Artykuł metodologiczny

Mikroskopia elektronowa wysokiej rozdzielczości systemu wydzielania Helicobacter pylori Cag typu IV pili wytwarzanego w różnych warunkach dostępności żelaza

DOI:

10.3791/52122

⸱

21 listopada 2014

 ,  , 
1Department of Medicine - Division of Infectious Diseases, Vanderbilt University School of Medicine, 2Tennessee Valley Healthcare Systems, U. S. Dept. of Veterans Affairs

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutaj opisujemy metodę wizualizacji onkogennych organelli bakteryjnych znanych jako System Wydzielania Cag Typu IV (Cag-T4SS). Odkryliśmy, że Cag-T4SS jest wytwarzany w różny sposób na powierzchni H. pylori w odpowiedzi na różne warunki dostępności żelaza.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Helicobacter pylori to spiralna, Gram-ujemna bakteria, która kolonizuje ludzką niszę żołądkową połowy populacji ludzkiej1,2. H. pylori jest główną przyczyną raka żołądka, drugą najczęstszą przyczyną zgonów związanych z rakiem na całym świecie3. Jednym z czynników wirulencji, który został związany ze zwiększonym ryzykiem chorób żołądka, jest wyspa patogeniczności Cag, region o długości 40 kb w chromosomie H. pylori, który koduje system wydzielania typu IV i pokrewną cząsteczkę efektorową, CagA4,5. Cag-T4SS jest odpowiedzialny za translokację CagA i peptydoglikanu do komórek nabłonka gospodarza5,6. Aktywność Cag-T4SS powoduje liczne zmiany w biologii komórki gospodarza, w tym regulację w górę ekspresji cytokin, aktywację szlaków prozapalnych, przebudowę cytoszkieletu i indukcję onkogennych sieci sygnalizacji komórkowej5-8. Cag-T4SS to maszyna makromolekularna składająca się z komponentów podzespołów obejmujących błonę wewnętrzną i zewnętrzną oraz rozciągających się na zewnątrz od komórki do przestrzeni zewnątrzkomórkowej. Zewnątrzkomórkowa część Cag-T4SS jest określana jako "pilus"5. Liczne badania wykazały, że pilusy Cag-T4SS powstają na granicy faz gospodarz-patogen9,10. Jednak cechy środowiskowe, które regulują biogenezę tej ważnej organelli, pozostają w dużej mierze niejasne. Niedawno informowaliśmy, że warunki niskiej dostępności żelaza zwiększają aktywność Cag-T4SS i biogenezę pilusa. Tutaj przedstawiamy zoptymalizowany protokół hodowli H. pylori w różnych warunkach dostępności żelaza przed wspólną hodowlą z ludzkimi komórkami nabłonka żołądka. Ponadto przedstawiamy kompleksowy protokół wizualizacji fenotypu hiperpiliowanego wykazywanego w warunkach ograniczenia żelaza za pomocą analiz skaningowej mikroskopii elektronowej o wysokiej rozdzielczości.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zakażenie H. pylori jest istotnym czynnikiem ryzyka raka żołądka1. Jednak wyniki choroby są różne i zależą od wielu czynników, takich jak genetyka gospodarza, różnorodność genetyczna szczepów H. pylori i elementy środowiskowe, takie jak dieta gospodarza11. Wcześniejsze doniesienia wykazały, że istnieje korelacja między zakażeniem H. pylori, niedoborem żelaza (mierzonym obniżonym stężeniem ferrytyny i hemoglobiny we krwi) a zwiększoną produkcją cytokin prozapalnych, w tym wydzielaniem IL-8, co ostatecznie prowadzi do zwiększonej progresji choroby żołądka12. Ostre zakażenie H. pylori jest również związane z hipochlorhydrią, która upośledza zdolność gospodarza do wchłaniania żelaza odżywczego i ostatecznie prowadzi do zmian w homeostazie żelaza13. Te odkrycia kliniczne sugerują, że dostępność żelaza w niszy żołądkowej może być ważnym czynnikiem wpływającym na wynik choroby. W rzeczywistości modele zwierzęce zakażenia H. pylori wykazały, że niskie spożycie żelaza w diecie zaostrzachoroby żołądka. Obniżony poziom żelaza u tych zwierząt wymaga, aby H. pylori indukował reakcję pozyskiwania żelaza w celu uzyskania żelaza potrzebnego do replikacji bakterii. H. pylori ma zdolność do zaburzania transportu żelaza w komórkach gospodarza, aby ułatwić replikację bakterii w sposób zależny od CagA15. Co ciekawe, wykazano, że wyspa patogenności cag jest regulowana przez reagujący na żelazo czynnik transkrypcyjny Fur16,17. Ponadto szczepy Cag+ są związane ze zwiększonym stanem zapalnym i chorobami żołądka, takimi jak rak1. Odkrycia te wspierają model, w którym H. pylori zmienia ekspresję Cag-T4SS w celu uzyskania żelaza z komórek gospodarza, które znajdują się w środowisku zubożonym w żelazo, co prowadzi do zaostrzenia choroby.

