Ze względu na drastyczny i negatywny związek między otyłością a innymi chorobami współistniejącymi, uzasadnione są badania nad rolą tłuszczu w chorobach i ogólnym zdrowiu. Przedstawiamy protokół izolacji i wycinania magazynów tłuszczowych pozwalający na badanie tkanki tłuszczowej metodami in situ i in vitro.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Lokalizacja, identyfikacja i wycięcie mysich magazynów tłuszczu
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Otyłość dramatycznie wzrosła w ciągu ostatnich kilku dekad i dotyka ponad jedną trzecią dorosłej populacji USA. Ekonomiczne skutki otyłości w 2005 roku osiągnęły oszałamiającą sumę 190,2 miliarda dolarów w samych bezpośrednich kosztach medycznych. Otyłość jest głównym czynnikiem ryzyka wielu chorób. Historycznie niewiele było wiadomo na temat tkanki tłuszczowej oraz jej głównych i podstawowych funkcji w organizmie. Brązowa i biała tkanka tłuszczowa to dwa główne rodzaje tłuszczu, ale obecna literatura zidentyfikowała nowy rodzaj tłuszczu zwany brite lub beżową tkanką tłuszczową. Badania wykazały, że magazyny tłuszczu mają określone profile metaboliczne, a niektóre magazyny pozwalają na skłonność do otyłości i innych powiązanych zaburzeń. Celem tego protokołu jest zapewnienie naukowcom możliwości identyfikacji i wyodrębnienia magazynów tłuszczu, które pozwolą na analizę różnych efektów czynnikowych na tkankę tłuszczową; a także korzystną lub szkodliwą rolę, jaką tłuszcz odgrywa w chorobach i ogólnym stanie zdrowia. Izolacja i wycięcie magazynów tłuszczowych pozwala badaczom przyjrzeć się zarówno dużym zmianom morfologicznym, jak i zmianom histologicznym. Wyizolowany tłuszcz może być również wykorzystany do badań molekularnych w celu oceny zmian transkrypcyjnych i translacyjnych lub do eksperymentów in vitro w celu odkrycia celów zainteresowania i mechanizmów działania. Technika ta jest lepsza od innych opublikowanych technik ze względu na konstrukcję pozwalającą na odizolowanie wielu magazynów z prostotą i minimalnym zanieczyszczeniem.
Wprowadzenie
Adipose pojawił się w centrum uwagi mediów, ze względu na dramatyczny wzrost otyłości w ciągu ostatnich kilku dekad XX wieku. Otyłość dotyka obecnie ponad jedną trzecią dorosłych oraz 17% dzieci i młodzieży w Stanach Zjednoczonych (USA)1. Badania statystyczne dotyczące epidemii otyłości, obejmujące wszystkie grupy etniczne, wykazały, że czarni niebędący Latynosami mają najwyższy wskaźnik otyłości skorygowany o wiek (49,5%) w porównaniu z Amerykanami pochodzenia meksykańskiego (40,4%), wszystkimi Latynosami (39,1%) i białymi nie-Latynosami (34,3%)2. Skutki ekonomiczne otyłości są również coraz większym problemem dla systemu opieki zdrowotnej. W 2012 roku oszacowano, że roczny koszt opieki medycznej nad osobami otyłymi w USA w 2005 roku wyniósł 190,2 miliarda dolarów, co stanowi prawie 21% całkowitego budżetu na wydatki medyczne. Niestety, szacuje się, że otyłość u dzieci jest odpowiedzialna za 14 miliardów dolarów samych bezpośrednich kosztów medycznych. Statystycznie ustalono, że średni koszt leczenia osób z otyłością był o 2741 dolarów rocznie wyższy niż osób bez tej chorobowości3-5.
