i terapię udaru muszą zostać wdrożone, ponieważ ta ważna kwestia jest często paradoksalnie zaniedbywana przez podstawowe badanianaukowe 1.
Monitorowanie perfuzji mózgowej jest niezbędnym, ale niedostatecznie wykorzystywanym narzędziem do dokładnego modelowania udaru niedokrwiennego2. Oprócz potwierdzenia niedrożności naczyń tętniczych i wykluczenia krwotoku podpajęczynówkowego3, ciągłe monitorowanie perfuzji mózgowej może dostarczyć użytecznych danych na temat stopnia i konsystencji deficytu perfuzji, stanu funkcjonalnego wewnątrzczaszkowych naczyń pobocznych i hemodynamicznego efektu nowych podejść terapeutycznych.
Ostatnie badanie naszej grupy wskazuje, że wielomiejscowe monitorowanie hemodynamiczne może być używane do oceny wewnątrzczaszkowego krążenia pobocznego i może przewidzieć rozmiar zawału i deficyt funkcjonalny4. Te wyniki eksperymentalne są zgodne z badaniami klinicznymi, które wykazały, że funkcjonalna wydajność krążenia pobocznego w mózgu jest predyktorem wyniku klinicznego u pacjentów z udarem niedokrwiennym 5, 6. Z tego powodu oboczne leczenie mózgu jest zalecane jako potencjalny cel terapeutyczny w ostrej fazie udaru niedokrwiennego7.
Laserowo-dopplerowskie (LD) instrumenty są najczęściej używanym narzędziem do pomiaru perfuzji mózgowej w eksperymentalnym udarze niedokrwiennym mózgu i ich użycie jest zalecane przez najnowsze wytyczne na ten temat8. Instrumenty LD mierzą perfuzję mikronaczyniową w małej objętości korowej, przy czym głębokość rejestrowanego sygnału zależy od szerokości separacji włókien, przy czym sondy LD z dwoma włóknami umożliwiają głębszą penetrację w porównaniu z sondami LD z pojedynczym włóknem9. Wartości przepływu krwi są wyrażone jako dowolne jednostki perfuzji (P.U.), które wskazują względny, a nie bezwzględny przepływ krwi w mózgu. Kalibracja P.U. jest zwykle wykonywana przy użyciu wzorców ruchliwości, zgodnie z instrukcjami producenta. Przepływometria LD umożliwia ciągłe dynamiczne monitorowanie i generowanie danych ilościowych w ramach tej samej sesji.
Wśród problemów technicznych, które obecnie ograniczają użycie LD, głównym problemem jest uzyskanie bezpiecznego i długotrwałego mocowania sondy laserowej do czaszki zwierzęcia. Jest to niezbędne do długotrwałego monitorowania i jeśli stosuje się wiele sond dla różnych obszarów tętnic mózgowych, tak jak robimy to w naszym laboratorium.
W szczególności, wymagany jest przedłużony czas operacji, jeśli sondy są przymocowane do czaszki za pomocą otworów lub czaszkowych, podczas gdy słaby sygnał i niepewne mocowanie występuje, jeśli pojedyncze włókniste (o niskiej penetracji) sondy LD są przymocowane do czaszki za pomocą prostego kleju chirurgicznego. Sondy LD z podwójnymi włóknami (o głębokiej penetracji) zapewniają wyższy i bardziej spójny sygnał, ale są większe niż sondy jednowłókniste i nie można ich przymocować do czaszki za pomocą samego kleju chirurgicznego.
W tym filmie pokazujemy nasz zoptymalizowany system monitorowania perfuzji mózgowej podczas przejściowego zamknięcia tętnicy środkowej mózgu przez włókno wewnątrzświetlne u szczura. Opisujemy prostą metodę uzyskania wydajnego, wykonanego na zamówienie, taniego uchwytu do pojedynczych lub wielu sond LD z podwójnymi włóknami (o głębokiej penetracji), który ma być używany do przedłużonego monitorowania perfuzji mózgowej nad nienaruszoną czaszką.
Zabieg chirurgiczny przejściowego MCAO u szczura można było zobaczyć w artykule wideo autorstwa Uluç i współpracowników10 i nie jest pokazany w tym filmie.
Protokół
1. Jak zrobić uchwyt sondy (pojedyncze miejsce lub wiele stron)
- Wymagane materiały to kauczuk naturalny, małe rurki z tworzywa sztucznego i metalowy sztylet. Uchwyt sondy można dostosować do wielkości zwierzęcia, liczby i wielkości laserowych sond dopplerowskich oraz obszaru naczyniowego mózgu, który należy monitorować.
