Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Metodologia syntezy asymetrycznych układów biosprzężonych pochodzących z ferrocenu za pomocą metodologii opartej na żywicy w fazie stałej

9.1K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/52399

⸱

12 marca 2015

 ,  ,  , 
1Department of Chemistry, Texas Christian University

W tym artykule

Podsumowanie

Synteza asymetrycznych gatunków ferrocenu jest wyzwaniem przy użyciu technik rozwiązań. Niniejszy raport koncentruje się na metodach przeprowadzonych w celu wytworzenia biokoniugatu ferrocen-biotyna przy użyciu łatwych i czystych reakcji przeprowadzanych w drodze syntezy w fazie stałej. Wykazano, że włączenie ugrupowania tiolanowego nadaje zdolność do unieruchamiania na powierzchniach złota.

Streszczenie

Wczesne wykrycie jest kluczem do skutecznego leczenia większości chorób i jest szczególnie niezbędne do diagnozowania i leczenia wielu rodzajów raka. Najczęstszymi stosowanymi technikami są metody obrazowania, takie jak obrazowanie metodą rezonansu magnetycznego (MRI), topografia emisji pozytonów (PET) i topografia komputerowa (CT) i są optymalne do zrozumienia fizycznej struktury choroby, ale można je wykonywać tylko raz na cztery do sześciu tygodni ze względu na stosowanie środków do obrazowania i całkowity koszt. Mając to na uwadze, rozwój technik "przyłóżkowych", takich jak bioczujniki, które oceniają stopień choroby i/lub skuteczność leczenia w gabinecie lekarza i robią to w odpowiednim czasie, zrewolucjonizowałby protokoły leczenia. 1 W celu zbadania bioczujników opartych na ferrocenie do wykrywania biologicznie istotnych cząsteczek2 opracowano metody wytwarzania biokoniugatów ferrocen-biotyna opisane w niniejszym dokumencie. W tym raporcie skupimy się na układzie biotyna-ferrocen-cysteina, który można unieruchomić na powierzchni złota.

Wprowadzenie

Biosensory to małe urządzenia, które wykorzystują technologię rozpoznawania biomolekularnego jako platformę do selektywnej analizy i są wykorzystywane ze względu na ich specyficzność, szybkość i niski koszt. Bioczujniki elektrochemiczne do wykrywania biomolekuł znajdują się w czołówce tej dziedziny ze względu na swoją prostotę, opłacalność i wysoką czułość. 1,3 Ogólna anatomia tych czujników to elektroda wyposażona w cząsteczkę rozpoznającą specyficzną dla markera biologicznego, który jest przedmiotem zainteresowania. Wiązanie biomarkera przez cząsteczkę rozpoznającą powoduje lokalną zmianę potencjału lub prądu, którą można wykryć za pomocą prostego pomiaru. Do tej pory ugrupowanie rozpoznawania może obejmować enzymy, 4-8 przeciwciał, 9-12 całych komórek, 13-16 receptorów, 17-20 peptydów21-23 i DNA24 i w dużej mierze koncentruje się na większych, biologicznych cząsteczkach. 25-28 Wysiłki badawcze w tej dziedzinie koncentrowały się głównie na immunoczujnikach, w których immunoglobulina jest unieruchomiana za pomocą aktywnego rdzenia redoks (takiego jak ferroken) i wykorzystywana do wykrywania przeciwciał będących przedmiotem zainteresowania. Badania te zostały wyłączone z zastosowań klinicznych ze względu na słabą precyzję i czasochłonność wynikającą z powikłań wynikających ze stosowania antygenu/przeciwciał. 1,3 Coraz więcej uwagi poświęca się wykrywaniu małych cząsteczek (poniżej 1 kg/mol), które mają znaczenie biomedyczne, żywnościowe i środowiskowe, a także mają znaczenie dla bezpieczeństwa narodowego. 29 Najbardziej znanymi przykładami urządzeń biosensorycznych są monitory do samokontroli, które są wyposażone w elektrody enzymatyczne z sitodrukiem sprzężone z kieszonkowym miernikiem amperometrycznym. Systemy te zazwyczaj wykorzystują metodę kulometryczną, w której mierzy się całkowitą ilość ładunku generowanego w reakcji utleniania glukozy w pewnym okresie czasu. Urządzenia nadające się do sprzedaży muszą być przenośne, wytrzymałe i trzymane w ręku, aby były łatwe w użyciu dla ogółu społeczeństwa.