Otyłość jest głównym czynnikiem ryzyka różnych schorzeń, takich jak: cukrzyca typu 2, dyslipidemia, choroby układu krążenia, rak, zaburzenia układu mięśniowo-szkieletowego i przewlekłe stany zapalne. Otyłość jest głęboko związana z patogenezą zespołu metabolicznego i innych chorób przewlekłych6-8. Przy tak drastycznych i negatywnych powiązaniach między otyłością a innymi chorobami współistniejącymi, badania naukowe skupiły uwagę na lepszym zrozumieniu obecnej epidemii oraz różnorodnych i kluczowych ról, jakie odgrywa tłuszcz
.Historycznie rzecz biorąc, tkanka tłuszczowa była uważana za nieistotną i była postrzegana jedynie jako zwykła tkanka wypełniająca. Obecnie wykazano, że tkanka tłuszczowa odgrywa wiele istotnych ról w funkcjonowaniu organizmu w: metabolizmie, regulacji hormonalnej, stanach zapalnych, ochronie i izolacji9. Tkanka tłuszczowa składa się głównie z adipocytów, ale zawiera również perycyty, komórki śródbłonka, monocyty, makrofagi i pluripotencjalne komórki macierzyste8. Tkanka tłuszczowa jest rozmieszczona w całym ciele w odrębnych magazynach. Główne magazyny można znaleźć podskórnie, podskórnie, domięśniowo i trzewnie10. Wykazano, że magazyny tłuszczowe mają specyficzne profile metaboliczne, które wykazały specyficzną podatność na otyłość i związane z nią zaburzenia8
.Tradycyjnie, tkanka tłuszczowa została podzielona na dwa główne typy: białą tkankę tłuszczową (WAT) i brązową tkankę tłuszczową (BAT); chociaż najnowsza literatura wskazuje na obecność trzeciej grupy ochrzczonej jako brite lub beżowa tkanka tłuszczowa11. Wykazano, że tkanka tłuszczowa ma różne kolory, morfologie, funkcje metaboliczne, cechy biochemiczne i genetyczne wzorce ekspresji10. Adipocyty w WAT mają pojedynczą, dużą kroplę lipidu i zmienne ilości mitochondriów. WAT występuje głównie w podskórnych i trzewnych miejscach ciała. WAT funkcjonuje przede wszystkim jako miejsce magazynowania energii i ochrony narządów. Adipocyty w BAT mają morfologię wielolotkową i obfite mitochondria. BAT znajduje się przede wszystkim w szyi i dużych naczyniach krwionośnych klatki piersiowej, a także w łopatkach12. BAT funkcjonuje przede wszystkim w zachowaniach wydatkujących energię, które regulują termogenezę7. Wykazano, że brite lub beżowa tkanka tłuszczowa ma podobną morfologię i ekspresję do BAT, ale stwierdzono, że pochodzi z białych adipocytów11.
Opisana metoda chirurgiczna w tym manuskrypcie daje badaczom możliwość analizy różnych skutków takich czynników jak: środowisko, farmaceutyki i genetyka, na tkankę tłuszczową; jak również korzystnej lub szkodliwej roli, jaką tkanka tłuszczowa odgrywa w chorobach i ogólnym zdrowiu. Zapewnienie również sposobu identyfikacji i izolacji różnych typów tkanki tłuszczowej, aby umożliwić lepsze zrozumienie relacji biochemicznych i różnic między magazynami. Może to pomóc w określeniu związku między lokalizacją, funkcją i rodzajami tłuszczu w organizmie. Ta opisana metoda osiąga to, dostarczając środków do ogólnej wizualizacji, analizy ekspresji genów, analizy ekspresji białek, badania histologicznego i izolacji pierwotnych linii komórkowych do badań in vitro. Obecnie istnieje wiele artykułów, które dają wgląd w zachowanie metaboliczne różnych magazynów tłuszczowych, a także ich lokalizacje anatomiczne; Nie podawaj jednak szczegółowej metody, jak konkretnie zlokalizować, zidentyfikować i odizolować te magazyny. Ta metoda chirurgiczna zapewnia precyzyjną technikę, która pozwala na odizolowanie wielu magazynów przy minimalnej ilości sekcji i zanieczyszczenia w porównaniu z innymi metodami przeznaczonymi do izolacji jednego lub dwóch magazynów13-14.