- Wytnij kauczuk naturalny o wymaganym rozmiarze (około 10 mm x 10 mm dla szczura o wadze 300 g).
- Zaznaczyć położenie sondy (sond) i bregmy na kauczuku naturalnym, zgodnie z pożądanymi współrzędnymi stereotaktycznymi; dla niedrożności tętnicy środkowej mózgu typowe współrzędne dla rdzenia niedokrwiennego są oczekiwane przy bregma -1 mm, 5 mm w bok od linii środkowej; dla peryferyjnego terytorium niedokrwiennej strefy granicznej oczekiwane współrzędne mogą wynosić bregma +2 mm, 2 mm bocznie do linii środkowej.
- Zaznacz bardzo wyraźnie pozycję bregmy za pomocą X, jest to punkt orientacyjny do mocowania uchwytu sondy do czaszki.
- Włóż trzycik do małej plastikowej rurki (jego rozmiar musi być dopasowany do rozmiaru sondy).
- Włóż trzyt do kauczuku naturalnego w miejscu, w którym sonda ma być umieszczona; wepchnij trzpień w gumę, aż plastikowa rurka również zostanie włożona do gumy.
- Wyjmij stylik.
- Jeśli potrzebnych jest wiele sond, powtórz kroki 1.5-1.7 dla innych pozycji sondy.
- Opcjonalnie dla wielu sond: owiń taśmę wokół plastikowych rurek, aby zapewnić lepszą stabilizację sond.
- Opcjonalnie: przeprowadzić sterylizację chemiczną kilku uchwytów sondy do wykorzystania w przyszłości.
2. Przygotowanie przedoperacyjne
- Model udaru MCAO jest zwykle wykonywany jako operacja przeżycia. W tym przypadku, jak pokazano na naszym filmie (czas przeżycia 24 godziny po operacji), chirurg stosuje technikę aseptyczną ze sterylizowanymi narzędziami i materiałami.
- Znieczulić szczura izofluranem (3% faza indukcyjna, 1,5% utrzymanie).
- Umieść szczura w pozycji leżącej na stole operacyjnym.
- Delikatnie ogol głowę szczura.
- Nałóż roztwór antyseptyczny na gazik i zdezynfekuj skórę.
- Lidokainę podawać 2% 5 mg/kg podskórnie w okolice czaszki.
3. Ustawianie i zabezpieczanie sondy nad nienaruszoną czaszką
- Wykonaj prawe przyśrodkowe nacięcie skóry (dla prawego MCAO) i wypreparuj tkankę podskórną, aby dotrzeć do powięzi czaszkowej (galea aponeurotica).
- Wykonaj prawe nacięcie przyśrodkowe w powięzi czaszki i wykonaj rozwarstwienie, aby dotrzeć do kości czaszki; przygotuj obszar kości czaszki, który jest wystarczająco duży do zastosowania uchwytu sondy.
- Uwaga: nie ma potrzeby wiercenia ani przerzedzania kości.
- Zastosuj roztwór Merbromin, aby zdezynfekować i osuszyć powierzchnię czaszki.
- Użyj suszarki do włosów (ustawionej na zimne powietrze), aby przyspieszyć suszenie powierzchni czaszki.
- W tym momencie szwy czaszkowe i bregma są wyraźnie widoczne.
- Dostosuj uchwyt sondy, przycinając krawędzie sterylnymi nożyczkami.
- Nałóż niewielką ilość kleju chirurgicznego (cyjanoakryl, zatwierdzony przez lekarza weterynarii) na powierzchnię pod uchwytem sondy, ostrożnie unikając dolnego otworu plastikowych rurek (uwaga: jeśli znaczna ilość kleju pozostanie między powierzchnią optyczną sondy a czaszką, może to spowodować słaby sygnał i może uszkodzić sondę po wielokrotnym użyciu).
- Przyłóż uchwyt sondy do powierzchni czaszki, ostrożnie dopasowując bregmę do punktu orientacyjnego X. Delikatnie dociśnij uchwyt sondy.
- Użyj suszarki do włosów (ustawionej na zimne powietrze), aby przyspieszyć suszenie kleju chirurgicznego.
