Wlewy z tętnic szyjnych do analizy farmakokinetycznej i farmakodynamicznej taksanów u myszy

Summary

Ta metoda została opracowana w celu dostarczenia stałego roztworu leku przez tętnicę szyjną, aby ocenić farmakokinetykę nowych leków w modelach mysich.

Abstract

Proponując użycie leku, kombinacji leków lub dostarczania leków do nowego systemu, należy ocenić farmakokinetykę leku w modelu badawczym. Ponieważ wykorzystanie modeli mysich jest często istotnym krokiem w przedklinicznym odkrywaniu i opracowywaniu leków^1-8, konieczne jest zaprojektowanie systemu do wprowadzania leków myszom w jednolity, powtarzalny sposób. Idealnie byłoby, gdyby system umożliwiał pobieranie próbek krwi w regularnych odstępach czasu w określonym czasie. Możliwość pomiaru stężeń leków za pomocą spektrometrii mas pozwoliła badaczom śledzić zmiany poziomów leków w osoczu w czasie u poszczególnych myszy^{1, 9, 10}. W tym badaniu paklitaksel wprowadzono do myszy transgenicznych jako ciągły wlew tętniczy przez trzy godziny, podczas gdy próbki krwi były jednocześnie pobierane przez krwawienia zaoczodołowe w określonych punktach czasowych. Wlewy z tętnicy szyjnej są potencjalną alternatywą dla wlewów z żyły szyjnej, gdy czynniki takie jak guzy sutka lub inne przeszkody sprawiają, że wlewy szyjne są niepraktyczne. Dzięki tej technice stężenia paklitakselu w osoczu i tkankach osiągnęły podobny poziom w porównaniu z infuzją szyjną. W tym samouczku pokażemy, jak skutecznie cewnikować tętnicę szyjną, przygotowując zoptymalizowany cewnik dla indywidualnego modelu myszy, a następnie pokażemy, jak wprowadzić i zabezpieczyć cewnik do tętnicy szyjnej myszy, przewlec koniec cewnika przez tylną część szyi myszy i podłączyć mysz do pompy, aby zapewnić kontrolowane tempo napływu leku. Wielokrotne krwawienia zadoczodołowe o małej objętości pozwalają na analizę stężeń leków w osoczu w czasie.

Introduction

Infuzja leku przez tętnicę szyjną może być przeprowadzona niezawodnie i powtarzalnie dzięki optymalizacji sprzętu i techniki. Procedura nie jest skomplikowana, choć wymaga precyzyjnej kontroli i dbałości o szczegóły. Do wyizolowania tętnicy szyjnej i wprowadzenia cewnika potrzebna jest doskonała ostrożność i zręczność, które na ogół można nabyć poprzez praktykę. Zabieg wykonywany przez doświadczonego technika nie powinien trwać dłużej niż jedna godzina. Po udanej operacji mysz powinna wyglądać normalnie i zdrowo (chociaż mysz może reagować na wlew leku), a lek(i) może być podawany w kontrolowanej, jednolitej, ciągłej dawce. Próbki krwi muszą być pobrane z miejsca inne....

Protocol

Ten protokół został zatwierdzony przez Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt w Fox Chase Cancer Center oraz przez Laboratorium Zwierząt Facility, i uznany za zgodny z instytucjonalnymi wytycznymi dotyczącymi humanitarnego traktowania zwierząt.

1. Przygotowanie wstępne

1. Przygotowanie cewnika: Przygotuj cewnik z krótkiego odcinka rurki polietylenowej, zmodyfikowanego tak, aby tworzył cienki, stępiony koniec (ryc. 3A). Wykonaj wiele cewników z wyprzedzeniem i oszczędzaj w nieskończoność.
   1. Zapal palnik Bunsena i dostosuj, aby uzyskać niski, stały płomień. Trzymaj rurkę blisko płomienia, aby zmiękczyć p....

Results

Dystrybucja paklitakselu przebiega zgodnie z przewidywalnymi wzorcami podczas 3-godzinnego schematu dawkowania 15-minutowego szybkiego wlewu, po którym następuje 165-minutowa infuzja z niską prędkością.

Rysunek 1 pokazuje porównanie stężeń paklitakselu w osoczu do infuzji żył szyjnych i wlewów tętnicy szyjnej. Stężenie paklitakselu szybko spada w ciągu pierwszych 15 minut po początkowej infuzji o dużej objętości, a następnie utrzymuje się na równi w ciągu następnych 150 minut........

Discussion

Wlew z tętnicy szyjnej jest istotną techniką w tym badaniu farmakokinetyki paklitakselu. Wlew z tętnicy szyjnej to metoda szybkiego rozprowadzania leku w całym układzie krążenia¹⁴. 3-godzinny wlew jest bliższym naśladowaniem klinicznego podawania leków, takich jak taksany, niż wstrzyknięć w bolusie. Operacja może być niezawodnie wykonana przez jedną osobę, czas operacji jest stosunkowo krótki, a wskaźniki sukcesu wynoszą >75%. Po pobraniu próbek należy je przeanalizować odpowiednimi metodami. Zastosowaliśmy sp.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Rurki polietylenowe 0,024" OD X 0,011" Identyfikator	Braintree Scientific, Inc.	PE10
3 Igły (rozmiar 30)	Braintree Scientific, Inc.	NB-30
Wtyczka portu ze stali nierdzewnej (rozmiar 28)	Braintree Scientific, Inc.	PP-28	Nieco większy niż średnica rury PE, aby dobrze przylegać i zachować szczelne uszczelnienie.
2 wtyki złączy ze stali nierdzewnej (rozmiar 30)	Braintree Scientific, Inc.	C-30
Trzy strzykawki o pojemności 1 cm3	Becton, Dickinson and Co.
Sterylny 0,9% roztwór soli	fizjologicznej Hospira	0409-7984-37
Cath-Loc HGS Roztwór heparyny/glicerolu	Braintree Scientific, Inc.	Szew jedwabny HGS
	Braintree Scientific, Inc.	SUT-S  113
Vanna Nożyczki (mikronożyczki)	World Precision Instruments	14122	Ten model ma zakrzywioną końcówkę, ale sprawdzają się również nożyczki z prostą końcówką.
Kleszcze hemostatyczne Hartman Mesquito	Światowe instrumenty precyzyjne	501705
Waciki Betadine	Produkty Perdue L.P.	BSWS1S
Bupiwakaina	Hospira	0409-1160-01	Można zastąpić lidokainą lub podobnym środkiem znieczulenia miejscowego.
Paclitaxel	LC Laboratories	P-9600
Metanol	Sigma-Aldrich	32213
Mikrohematokryty probówki kapilarne, heparynizowany	Fisher Scientific	22-362-566
Uszczelniacz do mikrokapilarek	Fisher Scientific	02-678
C57BL/6J myszy	Fox Chase Cancer Center, Laboratorium Animal Facility własnej hodowli
API 4000 Q-Trap masowy spetrometr	Applied Biosystems