Znaczniki redoks, takie jak ferrocene, są niezbędne do zapewnienia elektrochemicznej detekcji biomarkerów lub małych cząsteczek w roztworze, ponieważ większość biomarkerów nie jest wewnętrznie aktywna elektrochemicznie. 30-38 Ferrocen to cząsteczka metaloorganiczna, która jest złotym standardem w elektrochemii, co czyni ją doskonałym wyborem do integracji z biosensorami elektrochemicznymi. Aktywne gatunki redoks na bazie ferrocenu przyciągnęły już znaczną uwagę ze względu na ich niewielkie rozmiary, dobrą stabilność, wygodny dostęp do syntetyczności, łatwą modyfikację chemiczną, względną lipofilowość i łatwość strojenia redoks. 3,30-42 Małe cząsteczki oparte na rdzeniu ferrocenu są szeroko stosowane jako detektory jonów metali i małych cząsteczek. 32-38,43 Systemy ukierunkowane na większe gatunki, takie jak biomolekuły, wykorzystywały przyłączanie dużych przeciwciał lub immunoglobulin do pochodnych ferrocenu, które zostały osadzone na powierzchni elektrochemicznej. 1,3,39,44 W każdym przypadku potencjał i intensywność prądu pary redoks FeIII/FeII uległy zmianie po sprzężeniu molekularnym, tworząc w ten sposób nowy uchwyt spektroskopowy wskazujący na obecność cząsteczki analitu. Zmiana ta wynika z rozległego nakładania się na siebie, które występuje między układem pi pierścieni cyklopentadienylu a żelaznymi orbitalami d. Jeśli układ pi zostanie zmodyfikowany, tj. derywatyzowany lub poddany reakcji, to oddziaływanie orbitalne z kolei ulegnie zmianie. Będzie to miało wpływ na rdzeń Fe i może być obserwowane jako przesunięcie potencjału pary FeIII/FeII. 40,45,46 Te właściwości sprawiają, że taki system jest atrakcyjny do stosowania jako środek kwantyfikujący w elektrochemicznym teście immunologicznym lub bioczujniku.

Aby wytworzyć systemy zawierające ferrocen, specyficzne dla pojemności biosensorów, optymalne jest zmodyfikowanie jednego pierścienia Cp za pomocą bioreceptora specyficznego dla cząsteczki docelowej i wykorzystanie drugiego pierścienia Cp jako molekularnego łącznika z odczytem elektrochemicznym lub elektrodą (Rysunek 1). Synteza tych asymetrycznych pochodnych ferrocenu jest utrudniona przez reakcje uboczne i tworzenie się gatunków dimerycznych i polimerowych powstających w wyniku sieciowania międzycząsteczkowego. 47 Jednak chemia sprzęgająca wytwarzająca wiązanie amidowe jest najbardziej bezpośrednią drogą do uzyskania prostych pochodnych ferrocenu obejmujących składniki biologiczne, takie jak peptydy i ich metabolity. Dlatego techniki fazy stałej opracowane po raz pierwszy w latach 50. przez Merrifielda do syntezy peptydów mogą być stosowane do związków metaloorganicznych zawierających ferrosen. Dzięki zastosowaniu ortogonalnie podstawionej cząsteczki kwasu 1'-Fmoc-amino-ferrocen-1-karboksylowego, skonstruowano i szczegółowo opisano w niniejszym dokumencie układ ferrocenowy, który może zawierać ugrupowanie receptorowe (biotynę), odczyt elektrochemiczny (ferrocen) i składnik łącznikowy immobilizujący (cysteina). Omówiono syntezę tego biokoniugatu, a także dowody na unieruchomienie na powierzchni złota. Praca ta stanowi pierwszą prezentację systemu złożonego z biotyny, ferrocenu i aminokwasu do immobilizacji na powierzchni złota.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Synteza biotyny-Fc-cysteiny (1)

