Prosty test behawioralny do badania funkcji wzrokowych u Xenopus laevis

Summary

Kijanki Xenopus laevis preferują pływanie po białej stronie czarno-białego zbiornika. W tym zachowaniu kieruje się ich wizją. Opierając się na tym zachowaniu, przedstawiamy prosty test do testowania funkcji wzrokowej kijanek.

Abstract

Pomiar funkcji wzrokowych u kijanek żaby, Xenopus laevis, pozwala na badania przesiewowe w kierunku ślepoty u żywych zwierząt. Odpowiedź optokinekińska to odruchowe zachowanie oparte na widzeniu, które zaobserwowano u wszystkich badanych kręgowców. Oczy kijanki są małe, więc reakcja odwrócenia ogona została użyta jako alternatywna miara, która wymaga przeszkolonego technika do zarejestrowania subtelnej reakcji. Opracowaliśmy alternatywny test zachowania oparty na fakcie, że kijanki wolą pływać po białej stronie zbiornika, gdy zostaną umieszczone w zbiorniku zarówno po czarnej, jak i białej stronie. Przedstawiony tutaj test jest niedrogą, prostą alternatywą, która tworzy odpowiedź, którą można łatwo zmierzyć. Zestaw składa się ze statywu, kamery internetowej i zagnieżdżonych zbiorników testowych, które są łatwo dostępne w większości laboratoriów Xenopus. Ten artykuł zawiera film pokazujący zachowanie kijanek przed i po przecięciu nerwu wzrokowego. W celu zbadania funkcji jednego oka dołączamy również reprezentatywne wyniki kijanki, w której każde oko poddawane było aksotomii siatkówki w kolejnych dniach. Przyszłe badania mogą opracować zautomatyzowaną wersję tego testu do testowania wzroku wielu kijanek jednocześnie.

Introduction

Xenopus laevis zostały użyte jako organizm modelowy do badania tworzenia oczu. Oczy rozwijają się szybko, osiągając dojrzałość w mniej niż tydzień w celu przetestowania genów lub szlaków, które mają wpływ na rozwój i funkcjonowanie wzroku. Aby przetestować funkcje wzrokowe, wykorzystano odpowiedź optokinetyczną i optomotoryczną odpowiednio u kijanek danio pręgowanego i Xenopus ^1,2 . Ponieważ oczy kijanek Xenopus są stosunkowo mniejsze niż danio pręgowanego, test ten wymaga użycia specjalistycznego sprzętu i przeszkolonego personelu do wykrycia subtelnego machania ogonem i ruchu gałek ocznych u Xenopus. Bardziej solidnym z....

Protocol

Opieka nad zwierzętami

Kijanki Xenopus laevis użyte w tym badaniu były hodowane, hodowane i leczone zgodnie z procedurami zatwierdzonymi przez IACUC Uniwersytetu Medycznego Upstate oraz Przewodnik po opiece i użytkowaniu zwierząt laboratoryjnych.

1. Ustawienie przed zachowaniem: Kijanki

1. Pozyskać zapłodnione zarodki Xenopus z dostępnego na rynku źródła lub zapłodnić oocyty in vitro, jak opisano wcześniej⁶.
2. Umieścić blastulę na zarodkach w stadium płytki nerwowej w temperaturze 18 °C na 60 mm szalkach Petriego zawierających 0,1X MMR [10 X Zmodyfikowany roztwó....

Results

Poprzednie raporty wykazały, że premetamorficzne kijanki Xenopus wolą pływać po białej stronie czarno-białego zbiornika i nazwaliśmy ten test Testem Preferencji Koloru Tła³ Zmieniliśmy ten test, aby przetestować funkcję wzrokową obu oczu kijanek w czasie krótszym niż tydzień. W ten sposób można pobrać ich oczy do badania histologicznego.

Pokazujemy tutaj, jak reakcja wynika z wizualnych wskazówek. W filmie 1 kijanki w lewym i prawym panelu to te same zwierz.......

Discussion

Przedstawiamy tutaj prosty test behawioralny sterowany wzrokiem, który można łatwo wykonać w mniej niż tydzień przez minimalnie przeszkolony personel laboratoryjny. Podczas gdy inne testy wymagają specjalistycznego sprzętu i wiedzy specjalistycznej w zakresie zachowania zwierząt, ten test pozwala na szybki test w celu określenia funkcji wzrokowych. Inny test behawioralny, test unikania wizualnego, został opracowany w celu określenia, w jaki sposób tectum przyczynia się do percepcji wzrokowej w Xenopus¹⁰

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Elastyczny zbiornik o pojemności 1/2 galona z pokrywą	eNasco	SB19271M	Rozmiar: 5-3/8" x 7" x 3-3/4"
taśma
Biała bibułka
Duży gramofon do inokulacji	VWR	50809-022	Rozmiar: Dia 114,3 x  H 76.2 mm (4 1/2  x  3")
Podkładka Durasorb	VWR	82004-836	Rozmiar: 43,2 x 60,1 cm (17 x 24")
Kimwipe	Krackeler Scientific, Inc.	1945-34155-CS
Statyw		Różne Kamera
iSight lub kamera internetowa	Apple	M8817LL/A	Dobre dla większych kijanek, ale małe są trudne do zobaczenia
Komputer przenośny	Apple/PC	Różne	Użyliśmy 13-calowego MacBooka, Intel Core 2 Duo 2 GHz z systemem MacOSX Lion 10.7.5
MiniDV kamera handycam	SONY	DCR-HC42	Podłączony za pomocą firewire do komputera za pomocą 6-przewodowego i 4-przewodowego przewodu alfa FireWire 400
Stacja Handycam	SONY	DCRA-C121	Może być używana do podłączania przewodu ogniowego do
kamery Oprogramowanie QuickTime Player		Quicktime Wersja 10.1
Igła 26 G (długość 5/8")	VWR	BD305115
Dumont #5	Narzędzia do nauki precyzyjnej	11295-10
Jednorazówki
Siarczan gentamycyny [50 mg/ml]	Fisher Scientific	17-528Z	Przechowywany w RT
Sylgard 184 elastomer silikonowy	Fisher Scientific	NC9644388
Instant ocean	Lekarze Foster i Smith	CD-116528	Roztwór podstawowy = 100 g/L przechowywany w RT
Fosforan sodu dwuzasadowy	Sigma Aldrich	S0876	Roztwór podstawowy = 0,4 M przechowywany w RT
Zarodki zapłodnione in vitro	eNasco	LM00490MX	100 zarodków/jednostkę