- Zabezpiecz uchwyt sondy, zawiązując nić chirurgiczną wokół uchwytu sondy i głowy zwierzęcia; należy uważać, aby umieścić nić chirurgiczną nad żuchwą, omijając obszar podżuchwowy i szyję.
- Opcjonalnie: napełnij plastikową rurkę (rurki) uchwytu sondy żelem optycznym (np. zwykłym żelem do ultrasonografii lub elektrokardiografii); poprawi to jakość sygnału LD.
- Umieść sondę(y) w uchwycie sondy i sprawdź rzeczywisty odczyt przepływomierza LD. Przepływomierza LD należy używać zgodnie z instrukcjami producenta.
- Zabezpiecz sondę (sondy) zawiązując je wokół głowy zwierzęcia; należy uważać, aby umieścić nić chirurgiczną nad żuchwą, omijając obszar podżuchwowy i szyję.
4. Monitorowanie perfuzji mózgowej podczas MCAO
- Umieść szczura w pozycji leżącej, ostrożnie unikając sił trakcyjnych działających na sondę (sondy) lub uchwyt sondy.
- Rozpocznij monitorowanie perfuzji mózgowej podczas MCAO.
5. Demontaż sondy (sond) i uchwytu sondy
- Przeciąć szwy wokół sondy (sond), uchwytu sondy i głowy zwierzęcia.
- Delikatnie tępo wypreparuj tkanki miękkie czaszki i skórę wokół podstawy z naturalnej gumy uchwytu sondy.
- Zdejmij uchwyt sondy.
- Nałóż roztwór antyseptyczny na powierzchnię czaszki.
- Zszyj skórę czaszki.
6. Opieka pooperacyjna
- Podawać podskórnie 2,5 ml roztworu soli fizjologicznej, aby zapobiec odwodnieniu i utrzymywać zwierzę w cieple za pomocą poduszki grzewczej po przerwaniu znieczulenia gazowego.
- W przypadku operacji przeżycia: należy podać zapobiegawczo znieruchomy Ketoprofen 4 mg/kg podskórnie i powtórzyć tę samą dawkę po 12 godzinach od operacji
- W naszych warunkach eksperymentalnych eutanazja została przeprowadzona 24 godziny po operacji poprzez wdychanie CO2 .
Wyniki
Przemijające MCAO (60 min) indukowano poprzez wprowadzenie filtru silikonowego do zewnętrznej tętnicy szyjnej. Filament przesuwano następnie przez końcowy odcinek wewnętrznej tętnicy szyjnej aż do odejścia MCA, pod kontrolą LD. Wspólna tętnica szyjna oraz tętnica skrzydłowopodniebna zostały przejściowo zamknięte podczas chirurgicznego wprowadzania filamentu. Schematyczne przedstawienie procedury chirurgicznej pokazano na Rysunku 1A.
Współrzędne czaszkowe służące do rozmieszczenia dwóch sond LD wybrano zgodnie z przebiegiem obszarów tętniczych. Wstępne eksperymenty z perfuzją atramentu żelatynowego (Rysunek 1B) wykazały, że rdzeń niedokrwienny spodziewany jest w centralnym obszarze tętnicy środkowej mózgu (MCA) (bregma -1 mm, 5 mm od linii środkowej; Sonda 1), natomiast przepływ oboczny spodziewany jest w obszarze strefy granicznej pomiędzy gałęziami korowymi tętnic środkowej i przedniej mózgu (bregma +2 mm, 2 mm od linii środkowej; Sonda 2).
Hemodynamikę mózgową badano przy użyciu wielomiejscowych sond Laser Doppler przez cały czas trwania procedury chirurgicznej, t.j. przed, w trakcie i po MCAO (Rysunek 2). Deficyt perfuzji mózgowej podczas MCAO był mniejszy i wykazywał wyższy stopień zmienności w Sondzie 2 w porównaniu z Sondą 1, co sugeruje różnice międzyosobnicze w sprawności funkcjonalnej wewnątrzczaszkowych krążenia obocznego w warunkach niedokrwiennych. Wielomiejscowe monitorowanie Laser Doppler pozwala również na badanie zmian hemodynamicznych w mózgu podczas okluzji proksymalnych pozaczaszkowych tętnic mózgowych (tętnicy szyjnej wspólnej, tętnicy szyjnej wewnętrznej, tętnicy skrzydłowopodniebiennej).