  1. Metody fazy stałej do wytwarzania żywicy 1.
    1. Umieścić żywicę zawierającą biotynę (250 mg, 0,145 mmol) w strzykawce ze spiekaną wodą i spęcznieć żywicę, pobierając dimetyloformamid (5 ml) i potrząsając strzykawką na wytrząsarce laboratoryjnej przez 20 minut. Wydalić roztwór i powtórzyć pęcznienie dimetyloformamidu jeszcze raz.
    2. Usunąć grupę ochronną Fmoc, dodając do strzykawki 4-6 ml 20% piperydyny w dimetyloformamidzie, a następnie wstrząsając przez 10-15 minut. Powtórz proces deprotekcji z kolejnymi 4-6 ml piperydyny. Przemyć żywicę sekwencją 3x dimetyloformamid, 3x dimetyloformamid:metanol (1:1), 3x metanol:dichlorometan (1:1), 3x dichlorometan, ~5 ml każdy. Wykonaj test ninhydryny (+) na małej próbce (~10) kulek, aby potwierdzić udaną deprotekcję przez obecność niebieskiego po podgrzaniu.
    3. Zmieszać roztwór zawierający kwas 1'-Fmoc-amino-ferroczyno-1-karboksylowy (203,3 mg, 0,4350 mmol), hydrat 1-hydroksybenzotriazolu (58,8 mg, 0,413 mmol), diizopropylokarbodiamid (0,0673 ml, 0,435 mmol), diizopropyloetyloaminę (0,0757 ml, 0,435 mmol) oraz mieszaninę 4:1 dichlorometanu i dimetyloformamidu. Pobrać go do strzykawki i delikatnie wstrząsać wytrząsarką laboratoryjną przez 6 godzin. Następnie wyjąć roztwór ze strzykawki i umyć zgodnie z wcześniejszym opisem.
    4. Wykonaj test ninhydryny (-), jak opisano powyżej, aby potwierdzić sprzężenie. Test ninhydryny może być nadal przydatny w potwierdzaniu sprzężenia pomimo pomarańczowego koloru koralika pochodzącego z przyczepienia ugrupowania zawierającego żelazo.
    5. Następnie usunąć grupę Fmoc przez dodanie 20% piperydyny do dimetyloformamidu i umyć zgodnie z powyższym opisem. Test ninhydryny (+) powinien być użyty do potwierdzenia usunięcia Fmoc.
    6. Przygotować roztwór złożony z Fmoc-Cys(Trt)-OH (254,8 mg, 0,4350 mmol), 1-hydroksybenzotriazolu hydratu (58,8 mg, 0,4125 mmol), diizopropylokarbodimidu (0,0673 ml, 0,4350 mmol), diizopropyloetyloaminy (0,0757 ml, 0,4350 mmol) oraz mieszaniny 4:1 dichlorometanu i dimetyloformamidu. Dodaj ten koktajl sprzęgający cysteinę, strzykawkę ze strzykawką i delikatnie wstrząsaj przez 6 godzin. Umyj zgodnie z protokołem opisanym wcześniej.
    7. Potwierdź sprzężenie za pomocą testu ninhydryny (-), a następnie usuń składnik Fmoc z 20% piperydyną i przemyj. Sprawdź wolną aminę końcową za pomocą testu ninhydryny (+).
  2. Rozszczepienie 1 z żywicy.
    1. Przygotować roztwór TFA (9,45 ml), wody (0,25 ml), 1,2-etaneditiolu (0,25 ml) i triizopropylosilanu (0,1 ml), dodać do strzykawki i delikatnie wstrząsać przez 4 godziny.
    2. Zebrać powstały czerwono-brązowy roztwór do probówki Eppendorfa i powoli odparować TFA za pomocą strumienia powietrza.
    3. Dodaj zimny eter dietylowy (~15 ml) do probówki Eppendorf, aby wytrącić 1, który spowoduje delikatne mieszanie. Wyizolować produkt przez odwirowanie (1 g, 5 min). Następnie powtórzyć cykle płukania eterem dietylowym (łącznie ~60 ml) i odwirować, aby uzyskać 1 w postaci czerwonego/brązowego ciała stałego.