Dwa czynniki, które zwiększają stan zapalny i zachorowalność, to ekspresja Cag i niskie spożycie żelaza w diecie. Fakty te potwierdzają hipotezę, że zmniejszona dostępność żelaza zwiększa produkcję pilusów Cag-T4SS na granicy patogenów gospodarza, co skutkuje gorszą chorobą żołądka11-14. Celem metody przedstawionej w tym artykule jest ustalenie roli żelaza mikroskładnikowego w regulacji biogenezy pilusa Cag-T4SS. W poprzedniej pracy zastosowaliśmy dwa podejścia do obserwacji zależnego od żelaza wzrostu ekspresji Cag-T4SS. Po pierwsze, przeanalizowano szczepy wyjściowe pochodzące od zwierząt utrzymywanych na diecie o wysokiej i niskiej zawartości żelaza i ujawniono, że szczepy dietetyczne o niskiej zawartości żelaza wytwarzały więcej pilusów Cag-T4SS niż szczepy dietetyczne o wysokiej zawartości żelaza14. Po drugie, hodowla szczepu H. pylori 7.13 in vitro w warunkach obfitości żelaza skutkowała zmniejszeniem tworzenia pilusów, podczas gdy komórki hodowane w obecności chelatora żelaza wytwarzały znacznie więcej pilusów.

Kontynuujemy badania nad zależną od żelaza regulacją fenotypu pili Cag-T4SS i oferujemy następujący zoptymalizowany protokół i reprezentatywne wyniki przeprowadzone z dodatkowym szczepem Helicobacter pylori, PMSS1. Uzasadnieniem dla rozwoju tej techniki było skorelowanie zwiększonej aktywności Cag-T4SS w warunkach ograniczenia żelaza ze zwiększonym tworzeniem pilusa Cag-T4SS. Szersze implikacje i zastosowanie tej techniki zapewni zoptymalizowane warunki hodowli, które spowodują zwiększoną produkcję pili Cag-T4SS. Test ten będzie przydatny dla badaczy dążących do określenia składu i architektury Cag-T4SS poprzez wzbogacenie tej ważnej cechy powierzchni bakteryjnej. Przygotowanie i wizualizacja próbki za pomocą mikroskopii elektronowej z emisją polową ma wiele zalet w porównaniu z alternatywnymi technikami, takimi jak metody mikroskopii świetlnej do wizualizacji Cag-T4SS i będzie odpowiednia dla badaczy zainteresowanych badaniem regulacji tej organelli10.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Wzrost H. pylori w różnych warunkach dostępności żelaza i współkultury z ludzkimi komórkami nabłonka żołądka