Celem tego protokołu jest dostarczenie precyzyjnej metody identyfikacji i izolacji różnych typów magazynów tłuszczu z wielu anatomicznych lokalizacji.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
UWAGA: Wszystkie procedury na zwierzętach zostały przeprowadzone za zgodą Instytucjonalnego Komitetu ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) Uniwersytetu w Cincinnati oraz zgodnie z Przewodnikiem po Opiece i Użytkowaniu Zwierząt Laboratoryjnych z National Institutes of Health (Publikacja NIH nr 85-23, poprawiona w 1996 roku).
1. Uśpij i wysterylizuj mysz
- Umieść mysz w pojemniku zawierającym supreparataputyczną dawkę izofluranu i pozwól jej wdychać do uzyskania efektu. Po uśpieniu myszy wyjmij ją z pudełka.
- Zwichnięcie szyjki macicy jako drugi sposób eutanazji.
- Wysterylizuj zewnętrzną powierzchnię myszy, oczyszczając zwierzę 70% etanolem.
2. Identyfikacja i izolacja trzech różnych składów tłuszczu
- Izolacja brunatnej tkanki tłuszczowej (BAT):
- Upewnij się, że sierść jest mokra od oczyszczania alkoholowego, aby pomóc w przecięciu warstw naskórka i skóry właściwej.
- Ustaw mysz w pozycji leżącej, opierając się plecami o stół.
- Chwyć kleszczami skórę tuż pod przeponą, unieś i nacinaj nożyczkami.
- Przetnij poprzecznie na obwodzie myszy, aby odsłonić otrzewną.
- Odsłoń magazyn BAT w kształcie motyla, nakładając rękawice na górną połowę myszy. Trzymaj dolne kończyny i brzuch jedną ręką i pociągnij skórę w kierunku głowy.
- Ustaw mysz tak, aby leżała na stole na brzuchu. Uważaj, aby nie zanieczyścić odsłoniętego magazynu włosami.
- Wyczyść narzędzia chirurgiczne i zmień rękawice na nowe.
- Zlokalizuj łopatki i odpowiadający im magazyn. Ostrożnie usuń powierzchowną białą tkankę tłuszczową na wierzchu motyla, a następnie wypreparuj motyla z brązowego tłuszczu międzyłopatkowego. Uważaj, aby uniknąć mięśni ściśle związanych z brązowym tłuszczem.
UWAGA: Użycie mikroskopu preparacyjnego jest zalecane do usuwania białej tkanki tłuszczowej, a także do oddzielenia brązowej tkanki tłuszczowej od łopatek. - Usuń magazyn tłuszczu i przenieś do probówki do mikrowirówki o pojemności 2 ml.
- Jeżeli ma zostać wyekstrahowane RNA lub białko, należy zamrozić tkankę przez zanurzenie w ciekłym azocie i przechowywać w temperaturze -80 °C. Próbkę należy natychmiast zamrozić, aby zapobiec degradacji. W przypadku hodowli przykryj tkankę DMEF-12 i umieść na lodzie, aż wszystkie próbki zostaną pobrane do hodowli (informacje dodatkowe).
- Izolacja podskórnej tkanki tłuszczowej (SQ), czyli magazynu białej tkanki tłuszczowej (WAT):
- Załóż nową parę rękawiczek, aby nie zanieczyszczać krzyżowo między magazynami tłuszczu.
- Odsłoń pachwinowe, trójkątne magazyny SQ, zdejmując rękawiczki z dolnej połowy myszy. Trzymaj górne kończyny i klatkę piersiową w jednej ręce, a drugą ręką ciągnij skórę w dół w kierunku stóp.
- Ustaw mysz w pozycji leżącej, uważając, aby nie zanieczyścić odsłoniętego magazynu włosami.
- Wyczyść narzędzia chirurgiczne i zmień rękawice na nowe.
- Ostrożnie rozetnij trójkąty tłuszczu SQ. Należy uważać, aby nie zanieczyścić próbki mięśniami, sąsiednim tłuszczem, gruczołami sutkowymi ani nie przeciąć jakichkolwiek naczyń krwionośnych i nie zanieczyścić próbki krwią.
UWAGA: Użycie mikroskopu preparacyjnego jest zalecane, jeśli granice nie są wyraźnie określone. - Usunąć magazyny tłuszczu i przenieść do probówek do mikrowirówek o pojemności 2 ml.