2. Charakterystyka i analiza 1

  1. Upewnij się, że tożsamość jest zgodna z połączeniem i składem pokazanym na rysunku 2, używając 1H (16 skanów) i 13C NMR (512 skanów) w deuterowanym metanolu (300 μl) i analizie ESI-MS.
    Spodziewaj się następujących wyników:
    1Widmo H NMR (CD3OD) δ/ppm: 1,407-1,684 (m, 6H), 2,245 (t, 2H), 2,665-3,150 (m, 12H), 4,015 (t, 1H), 4,104 (d, 2H), 4,274 (q, 1H), 4,426 (d, 2H), 4,479 (q, 1H), 4,595 (t, 1H) i widmo 13C NMR (CD3OD) δ/ppm: 24,644 (CH2), 25,472 (CH2), 28,051(CH2), 28,300 (CH2), 35.474 (CH2), 38.698 (CH2), 39.241 (CH2), 39.717 (CH2), 55.340/55.538 (Cp-ring), 60.286 (CH), 61.964 (CH), 62.521/62.821 (Cp-ring), 66.038/66.170 (Cp-ring), 69.153/69.328 (Cp-ring), 71.468/71.593 (Cp-ring), 76.466 (CH), 171.770 (C=O), 175.361 (C=O).
    ESI-MS (m/z): Znaleziono: 639.00 [1+Na]+, Teoretyczny: 639.1 [1+Na]+ i HR-MS (m/z): Znaleziono: 617.2049 [1+H]+ , Teoretyczny: 617.1622 [1+H]+.
  2. Wykonaj HPLC, analizę elementarną, aby potwierdzić skład izolowanego 1,
    Przeprowadzić chromatogramy HPLC przy użyciu kolumny C8 z odwróconymi fazami ze 100% MeOH przy natężeniu przepływu 0,5 ml/min. Uwaga: Czas retencji HPLC wynosił: 3,198-4,674 min.

3. Unieruchomienie 1 na złotej powierzchni

  1. Wytnij złote szkiełka z polimerem na kwadraty o wymiarach ~0,25 w2.
  2. Napełnij zlewkę o pojemności 50 ml roztworem wody DI o stężeniu 1 (~1 mM).
  3. Dodaj złoty szkiełko do zlewki i przykryj szkiełkiem zegarkowym. Pozostawić szkiełko do inkubacji O/N w temperaturze pokojowej bez mieszania.
  4. Wyjmij złote szkiełko z roztworu i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu.
  5. Uzyskaj obrazy skaningowej mikroskopii elektronowej za pomocą skaningowego mikroskopu elektronowego (lub jego odpowiednika) w celu obserwacji unieruchomionych 1.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Forma związana z żywicą związku 1 przedstawiona jest na Rysunku 2. Kowalencyjne przyłączenie komponentu ferrocenowego nadaje kuleczkom żywicy pomarańczowy odcień, który utrzymuje się podczas ciągłego przemywania i świadczy o unieruchomieniu kompleksu zawierającego żelazo, w przeciwieństwie do adsorpcji żelaza przez komponent PEG kuleczki żywicy. Forma wolna od żywicy związku 1 ma kolor identyczny z kuleczkami żywicy. Po usunięciu związku z kuleczek żywicy, czystość i wyd...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Synteza asymetrycznych pochodnych ferrocenu jest trudna w rozwiązaniu. Na przykład próby wyprodukowania 1 w roztworze skutkowały niską wydajnością pożądanego produktu (mniej niż 20%). Podobnie, reakcje z wykorzystaniem kwasu karboksylowego 1'-amino-ferrocenu (bez Fmoc) i biotyny związanej z żywicą dały nierozpuszczalny produkt zgodny z produktem polimeryzowanym opisanym przez Baristic i wsp. i minimalny produkt. 47 Sytuację dodatkowo komplikuje fakt, że ferrocen i jego pochod...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

KG było wspierane przez grant Fundacji R.A. Welch P-1760, TCU Andrews Institute of Mathematics & Science Education (dla KG), TCU Research and Creativity Activity Grant (dla KG) oraz TCU SERC Grant (dla JHS).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Biotyna Żywica NovatagNovaBiochem8550510001
TORVIQ 10 ml Strzykawka strzykawkowa Luer LockFisherNC9299151
piperydynaAcrosP/3520/PB05
test ninhydrynowySigma-Aldrich60017-1ea
Kwas 1'-Fmoc-amino-ferroczyno-1-karboksylowyOmm Scientificna specjalne zamówienie
N,N′ -DiizopropylokarbodimideSigma-AldrichD125407-5G
Fmoc-Cys(Trt)-OHNovabiochem8520080025
kwas trifluorooctowySigma-AldrichT5408
1,2-etanedithiolSigma-Aldrich2930
triizopropylosilanSigma-Aldrich233781
probówki Eppendorf (20 ml)dowolne źródło
metanoldowolne źródłowysuszyć za pomocą sit molekularnych przed użyciem i przechowywać w butelce o pojemności 100 ml dla łatwego użycia
dichlorometandowolne źródłowysuszyć sitami molekularnymi przed użyciem i przechowywać w butelce o pojemności 100 ml dla łatwego użycia
dimetyloformamidz dowolnego źródłaWysuszyć za pomocą sit molekularnych przed użyciem i Przechowywać w butelce o pojemności 100 ml dla łatwego użycia
Odwirujdowolne źródło

