Opisany powyżej protokół został najpierw przetestowany przy użyciu krótkich, 20 msec impulsów feromonu (dawki 1 μg i 10 μg) podawanych bezpośrednio na antenę. Rysunek 4A przedstawia odpowiedzi EAG w reakcji na impulsy feromonu. Są one dodatnie, ponieważ elektroda rejestrująca została podłączona do wejścia odwracającego wzmacniacza, zgodnie z opisem w kroku 3.3. Jak wskazuje widmo mocy, system pomiarowy jest w stanie rozdzielić impulsy feromonu do 10 Hz. Dla porównania przetestowano również dostępny komercyjnie czujnik gazu. TGS2620 to czujnik tlenkowy produkowany do wykrywania oparów rozpuszczalników. Chociaż czujnik wykazuje wysoką czułość na etanol, nie był on w stanie śledzić zmian stężenia (patrz. linia przerywana na Rysunku 4B). Problem wynikał z obudowy czujnika. TGS2620 jest sprzedawany z nakrętką wyposażoną w ognioodporną gazę ze stali nierdzewnej. Czas odpowiedzi jest powolny, ponieważ w praktyce gaz potrzebuje określonego czasu, aby dyfundować przez gazę i dotrzeć do powierzchni tlenku metalu. Regeneracja jest również powolna, ponieważ oczyszczenie czujnika zajmuje czas, gdy gaz zostaje uwięziony wewnątrz nakrętki. W związku z tym usunięto nakrętkę, a ta modyfikacja znacząco poprawiła dynamikę (patrz. linia ciągła na Rysunku 4B). Mimo to, między EAG a TGS2620 wystąpiła dziesięciokrotna różnica (10 Hz versus 1 Hz). Porównanie to ma jednak charakter jakościowy, ponieważ EAG i TGS2620 nie były testowane w tych samych warunkach.
Następnie oceniono stabilność w czasie preparatu z całymi owadami (n = 12 ciem) w porównaniu do wyciętych anten (n = 7 anten). EAG rejestrowano okresowo w odpowiedzi na stymulację feromonową (czas trwania 500 msec, dawka 1 μg). Surowe wartości EAG (w mV) przekształcono w względne wartości EAG (procenty wartości początkowej uzyskanej w czasie t = 0). Rycina 5 wykazuje bardzo dobrą stabilność preparatu z całymi owadami w ciągu dnia pracy. W przeciwieństwie do tego, EAG rejestrowane na izolowanych antenach gwałtownie spadają w czasie, tak że sygnał obniża się do połowy wartości początkowej już po 1,5 hr. Zależność ta jest dobrze opisana przez wykładniczy spadek z czasem życia wynoszącym 2 hr.
Na koniec przetestowano zdolność robotycznej platformy EAG do wyszukiwania źródła zapachu (związek feromonowy Z7-12:OAc) z wykorzystaniem reaktywnej strategii wyszukiwania (Rysunek 6A). Strategia ta łączy ruchy naprzód pod wiatr przy każdym wykryciu feromonu z ruchem spiralnym w przypadku braku detekcji28. Obecność feromonu jest wykrywana z sygnału EAG przez detektor neuromorficzny, zgodnie z opisem w kroku 4.3. Dwa przykłady zapisów EAG podczas wyszukiwania przedstawiono na Rysunku 6B. W przypadku braku źródła zapachu EAG utrzymuje się w okolicach zera (t.j. 2,5 V), przy bardzo niewielkiej liczbie detekcji lub ich całkowitym braku. Robot wykonuje ruch spiralny i zazwyczaj opuszcza obszar poszukiwań przed dotarciem do lokalizacji celu (w 92% prób, n = 26 prób, Rysunek 6C po prawej). Przy obecności źródła zapachu (Rysunek 6C po lewej), EAG wykazuje serie aktywności (detekcje) przeplatane okresami ciszy (brak detekcji). Ruch spiralny występuje głównie na obrzeżach pióropusza zapachu (Rysunek 6C po lewej, czerwona linia) i wydaje się być efektywną strategią ponownego zlokalizowania osi pióropusza po utracie zapachu. W tych warunkach źródło jest zazwyczaj odnajdywane (wskaźnik sukcesu = 96%, n = 44 próby).

Rysunek 1. Preparacja całego owada do EAG oraz układ robotyczny.A) Elektroantenogram (EAG) jest rejestrowany z preparacji całego owada (szczegóły w tekście). B) Preparacja jest zamontowana na robocie. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.