  1. Do tych badań należy wybrać szczep PMSS1 H. pylori, ponieważ ma on nienaruszoną wyspę patogenności cag i wyraża funkcjonujący system wydzielania typu IV. Wykorzystać również izogeniczny mutant cagE (PMSSI ΔcagE) jako kontrolę negatywną. Hoduj bakterie na płytkach TSA uzupełnionych 5% krwią owczą (płytki agarowe z krwią) przez 24 godziny w temperaturze 37 °C w obecności 5% CO2,
    UWAGA: Przygotuj odczynniki i zbierz materiały zgodnie z opisem w Tabeli materiałów i sprzętu. Końcowe stężenia dla każdego odczynnika są podane w nawiasach.
  2. Zeskrobać bakterie z płytki za pomocą sterylnego aplikatora z bawełnianą końcówką i zaszczepić w zmodyfikowanym bulionie z brucelozy przygotowanym ze składników (patrz Tabela Materiałów i Sprzętu) i uzupełnionym cholesterolem. Inkubować kultury przez noc w temperaturze 37 °C w powietrzu wypełniającym 5% CO2 z wytrząsaniem przy 200 obrotach na minutę (obr./min).
    UWAGA: Cholesterol stosuje się zamiast płodowej surowicy bydlęcej ze względu na fakt, że surowica jest złożona; Zawiera liczne źródła składników odżywczych żelaza, takich jak hem, który powoduje zmienność wyników.
  3. W dniu hodowli bakteryjnej wysiewaj ludzkie komórki nabłonka żołądka AGS (ATCC CRL-1739) na szkiełka nakrywkowe traktowane poli-D-lizyną w 12-dołkowych płytkach (około 1 x 105 komórek na dołek).
  4. Następnego dnia rozcieńczyć kultury bakteryjne do OD600 0,3 w zmodyfikowanym bulionie z brucelozy samodzielnie lub uzupełnionym 100 μM FeCl3, 200 μM dipirydylu (syntetyczny chelator żelaza) lub 200 μM dipirydylu plus 250 μM FeCl3. Inkubować te kultury przez 4 godziny w temperaturze 37 °C w powietrzu wypełniającym 5% CO2 z wytrząsaniem przy 200 obr./min.
  5. Odwirować bakterie przy 1,000 x g w celu zebrania komórek i usunięcia supernatantów przed ponownym zawieszeniem w równej objętości świeżego zmodyfikowanego bulionu z brucelozy uzupełnionego cholesterolem. Zmierz OD600 w hodowli (OD600 = 1,0 = 5,5 x 108 komórek/ml) i dodaj bakterie do komórek nabłonka w wielokrotności infekcji (MOI) 20:1. Wykonaj seryjne rozcieńczenia i umieść komórki bakteryjne na płytkach agaru z krwią, aby ocenić żywotność komórek bakteryjnych.
  6. Inkubować kohodowle ludzkich komórek nabłonka żołądka H. pylori i AGS przez 4 godziny w temperaturze 37 °C w obecności 5% CO2 w warunkach statycznych przed wykonaniem przygotowania próbki za pomocą skaningowej mikroskopii elektronowej (SEM).

2. Przygotowanie próbki SEM do wizualizacji H. pylori Cag-T4SS Pili

  1. Usunąć kokultury H. pylori i AGS z inkubatora i zdekantować supernatant kultur (z wyjątkiem testu IL-8 ELISA). Delikatnie przemyć trzy razy 0,05 M buforem kakodylanu sodu (pH 7,4). Utrwalaj próbki przez 2-4 godziny w temperaturze pokojowej w roztworze 2,0% paraformaldehydu, 2,5% aldehydu gluterowego i 0,05 M buforu kakodylanu sodu. Po utrwaleniu pierwotnym przepłukać próbki trzykrotnie 0,05 M buforem kakodylanu sodu.
  2. Wykonać wtórne utrwalanie przy użyciu 0,1% tetratlenku osmu w 0,05 M buforze kakodylanu sodu w dwóch sekwencyjnych 10-minutowych etapach utrwalania. Po wtórnym utrwaleniu próbki należy trzykrotnie przepłukać 0,05 M buforem kakodylanu sodu.
  3. Po pierwotnym i wtórnym utrwaleniu próbki należy odwodnić przez sekwencyjne przemywanie rosnącym stężeniem etanolu, zgodnie z tabelą 1.
  4. Po odwodnieniu etanolu wykonaj trzy sekwencyjne płukanie ciekłym dwutlenkiem węgla. Następnie wysuszyć próbki w punkcie krytycznym za pomocą suszarki do punktu krytycznego w temperaturze 31,1 ºC i ciśnieniu 1073 PSI.
  5. Zamontuj szkiełka nakrywkowe na aluminiowych klockach próbki SEM i pomaluj cienką linią srebra koloidalnego na krawędzi próbki, aby uzyskać odpowiednie uziemienie i uniknąć ładowania podczas obrazowania SEM.
  6. Pokryj próbki 5 nm złotem-palladem za pomocą maszyny do napylania w celu zwiększenia sygnału elektronów wtórnych próbki i efektu krawędzi.