Bibliografia

  1. Wang, J. Electrochemical biosensors: towards point-of-care cancer diagnostics. Biosens Bioelectron. 21 (10), 1887-1892 (2006).
  2. Scarborough, J. H., Brusoski, K., Brewer, S., Green, K. N. Solid phase synthesis of ferrocene-biotin bioconjugates and reactivity with avidin. A paradigm for development of electrochemical biosensors. , Texas Christian University. Fort Worth, Texas. (2014).
  3. Zhang, S., Zheng, F., Wu, Z., Shen, G., Yu, R. Highly sensitive electrochemical detection of immunospecies based on combination of Fc label and PPD film/gold nanoparticle amplification. Biosens Bioelectron. 24 (1), 129-135 (2008).
  4. Gobi, K. V., Mizutani, F. Layer-by-layer construction of an active multilayer enzyme electrode applicable for direct amperometric determination of cholesterol. Sensors and Actuators. 80 (3), 272-277 (2001).
  5. Gobi, K. V., Mizutani, F. Amperometric detection of superoxide dismutase at cytochrome c-immobilized electrodes: Xanthine oxidase and ascorbate oxidase incorporated biopolymer membrane for in-vivo analysis. Analytical Sciences. 17 (1), 11-15 (2001).
  6. Gobi, K. V., Sato, Y., Mizutani, F. Mediatorless superoxide dismutase sensors using cytochrome c-modified electrodes: Xanthine oxidase incorporated polyion complex membrane for enhanced activity and in vivo analysis. Electroanalysis. 13 (5), 397-403 (2001).
  7. Shankaran, D. R., Uehara, N., Kato, T. A metal dispersed sol-gel biocomposite amperometric glucose biosensor. Biosensor.., & Bioelectronics. 18 (5-6), 721-728 (2003).
  8. Yamamoto, K., Xu, F., Shi, G. Y., Kato, T. On-line biosensor for detection of glucose, choline and glutamate simultaneously integrated with microseparation system. Journal of Pharmacological Sciences. 91, 211p-211 (2003).
  9. Luppa, P. B., Kaiser, T., Cuilleron, C. Y. Ligand-binding studies of sex hormone-binding globulin with 17alpha-dihydrotestosterone derivatives as ligands using a surface plasmon resonance biosensor. Clinical Chemistry. 47 (6), A9-A9 (2001).
  10. Luppa, P. B., Sokoll, L. J., Chan, D. W. Immunosensors - principles and applications to clinical chemistry. Clinica Chimica Acta. 314 (1-2), 1-26 (2001).
  11. Mallat, E., Barcelo, D., Barzen, C., Gauglitz, G., Abuknesha, R. Immunosensors for pesticide determination in natural waters. Trac-Trends in Analytical Chemistry. 20 (3), 124-132 (2001).
  12. Pemberton, R. M., Hart, J. P., Mottram, T. T. An electrochemical immunosensor for milk progesterone using a continuous flow system. Biosensor.., & Bioelectronics. 16 (9-12), 715-723 (2001).
  13. Pancrazio, J. J., Whelan, J. P., Borkholder, D. A., Ma, W., Stenger, D. A. Development and application of cell-based biosensors. Annals of Biomedical Engineering. 27 (6), 697-711 (1999).
  14. May, K. M. L., Wang, Y., Bachas, L. G., Anderson, K. W. Development of a whole-cell-based biosensor for detecting histamine as a model toxin. Analytical Chemistry. 76 (14), 4156-4161 (2004).
  15. Taylor, C. J., Bain, L. A., Richardson, D. J., Spiro, S., Russell, D. A. Construction of a whole-cell gene reporter for the fluorescent bioassay of nitrate. Analytical Biochemistry. 328 (1), 60-66 (2004).
  16. Philp, J. C., et al. Whole cell immobilised biosensors for toxicity assessment of a wastewater treatment plant treating phenolics-containing waste. Analytica Chimica Acta. 487 (1), 61-74 (2003).
  17. Subrahmanyam, S., Piletsky, S. A., Turner, A. P. F. Application of natural receptors in sensors and assays. Analytical Chemistry. 74 (16), 3942-3951 (2002).
  18. Ryberg, E., et al. Identification and characterisation of a novel splice variant of the human CB1 receptor. Febs Letters. 579 (1), 259-264 (2005).
