Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Pomiar odporności Caenorhabditis elegans na stres oksydacyjny w 96-dołkowych płytkach mikromiareczkowych

15.9K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/52746

⸱

9 maja 2015

 , 
1Goodman Cancer Research Center, McGill University, 2Department of Biochemistry, McGill University

W tym artykule

Informacja o sprostowaniu

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Podsumowanie

C. elegans jest atrakcyjnym organizmem modelowym do badania szlaków transdukcji sygnałów zaangażowanych w odporność na stres oksydacyjny. Tutaj przedstawiamy protokół pomiaru odporności zwierząt C. elegans na stres oksydacyjny w fazie ciekłej, przy użyciu kilku środków utleniających w 96-dołkowych płytkach.

Streszczenie

Stres oksydacyjny, który jest wynikiem braku równowagi między produkcją a detoksykacją reaktywnych form tlenu, jest głównym czynnikiem przyczyniającym się do przewlekłych zaburzeń u ludzi, w tym chorób sercowo-naczyniowych i neurodegeneracyjnych, cukrzycy, starzenia się i raka. Dlatego ważne jest, aby badać stres oksydacyjny nie tylko w układach komórkowych, ale także na całych organizmach. C. elegans jest atrakcyjnym organizmem modelowym do badania genetyki szlaków transdukcji sygnału stresu oksydacyjnego, które są wysoce konserwatywne ewolucyjnie.

Tutaj udostępniamy protokół do pomiaru odporności na stres oksydacyjny u C. elegans w cieczy. Krótko mówiąc, odczynniki indukujące ROS, takie jak parakwat (PQ) iH2O2są rozpuszczane w buforze M9, a roztwory są podawane w dostojach 96-dołkowej płytki mikromiareczkowej. Zsynchronizowane L4 / młode dorosłe zwierzęta C. elegans są przenoszone do studni (5-8 zwierząt / studzienkę) i przeżywalność jest mierzona co godzinę, aż do śmierci większości robaków. Podczas wykonywania testu odporności na stres oksydacyjny przy użyciu niskiego stężenia stresorów w płytkach, starzenie się może wpływać na zachowanie zwierząt w przypadku stresu oksydacyjnego, co może prowadzić do nieprawidłowej interpretacji danych. Jednak w teście opisanym w niniejszym dokumencie jest mało prawdopodobne, aby problem ten wystąpił, ponieważ wykorzystuje się tylko L4/młode dorosłe zwierzęta. Co więcej, protokół ten jest niedrogi, a wyniki uzyskuje się w ciągu jednego dnia, co czyni tę technikę atrakcyjną dla badań genetycznych. Ogólnie rzecz biorąc, pomoże to zrozumieć szlaki transdukcji sygnału stresu oksydacyjnego, co może przełożyć się na lepszą charakterystykę zaburzeń u ludzi związanych ze stresem oksydacyjnym.

Wprowadzenie

U eukariontów fosforylacja oksydacyjna zachodząca w łańcuchu transportu elektronów w mitochondriach jest głównym motorem produkcji energii w postaci ATP. Reaktywne formy tlenu (ROS) są naturalnym produktem ubocznym tego procesu. Pomimo ich ważnej roli jako cząsteczek sygnałowych, nadmierne ROS mogą prowadzić do uszkodzenia DNA, karbonylacji białek i utleniania lipidów. Brak równowagi między produkcją ROS a detoksykacją powoduje stres oksydacyjny, który prowadzi do wyczerpania energii, uszkodzenia komórek i wyzwala śmierć komórki1,2. Stres oksydacyjny przyczynia się do starzenia się i rozwoju wielu chorób zagrażających życiu, w tym nowotworów, cukrzycy, chorób sercowo-naczyniowych i neurodegeneracyjnych3-9.

Komórki rozwinęły enzymatyczne i nieenzymatyczne strategie obronne, aby utrzymać prawidłowy poziom ROS i chronić swoje składniki przed uszkodzeniem oksydacyjnym1,2. Enzymy dysmutazy ponadtlenkowej (SOD) działają najpierw w celu przekształcenia ponadtlenku wH2O2, który jest następnie przekształcany w wodę przez enzymy katalazy lub peroksydazy. Nieenzymatyczne strategie obronne obejmują głównie cząsteczki, które reagują szybciej z ROS w porównaniu z makrocząsteczkami komórkowymi, chroniąc niezbędne składniki komórkowe. Pomimo ochronnej roli enzymów detoksykujących ROS, niektóre cząsteczki ROS wymykają się mechanizmom obrony antyoksydacyjnej i prowadzą do uszkodzeń oksydacyjnych. Wykrywanie, naprawa i degradacja uszkodzonych składników komórkowych są podstawowymi strategiami obronnymi podczas stresu oksydacyjnego1,2.

Szlaki sygnałowe związane z odpornością na stres, a w szczególności stres oksydacyjny, są wysoce ewolucyjnie konserwatywne10,11. W przeciwieństwie do eksperymentów z hodowlami komórkowymi, w których warunki organizmowe są tylko częściowo odtwarzane, badanie stresu oksydacyjnego w organizmach modelowych12,13 ma ogromne znaczenie. C. elegans to wolno żyjący nicień, który można łatwo i niedrogo hodować na trawniku bakteryjnym na podłożu agarowym. Jest niewielkich rozmiarów (około 1 mm długości) i zwykle rośnie jako samozapładniający się hermafrodyt, co ułatwia manipulacje genetyczne. Ma szybki cykl życiowy i wysoką zdolność reprodukcyjną, produkując około 300 potomstwa na pokolenie, co czyni go potężnym narzędziem do wykonywania badań genetycznych na dużą skalę14. Genom C. elegans jest w pełni zsekwencjonowany i przewiduje się, że 40-50% genów będzie homologami genów związanych z chorobami ludzkimi15-18. