Wyjaśniono nowatorską metodę zmniejszania zmienności podczas wystawiania ryb na działanie narkotyków. Stwierdzono, że ryby wystawione na różne wzorce ekspozycji na etanol miały zmieniony poziom lęku podczas odstawienia w teście skotoksji jasnej/ciemnej.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Nowa metoda podawania leków wielu danio pręgowanemu (Danio rerio) i kwantyfikacja odstawienia
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Testy lękowe u danio pręgowanego są często badane w połączeniu z zastosowaniem substancji farmakologicznych. W tych badaniach ryby są rutynowo łowione w sieci i transportowane między domowymi akwariami a zbiornikami dozującymi. Aby ułatwić podawanie związków, opracowano nowatorską metodę przenoszenia ryb między zbiornikami w celu podawania leków. Wkładki, które są przeznaczone do tarła, zostały użyte do przeniesienia grup ryb do roztworu leku, umożliwiając dokładne dozowanie wszystkich ryb w grupie. Zwiększa to precyzję i skuteczność dawkowania, co staje się bardzo ważne w przypadku długich harmonogramów wielokrotnego podawania leków. Wdrożyliśmy tę procedurę do wykorzystania w badaniu oceniającym zachowanie danio pręgowanego w teście jasnym/ciemnym po podaniu etanolu w różnych 21-dniowych harmonogramach. U ryb narażonych na dzienne umiarkowane ilości alkoholu stwierdzono istotną różnicę w preferencjach lokalizacyjnych po 2 dniach od odstawienia w porównaniu z grupą kontrolną. Nie zaobserwowano jednak istotnej różnicy w preferencjach lokalizacyjnych w grupie narażonej na cotygodniowe podawanie w napadach objadania się.
Ten protokół można uogólnić do stosowania ze wszystkimi rodzajami związków, które są rozpuszczalne w wodzie i może być stosowany w każdej sytuacji, gdy badane jest zachowanie ryb podczas lub po długich okresach podawania leków. Test jasny/ciemny jest również cenną metodą oceny zmian lękowych wywołanych odstawieniem.
Wprowadzenie
Danio rerio (Danio rerio) to mały gatunek teleost pochodzący z Indii, który jest użytecznym organizmem modelowym do badań behawioralnych1 i medycznych2,3. Danio pręgowany jest również powszechnie stosowany w testowaniu różnych substancji farmakologicznych w celu scharakteryzowania ich wpływu na zachowanie. Do zbadania zachowania danio pręgowanego po podaniu związków takich jak stymulanty4, przeciwlękowe5 i etanol6-8 zastosowano różne dawki i schematy podawania leków.
Nasze laboratorium zbadało wpływ różnych schematów podawania etanolu na lęk i lokomocję danio pręgowanego w dobr....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie procedury i testy behawioralne zostały zatwierdzone przez Radę Etyki Badań nad Zwierzętami Uniwersytetu MacEwan na podstawie protokołu o numerze 06-11-12, który jest zgodny z wytycznymi Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami dotyczącymi opieki i użytkowania zwierząt doświadczalnych.
1. Przygotuj zbiorniki dozujące, roztwory i harmonogram podawania
- Należy przygotować harmonogram podawania w taki sposób, aby zwierzętom podawano dawkę w tym samym środowisku i o tej samej porze dnia, aby uniknąć zakłóceń czasowych lub stronniczości w stosunku do bodźców wzrokowych.
- Zdobądź tyle identycznych, przezroczystych....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Aby zachować dokładność i kontrolę w badaniach farmakologicznych z wykorzystaniem rybek zebra, ważne jest, aby czas trwania podawania etanolu był spójny i precyzyjny, zgodnie z powyższym opisem. Nasza procedura może zwiększyć łatwość i przepustowość procesu dawkowania. Podawanie etanolu w schemacie tygodniowego napadu (weekly-binge) lub codziennego umiarkowanego (daily-moderate) doprowadziło do zmiany poziomu lęku, mierzonego testem jasne/ciemne, w porównaniu z grupami kontrolnymi. Podczas testów przeprowadzonych dwa dni.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Wcześniejsze badania dotyczące podawania leków danio pręgowanemu polegały po prostu na siatce ryb w celu przetransportowania ich z ich domowego zbiornika do roztworu leku12,16. Zakładanie sieci nie zawsze jest spójne i często trwa dłużej niż oczekiwano ze względu na reakcję ucieczki danio pręgowanego, który charakteryzuje się znaczną zmiennością osobniczą. Tradycyjne metody przenoszenia, choć przydatne, można ulepszyć, zmniejszając całkowity czas spędzany przez ryby poza wodą, a także zmniejszając zmienność cz.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy dziękują Joshui Gallupowi za korzystanie z jego sprzętu fotograficznego użytego na rysunku 1. Prace te były wspierane przez grant Natural Sciences and Engineering Research Council (NSERC) Canada Discovery (dla T.J.H.).
Podziękowania
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Trzystrefowy system obudowy laboratoryjnej |  Aquatic Habitats | N/A | |
| Zbiornik do tarła 1.5 L z przegrodą 400 μm | Aquatic Habitats | N/A | |
| Czysty etanol zbożowy | Luxco, INC | N/A | |
| Oprogramowanie do śledzenia ruchu Ethovision XT | Noldus Information Technology | ||
| Pipeta | Eppendorf Canada | ||
| Arena jasna/ciemna | Własny produkt | Wykonać zgodnie z opisem procedury. Szerokość 9.5 cm, głębokość 9.5 cm, długość 55 cm. |
Bibliografia
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).
- Langheinrich, U. Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk. BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).
- Santoriell....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