  19. Cooper, M. A. Advances in membrane receptor screening and analysis. Journal of Molecular Recognition. 17 (4), 286-315 (2004).
  20. Kumbhat, S., et al. A novel receptor-based surface-plasmon-resonance affinity biosensor for highly sensitive and selective detection of dopamine. Chemistry Letters. 35 (6), 678-679 (1246).
  21. Yemini, M., Reches, M., Gazit, E., Rishpon, J. Peptide nanotube-modified electrodes for enzyme-biosensor applications. Analytical Chemistry. 77 (16), 5155-5159 (2005).
  22. Endo, T., Kerman, K., Nagatani, N., Takamura, Y., Tamiya, E. Label-free detection of peptide nucleic acid-DNA hybridization using localized surface plasmon resonance based optical biosensor. Analytical Chemistry. 77 (21), 6976-6984 (2005).
  23. Drummond, T. G., Hill, M. G., Barton, J. K. Electrochemical DNA sensors. Nature Biotechnology. 21 (10), 1192-1199 (2003).
  24. Piunno, P. A. E., Krull, U. J. Trends in the development of nucleic acid biosensors for medical diagnostics. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 381 (5), 1004-1011 (2005).
  25. Dechtrirat, D., et al. Electrochemical displacement sensor based on ferrocene boronic acid tracer and immobilized glycan for saccharide binding proteins and E. coli. Biosensor.., & Bioelectronics. 58, 1-8 (2014).
  26. Lacina, K., et al. Combining ferrocene, thiophene and a boronic acid: a hybrid ligand for reagentless electrochemical sensing of cis-diols. Tetrahedron Letters. 55 (21), 3235-3238 (2014).
  27. Takahashi, S., Anzai, J. Recent Progress in Ferrocene-Modified Thin Films and Nanoparticles for Biosensors. Materials. 6 (12), 5742-5762 (2013).
  28. Liu, L., et al. Amplified voltammetric detection of dopamine using ferrocene-capped gold nanoparticle/streptavidin conjugates. Biosensor.., & Bioelectronics. 41, 730-735 (2013).
  29. Shankaran, D. R., Gobi, K. V. A., Miura, N. Recent advancements in surface plasmon resonance immunosensors for detection of small molecules of biomedical, food and environmental interest. Sensors and Actuators B-Chemical. 121 (1), 158-177 (2007).
  30. Szarka, Z., Kuik, Á, Skoda-Földes, R., Kollár, L. Aminocarbonylation of 1,1′-diiodoferrocene, two-step synthesis of heterodisubstituted ferrocene derivatives via homogeneous catalytic carbonylation/coupling reactions. Journal of Organometallic Chemistry. 689 (17), 2770-2775 (2004).
  31. Niu, H. T., et al. Imidazolium-based macrocycles as multisignaling chemosensors for anions. Dalton Trans. (28), 3694-3700 (2008).
  32. Qing, G. -Y., Sun, T. -L., Wang, F., He, Y. -B., Yang, X. Chromogenic Chemosensors forN-Acetylaspartate Based on Chiral Ferrocene-Bearing Thiourea Derivatives. European Journal of Organic Chemistry. (6), 841-849 (2009).
  33. Romero, T., Caballero, A., Espinosa, A., Tarraga, A., Molina, P. A multiresponsive two-arm ferrocene-based chemosensor molecule for selective detection of mercury. Dalton Trans. (12), 2121-2129 (2009).
  34. Zapata, F., Caballero, A., Espinosa, A., Tarraga, A., Molina, P. A selective redox and chromogenic probe for Hg(II) in aqueous environment based on a ferrocene-azaquinoxaline dyad. Inorg Chem. 48 (24), 11566-11575 (2009).
  35. Alfonso, M., Tarraga, A., Molina, P. Ferrocene-based multichannel molecular chemosensors with high selectivity and sensitivity for Pb(II) and Hg(II) metal cations. Dalton Trans. 39 (37), 8637-8645 (2010).
  36. Zapata, F., Caballero, A., Molina, P., Tarraga, A. A ferrocene-quinoxaline derivative as a highly selective probe for colorimetric and redox sensing of toxic mercury(II) cations. Sensors (Basel). 10 (12), 11311-11321 (2010).