Rysunek 2. Interfejs sprzętowo-programowy. A) Schemat sprzętu wykonany w programie Eagle. Obwód składa się z sześciu sekcji (szczegóły w tekście). Umożliwia filtrowanie (pasmo częstotliwości 0,1-500 Hz, filtr notch przy 50 Hz), wzmacnianie (całkowite wzmocnienie 250X) i kondycjonowanie sygnału w zakresie 0-5 V. B) Projekt Eagle pokazujący ścieżki miedziane (górna warstwa na czerwono, dolna na niebiesko) oraz otwory (na zielono). C) Płytka obwodDrukowanego (PCB) z widocznymi elementami dyskretnymi. D) Graficzny interfejs użytkownika (GUI) napisany w Qt-C++ do wizualizacji danych (czerwona linia = wejście EAG, zielona linia = wyjście modelu neuronu), projektowania filtrów i detekcji sygnałów. Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rycina 3. Detekcja sygnału z EAG. A) Model elektroantenogramu (EAG). EAG jest modelowany jako nieliniowa kaskada27 która składa się ze statycznej nieliniowości, po której następuje 1To jest skrót od „st” (często używany w kontekście statystycznym jako „standard deviation” – odchylenie standardowe lub „student's t-test” – test t-Studenta), jednak bez dodatkowego kontekstu lub pełnego zdania nie jest możliwe jego precyzyjne przetłumaczenie. Proszę o podanie pełnego tekstu źródłowego. filtr dolnoprzepustowy z wykładniczą funkcją odpowiedzi impulsowej
Wyjściowy sygnał EAG jest dany przez całkę splotu z
. B) Podejście inżynieryjne. Filtr dekonwolucji zapisuje
i
, szczegóły znajdują się w tekście. Kontakty z zapachem (trafienia) są wykrywane zawsze, gdy
przekracza zdefiniowany próg. C) Podejście bioinspirowane. Model neuronu typu Hodgkina-Huxleya z pięcioma prądami wewnętrznymi (prąd przeciekowy, K++, Na+, Ca2+ oraz SK) służy do odtworzenia obserwowanego eksperymentalnie wzorca wyładowań pobudzenie-hamowanie (E-I)13W celu detekcji sygnału wykorzystuje się sygnał EAG jako prąd wejściowy, a zdarzenia (tzw. hits) są wykrywane w momencie, gdy po serii pobudzeń następuje hamowanie aktywności wyładowań.

Rysunek 4. Czas odpowiedzi EAG. A) Rejestracje EAG w odpowiedzi na 20 msec impulsy feromonów (dawka 1 μg i 10 μg) podawane z różną częstotliwością (1, 2, 4, 6, 8 i 10 impulsów/sec). Przedstawiono znormalizowane widmo mocy EAG dla bodźca impulsowego o częstotliwości 1 i 10 Hz (dawka 1 μg i 10 μg). EAG rozróżnia poszczególne impulsy do 10 Hz. B) Rejestracje z czujnika gazu TGS2620 w odpowiedzi na etanol (zmienna koncentracja). Krzywe przerywana i ciągła przedstawiają odpowiednio odpowiedź czujnika z nakładką i bez niej. Czujnik z nakładką ma czas odpowiedzi wynoszący dziesiątki sekund i w związku z tym nie może śledzić wahań stężenia gazu. TGS2620 bez nakładki rozróżnia poszczególne wahania do 1 Hz. Prosimy kliknąć tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.

Rycina 5. Stabilność EAG (preparat z całego owada vs wycięta antena). EAG rejestrowano co godzinę przez 8 hr dla preparatu z całego owada (n = 12 ciem) oraz co 20 min przez 3,2 hr dla wyciętych anten (n = 7 anten). Rycina przedstawia względne wartości EAG (procenty wartości początkowej uzyskanej w czasie t = 0). Zależność czasowa dla wyciętych anten jest dobrze dopasowana do wykładniczego zaniku z czasem życia wynoszącym 2 hr (okres połowicznego rozpadu 1,5 hr).

Rycina 6. Eksperymenty robotyczne. A) Strategia surge-casting łączy ruch pod wiatr (surge) w obecności zapachu ze spiralnym poszukiwaniem (casting) w jego nieobecności28. B) Typowy sygnał EAG zarejestrowany podczas poszukiwania w czasie ruchu robota (z zapachem i bez zapachu). C) Trajektorie robota z zapachem (n = 44 prób) i bez zapachu (n = 26 prób). Czerwona przerywana linia reprezentuje kontur pióropusza, w obrębie którego nastąpiło 90% wszystkich detekcji podczas prób. Warunki eksperymentalne: przestrzeń poszukiwań = 4 m x 2,5 m, prędkość robota = 5,6 cm/sec, cel = 10 μg feromonu naniesionego na filtr papierowy i wymienianego co 2 próby, początkowe położenie robota = 2 m od celu, prędkość wiatru = 0,9 ± 0,2 m/sec w miejscu celu. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.