Wynik udaru oceniono 24 h po reperfuzji na podstawie objętości zawału, obliczonej na podstawie 19 kolejnych przekrojów barwionych fioletem krezylowym (Rysunek 3), oraz funkcjonalnej oceny neurologicznej według skali Garcia11. Przeprowadzono immunohistochemię w celu wykrycia specyficznych markerów związanych z niedokrwiennym uszkodzeniem mózgu, aby uzyskać topograficzny rozkład utraty neuronów (białko związane z mikrotubulami 2, MAP2) oraz penumbry niedokrwiennej (białko szoku cieplnego 70, Hsp70) w odniesieniu do wielopunktowego monitorowania hemodynamicznego krążenia wewnątrzczaszkowego (Rysunek 4).
Rysunek 1. Monitorowanie perfuzji mózgowej podczas wewnątrzlumenalnego MCAO u szczura. A. Schematyczna reprezentacja procedury chirurgicznej dla przejściowego MCAO. Do zamknięcia ujścia MCA użyto filamentu powlekanego silikonem, który wprowadzono do tętnicy szyjnej zewnętrznej i przesunięto przez tętnicę szyjną wewnętrzną. Podczas procedury proksymalne tętnice szyjne zostały albo podwiązane (tętnica szyjna zewnętrzna), albo przejściowo zamknięte (tętnica skrzydłowopodniebna i tętnica szyjna wspólna). B. Przedstawiono reprezentatywny mózg po barwieniu żelatynowym z atramentem. Perfuzja przezsercowa roztworem żelatyny z atramentem została przeprowadzona 60 min po wystąpieniu niedokrwienia, bez reperfuzji. Prawidłowo perfundowany mózg został zabarwiony żelatyną z atramentem i pojawił się jako szary z czarnymi naczyniami, podczas gdy obszar niedokrwienny (nieperfundowany) pozostał niezabarwiony (kolor różowy). Pokazano współrzędne czaszkowe dla rozmieszczenia dwóch sond LD. Sonda 1 = -1 mm od bregma, 5 mm od linii środkowej; Sonda 2 = +2 mm od bregma, 2 mm od linii środkowej.
Rycina 2. Rejestracja hemodynamiki mózgowej z użyciem wielomiejscowych sond Laser Doppler. Przedstawiono typowy wzorzec hemodynamiczny sugerujący funkcjonalnie czynne krążenie oboczne wewnątrzczaszkowe w warunkach niedokrwiennych. U tego zwierzęcia zapisy LD wykazały mniejszy deficyt perfuzji w kanale Sondy 2 w porównaniu z kanałem Sondy 1, zarówno podczas okluzji CCA, jak i okluzji MCA. MCA-O=okluzja tętnicy środkowej mózgu. CCA-O=okluzja wspólnej tętnicy szyjnej. P.U.= jednostki perfuzji.
Rycina 3. Reprezentatywne przekroje mózgu do obliczenia objętości zawału. Histologiczne przekroje wieńcowate (50 μm; n = 19 w odstępach 250 μm; bregma od +2,5 mm do −3,0 mm) utrwalono w 4% paraformaldehydzie i zabarwiono 0,1% fioletem krezylu. Objętość zawału obliczono za pomocą oprogramowania do przetwarzania obrazów ImageJ, z korektą o asymetrie międzyhemisferyczne wynikające z obrzęku mózgu, i wyrażono w mm3. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną rycinę
Rysunek 4. Immunobarwienie molekularnych markerów utraty neuronów i penumbry. Przedstawiono reprezentatywne, następujące po sobie przekroje mózgu, które zostały zabarwione fioletem krezylowym 0,1% (A) lub poddane immunobarwieniu markerami utraty neuronów (białko związane z mikrotubulami 2, MAP2; B) oraz penumbry niedokrwiennej (białko szoku cieplnego 70, Hsp70; C).
Dyskusja
Opracowaliśmy we własnym zakresie prosty i tani system do bezpiecznego mocowania jednej lub wielu sond LD z podwójnymi włóknami (głęboka penetracja) do nienaruszonej czaszki szczurów podczas procedury MCAO. Chociaż wydaje się, że jest to błahy problem, uzyskanie niezawodnego mocowania sondy LD do czaszki jest w rzeczywistości poważnym problemem w tym eksperymentalnym otoczeniu, ponieważ jest to warunek wstępny płynnego wykrywania sygnału i skutecznego monitorowania perfuzji mózgowej.