  37. Thakur, A., Sardar, S., Ghosh, S. A highly selective redox, chromogenic, and fluorescent chemosensor for Hg2+ in aqueous solution based on ferrocene-glycine bioconjugates). Inorg Chem. 50 (15), 7066-7073 (2011).
  38. Sathyaraj, G., Muthamilselvan, D., Kiruthika, M., Weyhermüller, T., Nair, B. U. Ferrocene conjugated imidazolephenols as multichannel ditopic chemosensor for biologically active cations and anions. Journal of Organometallic Chemistry. 716, 150-158 (2012).
  39. Kwon, S. J., Kim, E., Yang, H., Kwak, J. An electrochemical immunosensor using ferrocenyl-tethered dendrimer. Analyst. 131 (3), 402-406 (2006).
  40. Pinto, A., Hoffmanns, U., Ott, M., Fricker, G., Metzler-Nolte, N. Modification with Organometallic Compounds Improves Crossing of the Blood-Brain Barrier of [Leu(5)]-Enkephalin Derivatives in an In Vitro Model System. Chembiochem. 10 (11), 1852-1860 (2009).
  41. Barisic, L., et al. The first ferrocene analogues of muramyldipeptide. Carbohydr Res. 346 (5), 678-684 (2011).
  42. Brusoski, K., Green, K. N. Novel click derivatives of ferrocene and their applications toward construction of electrochemical biosensors. Abstracts of Papers, 243rd ACS National Meetin.., & Exposition. 2012 Mar 25-29, San Diego, CA, United States, , BIOL-28. (2012).
  43. Bucher, C., Devillers, C. H., Moutet, J. -C., Royal, G., Saint-Aman, E. Anion recognition and redox sensing by a metalloporphyrin–ferrocene–alkylammonium conjugate. New Journal of Chemistry. 28, 1584-1589 (2004).
  44. Tanaka, S., Yoshida, K., Kuramitz, H., Sugawara, K., Nakamura, H. Electrochemical detection of biotin using an interaction between avidin and biotin labeled with ferrocene at a perfluorosulfonated ionomer modified electrode. Analytical Sciences. 15 (9), 863-866 (1999).
  45. Real-Fernandez, F., et al. Ferrocenyl glycopeptides as electrochemical probes to detect autoantibodies in multiple sclerosis patients' sera. Biopolymers. 90 (4), 488-495 (2008).
  46. Husken, N., Gasser, G., Koster, S. D., Metzler-Nolte, N. Four-potential' ferrocene labeling of PNA oligomers via click chemistry. Bioconjug Chem. 20 (8), 1578-1586 (2009).
  47. Barisic, L. Croatica Chemica Acta. 75, 199-210 (2002).
  48. Kirin, S. I., Noor, F., Metzler-Nolte, N. Manual Solid-Phase Peptide Synthesis of Metallocene–Peptide Bioconjugates. Journal of Chemical Education. 84 (1), 108-111 (2007).
  49. Barisic, L., et al. Helically chiral ferrocene peptides containing 1 '-aminoferrocene-1-carboxylic acid subunits as turn inducers. Chemistry-a European Journal. 12 (19), 4965-4980 (2006).
  50. Mahmoud, K., Long, Y. -T., Schatte, G., Kraatz, H. -B. Electronic communication through the ureylene bridge: spectroscopy, structure and electrochemistry of dimethyl 1′,1′-ureylenedi(1-ferrocenecarboxylate). Journal of Organometallic Chemistry. 689 (13), 2250-2255 (2004).
  51. Mahmoud, K. A., Kraatz, H. B. Synthesis and electrochemical investigation of oligomeric ferrocene amides: Towards ferrocene polyamides. Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials. 16 (3), 201-210 (2006).
  52. Mahmoud, K. A., Kraatz, H. B. A bioorganometallic approach for the electrochemical detection of proteins: A study on the interaction of ferrocene-peptide conjugates with papain in solution and on au surfaces. Chemistry-a European Journal. 13 (20), 5885-5895 (2007).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Konjugat ferrocenu z biotynsynteza biokonjugat wunieruchomienie na powierzchni z otasprz ganie peptyd wp cznienie ywicyetapy deprotekcjiizolacja produktuspektroskopia NMRskaningowa mikroskopia elektronowa
Metodologia syntezy asymetrycznych układów biosprzężonych pochodzących z ferrocenu za pomocą metodologii opartej na żywicy w fazie stałej
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.