3. Parametry obrazowania dla analiz SEM o wysokiej rozdzielczości

  1. Przeglądaj próbki za pomocą skaningowego mikroskopu elektronowego z emisją polową (FEG-SEM).
  2. Obraz w trybie wysokiej próżni w odległości roboczej 5-10 mm.
  3. Ustawić napięcie przyspieszające na 5 kV.
  4. Ustaw rozmiar plamki na 2-2,5.
  5. Przechyl próbkę w zakresie 15-25 stopni, aby uzyskać lepszy widok na granicę faz gospodarz-patogen
    6. .
  6. Priorytetowo należy traktować obrazowanie bakterii przylegających do krawędzi komórek nabłonka w celu oglądania w dużym powiększeniu, ponieważ te obszary interakcji gospodarz-patogen są wzbogacone o bakterie tworzące pilusy.

4. Analizy statystyczne do oceny kwantyfikacji pili

  1. Analizuj pili H. pylori Cag-T4SS za pomocą oprogramowania ImageJ, aby określić ilościowo liczbę pilusów / komórkę, a także procent komórek wykazujących fenotyp piliowany zgodnie z poniższymi instrukcjami.
  2. Otwórz pliki z mikrografami w oprogramowaniu ImageJ. Zidentyfikuj pilusy jako struktury utworzone między komórką bakteryjną a komórką gospodarza, o jednolitej szerokości (10-13 nm) i długości (60-150 nm).
    UWAGA: Struktura pilusa jest obecna w szczepach bakteryjnych WT, ale nieobecna w szczepach izogenicznych, takich jak zmutowane szczepy ΔcagE, które zawierają inaktywację w genie kodującym główną ATPazę, która napędza zespół pilusa wydzielania typu IV.
  3. Skalibruj narzędzie pomiarowe, rysując linię za pomocą narzędzia do linii prostej, a następnie klikając zakładkę "Analizuj". Wybierz "Ustaw skalę" z menu rozwijanego i wprowadź wartość paska powiększenia w polu oznaczonym "Znana odległość" i ustaw jednostkę długości na odpowiednie ustawienie (nm). Kliknij "OK".
  4. Zmierz pilusy Cag-T4SS za pomocą narzędzia linii prostej, aby narysować na długości lub szerokości pilusa, a następnie naciśnij "Ctrl-M", aby zmierzyć każdy pilus. Obserwuj okno dialogowe z zmierzonymi wartościami. Zapisz te wartości lub skopiuj i wklej do programu do obsługi arkuszy kalkulacyjnych.
  5. Użyj wcześniej ustalonych parametrów długości i szerokości24, zignoruj cechy, które nie pasują do profilu Cag-T4SS. Następnie określ ilościowo liczbę pilusów na podstawie wartości, które mieszczą się w granicach szerokości 10-13 nm i długości 60-150 nm.
  6. Przeanalizuj ilościowo pilusy statystycznie za pomocą dwustronnego testu t Studenta za pomocą oprogramowania GraphPad Prism.