Zabiegi inwazyjne, takie jak otwory pod zadziory i kostne, zwykle wydłużają czas operacji i wprowadzają więcej zmiennych eksperymentalnych związanych z kraniotomią, a to może zniechęcić badaczy i powstrzymać ich od stosowania monitorowania LD. Z drugiej strony, użycie sond jednowłóknistych (o niskiej penetracji), które są cieńsze i stosunkowo łatwiejsze do przyklejenia bezpośrednio do powierzchni czaszki, daje sygnał niskiej jakości i nie może być niezawodnie stosowane u dorosłych szczurów bez wiercenia lub rozrzedzania czaszki.
Użyliśmy prostych i tanich materiałów, takich jak kauczuk naturalny, plastikowe rurki i metalowy stylik. Wykonany na zamówienie uchwyt sondy może zostać wyprodukowany w ciągu kilku minut i dostosowany do warunków eksperymentalnych. Te uchwyty sondy mogą pomieścić jedną lub więcej sond LD o głębokiej penetracji, do klasycznego monitorowania w jednym miejscu na rdzeniu niedokrwiennym lub do monitorowania w wielu miejscach w różnych obszarach tętniczych na tej samej półkuli lub na dwóch półkulach. Można wyprodukować wiele uchwytów na sondy, wysterylizować je chemicznie i przechowywać do wykorzystania w przyszłości. Zatwierdzony przez lekarza weterynarii klej chirurgiczny (cyjanoakryl), przyspieszany zimnym powietrzem, służy do mocowania uchwytu sondy do nienaruszonej powierzchni czaszki szczura, zgodnie z pożądanymi współrzędnymi czaszki. Wreszcie, konfiguracja sondy jest dodatkowo zabezpieczona na miejscu za pomocą zwykłych szwów.
Całkowity czas ustawienia tej sondy LD, po opanowaniu tej techniki, wynosi około 10 minut.
Jak pokazano w tym filmie, rutynowo monitorujemy perfuzję mózgową w centralnym obszarze MCA (sonda LD 1: rdzeń niedokrwienny) i na obwodowym terytorium MCA (sonda LD 2: głównie obszar półcienia). W naszym ostatnim badaniu wykazaliśmy, że zmienność zmian przepływu krwi w sondzie LD 2 (średnio 52% ± 16% SD w porównaniu z wartością wyjściową) jest wyższa w porównaniu z sondą LD 1 (średnio 31% ± 6% SD w porównaniu z wartością wyjściową) i może być wykorzystana do przewidywania wyniku udaru4.
Możemy udzielić kilku porad dotyczących rozwiązywania problemów dla badaczy, którzy chcieliby skorzystać z naszego opracowanego przez nas systemu. Na początku eksperymentu należy uważać, aby bardzo dobrze osuszyć powierzchnię czaszki (merbrominem i zimnym powietrzem) przed założeniem uchwytu sondy, aby zapobiec przedwczesnemu oderwaniu. Ponadto należy pamiętać o nałożeniu kleju na kauczuk naturalny, unikając kontaktu z otwartym końcem plastikowej rurki i powierzchnią optyczną sondy LD, aby zapobiec słabemu sygnałowi i potencjalnemu uszkodzeniu sondy. Podczas wiązania szwu wokół głowy zwierzęcia należy zachować ostrożność, aby uniknąć niedrożności dróg oddechowych (zapobiega się temu, umieszczając szew nad kością żuchwy). Po ustawieniu i zabezpieczeniu sond należy uważać, aby nie ciągnąć kabli sondy podczas obracania zwierzęcia w pozycji leżącej do operacji szyjki macicy; Ten krok zwykle wymaga dwóch osób, jednej osoby trzymającej zwierzę, a drugiej trzymającej kable sondy i delikatnie ustawiającej je w żądanej pozycji. Wreszcie, ewentualne zanieczyszczenie krwi sondy LD z podwójnym włóknem można łatwo opanować zgodnie z instrukcjami czyszczenia dostarczonymi przez producenta.
Nasz zoptymalizowany system do monitorowania perfuzji mózgowej, jak pokazano na tym filmie, może stanowić łatwiejszą, szybszą i bardziej niezawodną alternatywę dla systemów konfiguracji sond, które są obecnie sprzedawane przez firmy komercyjne w tej dziedzinie. Co więcej, uważamy, że zastosowanie tego systemu przez innych badaczy może wzbogacić badania nad hemodynamiką mózgu w eksperymentalnej dziedzinie udaru mózgu, prowadząc do opracowania nowej generacji mózgowych terapii ubocznych.