- Jeżeli ma zostać wyekstrahowane RNA lub białko, należy zamrozić tkankę przez zanurzenie w ciekłym azocie i przechowywać w temperaturze -80 °C. Próbkę należy natychmiast zamrozić, aby zapobiec degradacji.
- Do barwienia napraw lub osadź w OCT. W przypadku hodowli przykryj tkankę DMEF-12 i umieść na lodzie, aż wszystkie próbki zostaną pobrane do hodowli (informacje dodatkowe).
- Izolacja tłuszczu gonadalnego trzewnej tkanki tłuszczowej (VAT) i białej tkanki tłuszczowej (WAT):
- Załóż nową parę rękawiczek, aby nie zanieczyszczać krzyżowo między magazynami tłuszczu.
- Nożyczkami przetnij otrzewną poprzecznie, bezpośrednio pod przeponą. Przeciąć otrzewną od przepony do odbytnicy w połowie korony, aby odsłonić narządy jamy brzusznej.
- Zlokalizuj jądra lub jajniki i zidentyfikuj przyczepioną białą tkankę tłuszczową, znaną jako tkanka tłuszczowa najądrza u mężczyzn lub tkanka tłuszczowa gonad u kobiet.
- Wyczyść narzędzia chirurgiczne i zmień rękawice na nowe
- Ostrożnie wypreparuj oba najądrza magazyny tłuszczu z jąder, najądrzy i nasieniowodów. Lub jeśli jest kobietą, ostrożnie wypreparuj obie gonadalne poduszeczki tłuszczowe z jajników.
- Usuń magazyny tłuszczu i przenieś je do probówek do mikrowirówek o pojemności 2 ml.
- Jeżeli ma zostać wyekstrahowane RNA lub białko, należy zamrozić tkankę przez zanurzenie w ciekłym azocie i przechowywać w temperaturze -80 °C. Próbkę należy natychmiast zamrozić, aby zapobiec degradacji.
- Do barwienia napraw lub osadź w OCT. W przypadku hodowli przykryj tkankę DMEF-12 i umieść na lodzie, aż wszystkie próbki zostaną pobrane do hodowli (informacje dodatkowe).
3. Izolacja okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej (PVAT)
- Izolacja serca:
- Połóż mysz w pozycji leżącej na plecach z górnymi i dolnymi wyrostkami wysuniętymi na zewnątrz.
- Zabezpiecz przydatki za pomocą taśmy chirurgicznej.
- Po ustawieniu myszy zgodnie z powyższym opisem, wytwórz napięcie, podnosząc wyrostek mieczykowaty za pomocą kleszczy. Przeciąć poziomo przez przeponę, odsłaniając dolną część klatki piersiowej.
- Utrzymując napięcie, unosząc się na wyrostku mieczykowatym, przeciąć klatkę piersiową wyżej w kierunku głowy, tuż przy boku mostka.
- Podnieś klatkę piersiową tuż poniżej obojczyka i przetnij wzdłuż dolnej długości obojczyka w kierunku pachy w obu kierunkach. Klatka piersiowa i jej zawartość (serce, płuca itp.) powinny być teraz wyraźnie widoczne.
- Oczyść klatkę piersiową z obcej krwi i płynu za pomocą sterylnej gazy do wchłonięcia płynu. Jeśli pobierasz narządy lub naczynia, upewnij się, że jest obfity (informacje uzupełniające).
- Gdy obszar zostanie oczyszczony z płynu, przetnij oskrzela i przyczepione naczynia, aby usunąć płuca, umożliwiając lepszą ekspozycję serca.
- Lokalizacja i wycięcie okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej aorty (PVAT):
- Usuń następujące narządy, aby lepiej zidentyfikować dolne części aorty: wątrobę, żołądek, śledzionę, trzustkę, jelita i okrężnicę.
- Najpierw zacznij od identyfikacji żołądka i przełyku. Przetnij przełyk na styku żołądkowo-przełykowym, aby uwolnić żołądek od ciała.