5. Opcjonalnie: Ocena wydzielania IL-8 pod kątem korelacji z produkcją pilusa

  1. Używając supernatantów z kroku 2.1, wykonaj test ELISA IL-8 zgodnie z instrukcjami producenta dołączonymi do zestawu (patrz tabela materiałów i wyposażenia).
  2. Przeanalizuj IL-8 wydzielaną przez komórki gospodarza i oblicz procentową indukcję IL-8 w odniesieniu do WT PMSS1 hodowanego w samym pożywce. Wykonuj analizę statystyczną za pomocą dwustronnego testu t Studenta przy użyciu oprogramowania GraphPad Prism.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W tym raporcie wykazaliśmy, że warunki o różnej dostępności żelaza mają zdolność do modulowania biogenezy pilusa H. pylori Cag-T4SS na styku patogenu gospodarza. W przypadku hodowli w samym pożywce H. pylori tworzy średnio 3 pili/komórkę. Kiedy H. pylori jest hodowany w warunkach zubożenia w żelazo (przy użyciu syntetycznego chelatora dipyrydylu), który jest subhamujący wzrost bakterii (ryc. 1), bakterie wytwarzają liczne pilusy Cag-T4SS (~ 7 pili / komórkę) podczas wspólnej ho...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Żelazo jest niezbędnym mikroelementem dla większości form życia, w tym patogenów bakteryjnych. W celu ograniczenia żywotności inwazyjnych mikroorganizmów, kręgowce są gospodarzami sekwestracji żelaza w procesie znanym jako "odporność odżywcza"18. W odpowiedzi na to patogeny bakteryjne ewoluowały, aby wykorzystywać żelazo jako globalną cząsteczkę sygnałową do wyczuwania otoczenia i regulowania opracowywania cech wirulencji, takich jak systemy pozyskiwania żelaza, toksyny i maszyneria wydzielania toksyn19,2...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie było wspierane przez Departament Spraw Weteranów Career Development Award 1IK2BX001701 oraz nagrodę CTSA UL1TR000445 od National Center for Advancing Translational Sciences. Wyłączną odpowiedzialność za jego treść ponoszą autorzy i nie muszą one reprezentować oficjalnych poglądów National Center for Advancing Translational Sciences lub National Institutes of Health. Eksperymenty ze skaningową mikroskopią elektronową przeprowadzono częściowo dzięki wykorzystaniu wspólnego zasobu VUMC Cell Imaging Shared Resource, wspieranego przez granty NIH CA68485, DK20593, DK58404, DK59637 i EY08126.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Modyfikowany bulion
Pepton z kazeiny (10 g/L)Sigma70172
Trawienie trawienne tkanek zwierzęcych (10 g/L)Sigma70174
Ekstrakt drożdżowy (2 g/L)Sigma92144
Dekstroza (1 g/L)SigmaD9434
Chlorek sodu (5 g/L)Thermo FisherS271-10
Cholesterol (250X) (4 ml/L)Life Technologies12531018
Chlorek żelaza (100 lub 250 uM)Sigma157740-100G
Dipirydyl (200 uM)SigmaD216305-100G
Zmodyfikowany RPMI
RPMI+HEPES (1X)Life Technologies22400-121
Surowica bydlęca płodu ( 100 ml/L)Life Technologies10438-026
Preparat
Paraformaldehyd (2,0% wodny)Nauki o mikroskopii elektronowej15713
Aldehyd gluterowy (2,5% wodny)Nauki o mikroskopii elektronowej16220
Kakodylan sodu (0,05 M)Mikroskopia elektronowa Nauki12300
Tetroksynek osmu (0,1% wodny)Mikroskopia elektronowa Nauki19150
Etanol (absolutny)SigmaE7023
Farba ze srebrakoloidalnego Nauki o mikroskopii elektronowej12630
Kikuty próbek SEMMikroskopia elektronowaSciences 75220
Szkiełka nakrywkoweThermo Fisher08-774-383
IL-8 Ocena
Quantikine IL-8 Zestaw ELISAR& Systemy DD8000C
z brucelozydo mikroskopii elektronowejwydzielania