Oświadczenia
Fundusze na produkcję tego artykułu wideo zostały zapewnione przez firmę Moor Instruments Ltd (Axminster, Devon, Wielka Brytania), która produkuje laserowe instrumenty dopplerowskie pokazane w naszym eksperymentalnym badaniu.
Protokół eksperymentalny został zatwierdzony przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami Uniwersytetu Milano Bicocca, zgodnie z krajowymi wytycznymi dotyczącymi wykorzystania zwierząt laboratoryjnych (D.L. 116/1992) oraz Dyrektywą Unii Europejskiej w sprawie doświadczeń na zwierzętach (2010/63/UE), na podstawie licencji projektowej (nr 219/2011-B) włoskiego Ministerstwa Zdrowia.
Podziękowania
Dziękujemy Pani Caroline Robertson za podkład głosowy oraz Pani Elenie Pirovano za pomoc w produkcji wideo. Badanie to było wspierane przez Uniwersytet w Mediolanie Bicocca, "Fondo di Ateneo 2011".
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Sprzęt | |||
| 2-kanałowy monitor dopplerowski MoorVMS-LDF |  Moor Instruments | ||
| sonda VP12 | Moor Instruments | ||
| Odczynnik/Materiał | |||
| nić Doccol powlekana silikonem, rozmiar 4-0, średnica z powłoką 0,39 mm | Doccol Corporation | 403956PK10 | |
| Kauczuk naturalny, np. popularne smoczki dla noworodków | Wielu dostawców | ||
| Metalowy kaniulek, np. z igły spinalnej 18 GA x 90 mm | Wielu dostawców | ||
| Probówki plastikowe, np. z zestawu do infuzji dożylnej 25 GA x 20 mm | Wielu dostawców | ||
| Niewchłonną nić chirurgiczna, powlekana, plecionka jedwabna | Wielu dostawców | ||
| Chirurgiczny klej cyjanoakrylowy | Wielu dostawców | ||
| Izofluran (100% v/v) do stosowania w weterynarii | Wielu dostawców |
Bibliografia
- Sutherland, B. A., Papadakis, M., Chen, R. L., Buchan, A. M. Cerebral blood flow alteration in neuroprotection following cerebral ischemia. J. Physiol. 589, 4105-4114 (2011).
- Prinz, V., Endres, M. Chapter 3 Modeling focal cerebral ischemia in rodents: Introduction and overview. Rodent models of stroke. Dirnagl, U. , Human Press. (2010).
- Schmid-Elsaesser, R., Zausinger, S., Hungerhuber, E., Baethmann, A., Reulen, H. J. A critical reevaluation of the intraluminal thread model of focal cerebral ischemia: evidence of inadvertent premature reperfusion and subarachnoid hemorrhage in rats by laser-Doppler flowmetry. Stroke. 29, 2162-2170 (1998).
- Riva, M., Pappadà, G. B., et al. Hemodynamic monitoring of intracranial collateral flow predicts tissue and functional outcome in experimental ischemic stroke. Exp. Neurol. 233, 815-820 (2012).
- Menon, B. K., Smith, E. E., et al. Regional leptomeningeal score on CT angiography predicts clinical and imaging outcomes in patients with acute anterior circulation occlusions. Am. J. Neuroradiol. 32, 1640-1645 (2011).
- Bang, O. Y., et al. Collateral flow predicts response to endovascular therapy for acute ischemic stroke. Stroke. 42, 693-699 (2011).
- Shuaib, A., Butcher, K., Mohammad, A. A., Saqqur, M., Liebeskind, D. S. Collateral blood vessels in acute ischaemic stroke: a potential therapeutic target. Lancet Neurol. 10, 909-921 (2011).
- Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. Rodent Stroke Model Guidelines for preclinical stroke trials (1st edition). J. Exp. Stroke Transl. Med. 2, 2-27 (2009).
- Shepherd, A. P., Öberg, P. A. Laser-Doppler Blood Flowmetry. , Kluwer Academic Publishers. (1990).
- Uluç, K., Miranpuri, A., Kujoth, G. C., Aktüre, E., Başkaya, M. K. Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat. J. Vis. Exp. (48), e1978(2011).
- Garcia, J. H., Wagner, S., Liu, K. F., Hu, X. J. Neurological deficit and extent of neuronal necrosis attributable to middle cerebral artery occlusion in rats. Statistical validation. Stroke. 26, 627-634 (1995).
Przedruki i uprawnienia