- Następnie zidentyfikuj jelita i otaczającą krezkę. Przeciąć powierzchownie przez krezkę, ponieważ leży ona bardzo blisko nerkowej części aorty, a następnie "przeprowadź jelito".
- Wytnij okrężnicę jak najbliżej odbytnicy. W ten sposób uwalniając żołądek, jelito i okrężnicę od myszy.
- Usuń żołądek, jelito, okrężnicę, trzustkę i śledzionę, przecinając przylegającą krezkę i naczynia. Trzustka i śledziona powinny być wolne wraz z żołądkiem, jelitami i okrężnicą.
- Usuń wątrobę, przecinając żyły wątrobowe i dołączając krezkę, usuń wszystkie płaty.
- Odetnij warstwę trzewną i tłuszcz otaczający nerki. Pozostaw nerki przyczepione do aorty in vivo, aby służyły jako markery geograficzne dla różnych segmentów aorty.
- Spłucz obszar sterylnym 1x PBS i usuń cały płyn przez wchłonięcie sterylną gazą.
- Za pomocą mikronożyczek i mikrokleszczyków oddziel aortę od jej grzbietowego przyczepu do kręgosłupa i brzusznego przyczepu do przełyku.
- Odizoluj aortę, podążając za aortą i odłączając ją na całej długości aorty zstępującej od początku w sercu do rozwidlenia w okolicy biodrowej.
- Zidentyfikuj i odizoluj naczynia podobojczykowe. Izoluj te naczynia od szyi do korzenia aorty, aby lepiej odsłonić połączenie aortalne i korzeń w sercu.
- Usuń grasicę, a następnie przetnij tętnicę ramienno-głowową, lewą tętnicę szyjną wspólną i lewą tętnicę podobojczykową, umożliwiając ruch serca.
- Za pomocą mikroskopu preparacyjnego obejrzyj warstwę okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej (PVAT) otaczającą aortę.
- Bardzo uważając, aby nie uszczypnąć ani nie ścisnąć PVAT, delikatnie wyciągnij PVAT z aorty za pomocą mikrokleszczyków. Delikatnie odetnij przyczep PVAT do aorty za pomocą mikronożyczek, zaczynając od okolicy klatki piersiowej tuż nad miejscem, w którym znajduje się przepona.
UWAGA: Zalecany jest mikroskop preparacyjny. - Powtórz ten proces na całej długości aorty, kończąc na okolicy podnerkowej aorty, która znajduje się tuż nad rozwidleniem biodrowym naczynia aortalnego.
- Jeśli pożądany jest PVAT łuku aorty, użyj tej samej metody, aby usunąć PVAT z mniejszej krzywizny łuku.
- Umieścić próbki PVAT w probówce (probówkach) do mikrowirówek o pojemności 2 ml.
- Jeżeli ma zostać wyekstrahowane RNA lub białko, należy zamrozić tkankę przez zanurzenie w ciekłym azocie i przechowywać w temperaturze -80 °C. Próbkę należy natychmiast zamrozić, aby zapobiec degradacji. W przypadku hodowli przykryj tkankę DMEF-12 i umieść na lodzie do momentu pobrania wszystkich próbek do hodowli (informacje dodatkowe).
UWAGA: Dodatkowe magazyny tłuszczu, które należy wziąć pod uwagę, jeśli są zainteresowane kompleksową analizą magazynu tłuszczowego, obejmują: zaotrzewnowe, krezkowe, onerowe, osierdziowe i podkolanowe.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Identyfikacja i lokalizacja podskórnej tkanki tłuszczowej pachwinowej, brunatnej tkanki tłuszczowej międzyłopatkowej, trzewnej tkanki tłuszczowej nadjądrzowej (Rysunek 1), a także okołonaczyniowej tkanki tłuszczowej łuku aorty, tkanki tłuszczowej aorty piersiowej, tkanki tłuszczowej aorty nadnerczowej oraz tkanki tłuszczowej aorty podnerczowej (Rysunek 2>) zostały pomyślnie przeprowadzone przy użyciu opisanego метода chirurgicznego. Badanie histologiczne oraz rozróżnienie między próbkami...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Otyłość może prowadzić do wielu chorób, a pełne zrozumienie roli, jaką odgrywa tłuszcz, nie jest w pełni zrozumiałe; W związku z tym konieczne jest kontynuowanie badań w dziedzinie tkanki tłuszczowej. Modele zwierzęce, w szczególności modele mysie, są idealne do wstępnych badań nad postępem chorób i testowania potencjalnych terapii farmaceutycznych. Przy zastosowaniu tych modeli, precyzyjna izolacja i wycięcie magazynów tłuszczowych jest niezwykle ważnym i niezbędnym narzędziem w badaniach patologii chorób dotkniętych tk...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych ani innych konfliktów interesów.