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cover, T. L., Blaser, M. J. Helicobacter pylori in health and disease. Gastroenterology. (6), 1863-1873 (2009).
  2. Sycuro, L. K., et al. Peptidoglycan crosslinking relaxation promotes Helicobacter pylori's helical shape and stomach colonization. Cell. 141 (5), 822-833 (2010).
  3. Kodaman, N., et al. Human and Helicobacter pylori coevolution shapes the risk of gastric disease. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 111 (4), 1455-1460 (2014).
  4. Tegtmeyer, N., Wessler, S., Backert, S. Role of the cag-pathogenicity island encoded type IV secretion system in Helicobacter pylori pathogenesis. FEBS J. 278 (8), 1190-1202 (2011).
  5. Fischer, W. Assembly and molecular mode of action of the Helicobacter pylori Cag type IV secretion apparatus. FEBS J. 278 (8), 1203-1212 (2011).
  6. Odenbreit, S., Puls, J., Sedlmaier, B., Gerland, E., Fischer, W., Haas, R. Translocation of Helicobacter pylori CagA into gastric epithelial cells by type IV secretion. Science. 287 (5457), 1497-1500 (2000).
  7. Bourzac, K., Guillemin, K. Helicobacter pylori-host cell interactions mediated by type IV secretion. Cell Microbiol. 7 (7), 911-919 (2005).
  8. Bronte-Tinkew, D. M., et al. Helicobacter pylori cytoxin-associated gene A activates the signal transducer and activator of transcription 3 pathway in vitro and in vivo. Cancer Res. 69 (2), 632-639 (2009).
  9. Johnson, E. M., Gaddy, J. A., Cover, T. L. Alterations in Helicobacter pylori triggered by contact with gastric epithelial cells. Front. Cell. Infect. Microbiol. (2), 17(2012).
  10. Rohde, M., Puls, J., Buhrdorf, R., Fischer, W., Haas, R. A novel sheathed surface organelle of the Helicobacter pylori cag type IV secretion system. Mol. Microbiol. 49 (1), 219-234 (2003).
  11. Cover, T. L., Peek, R. M. Jr Diet, microbial virulence and Helicobacter pylori induced gastric cancer. Gut Microbes. 4 (6), 482-493 (2013).
  12. Queiroz, D. M., et al. Increased gastric IL-1β concentration and iron deficiency parameters in Helicobacter pylori infected children. PLoS One. 8 (2), 57420(2013).
  13. Harris, P. R., et al. Helicobacter pylori-associated hypochlorhydria and development of iron deficiency. J. Clin. Pathol. 66 (4), 343-347 (2013).
  14. Noto, J. M., et al. Iron deficiency accelerates Helicobacter pylori-induced carcinogenesis in rodents and humans. J. Clin. Invest. 123 (1), 479-492 (2013).
  15. Tan, S., Noto, J. M., Romero-Gallo, J., Peek, R. M. Jr, Amieva, M. R. Helicobacter pylori perturbs iron trafficking in the epithelium to grow on the cell surface. PLoS Pathog. 7 (5), (2011).
  16. Danielli, A., Roncarati, D., Delany, I., Chiarini, V., Rappouli, R., Scarlato, V. In vivo dissection of the Helicobacter pylori Fur regulatory circuit by genome-wide location analysis. J. Bacteriol. 188 (13), 4654-4662 (2006).
  17. Pich, O. Q., Carpenter, B. M., Gilbreath, J. J., Merrell, D. S. Detailed analysis of Helicobacter pylori Fur-regulated promoters reveals a Fur box core sequence and novel Fur-regulated genes. Mol. Microbiol. 84 (5), 921-941 (2012).
  18. Cassat, J. E., Skaar, E. P. Iron in infection and immunity. Cell Host Microbe. 13 (5), 509-519 (2013).
  19. Nielubowicz, G. R., Mobley, H. L. Host-pathogen interactions in urinary tract infection. Nat. Rev. Urol. 7 (8), 430-441 (2010).
  20. Brickman, T. J., Cummings, C. A., Liew, S. Y., Relman, D. A., Armstrong, S. K. Transcriptional profiling of the iron starvation response in Bordatella pertussis provides new insights into siderophore utilization and virulence gene expression. J. Bacteriol. 193 (18), 4798-4812 (2011).
  21. Mobley, H. L. Helicobacter pylori factors associated with disease development. Gastroenterology. 113 (6), 21-28 (1997).
  22. Testerman, T. L., Conn, P. B., Mobley, H. L., McGee, D. L. Nutritional requirements and antibiotic resistance patterns of Helicobacter species in chemically defined. J. Clin. Microbiol. 44 (5), 1650-1658 (2006).
  23. Senkovich, O., Ceaser, S., McGee, D. J., Testerman, T. L. Unique host iron utilization mechanisms of Helicobacter pylori revealed with iron-deficient chemically defined media. Infect. Immun. 78 (5), 1841-1849 (2010).
  24. Shaffer, C. L., et al. Helicobacter pylori exploits a unique repertoire of type IV secretion system components for pilus assembly at the bacteria-host cell interface. PLoS Pathog. 7 (9), (2011).
  25. Barrozo, R. M., et al. Functional plasticity in the type IV secretion system of Helicobacter pylori. PLoS Pathog. 9 (2), (2013).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Skaningowa mikroskopia elektronowainterfejs gospodarz patogenwizualizacja pilikom rki nab onka o dkaograniczenie elazaemisyjny dzia a elektronowysuszarka punktu krytycznego

Powiązane artykuły