Podziękowania
Autorzy nie mają żadnych podziękowań.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Isoflurane | Med-Vet International | #RXISO-250 | |
| 70% Etanol | Fisher | 07-678-001 | |
| DMEF-12 | Sigma Aldrich | D-6421 | Ogrzać w kąpieli wodnej przed założeniem chusteczki. |
| 2 ml Probówki do mikrowirówek | Midsci | MCT-200-C-S | |
| Solanka solankowa buforowana fosforanem | Sigma | Aldrich P5368-10PAK |
Bibliografia
- Ogden, C. L., Carroll, M. D., Kit, B. K., Flegal, K. M. Prevalence of obesity in the United States, 2009-2010. NCHS Data Brief. 82, 1-8 (2012).
- Flegal, K. M., Carroll, M. D., Kit, B. K., Ogden, C. L. Prevalence of obesity and trends in the distribution of body mass index among US adults, 1999-2010. 307 (5), 491-497 (2012).
- Cawley, J., Meyerhoefer, C. The medical care costs of obesity: an instrumental variables approach. Journal of Health Economics. 31 (1), 219-230 (2012).
- Obesity accounts for 21 percent of U.S. health care costs, study finds. , Cornell University. Available from: http://www.sciencedaily.com/releases/2012/04/120409103247.htm (2012).
- Marder, W., Chang, S. Childhood Obesity: Costs, Treatment Patterns, Disparities in Care, and Prevalent Medical Conditions. Thomson Medstat Research Brief. , (2006).
- Cortez, M., Carmo, L. S., Rogero, M. M., Borelli, P., Fock, R. A. A high-fat diet increases IL-1, IL-6, and TNF-α production by increasing NF-κB and attenuating PPAR-γ expression in bone marrow mesenchymal stem cells. Inflammation. 36 (2), 379-386 (2013).
- Sanchez-Gurmaches, J., Hung, C. M., Sparks, C. A., Tang, Y., Li, H., Guertin, D. A. PTEN loss in the Myf5 lineage redistributes body fat and reveals subsets of white adipocytes that arise from Myf5 precursors. Cell Metab. 16 (3), 348-362 (2012).
- Sethi, J. K., Vidal-Puig, A. J. Thematic review series: adipocyte biology. Adipose tissue function and plasticity orchestrate nutritional adaptation. J Lipid Res. 48 (6), 1253-1262 (2007).
- Aarsland, A., Chinkes, D., Wolfe, R. R. Hepatic and whole-body fat synthesis in humans during carbohydrate overfeeding. Am J Clin Nutr. 65 (6), 1774-1782 (1997).
- Park, A., Kim, W. K., Bae, K. H. Distinction of white, beige and brown adipocytes derived from mesenchymal stem cells. World J. Stem Cells. 6 (1), 33-42 (2014).
- Wu, J., et al. Beige adipocytes are a distinct type of thermogenic fat cell in mouse and. 150 (2), 366-376 (2012).
- Giralt, M., Villarroya, F. White, brown, beige/brite: different adipose cells for different functions. Endocrinology. 154 (9), 2992-3000 (2013).
- Casteilla, L., Pénicaud, L., Cousin, B., Calise, D. Choosing an adipose tissue depot for sampling: factors in selection and depot specificity. Methods Mol. Biol. 456, 23-38 (2008).
- Grant, R., Youm, Y. H., Ravussin, A., Dixit, V. D. Quantification of adipose tissue leukocytosis in obesity. Methods Mol. Biol. 1040, 195-209 (2013).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
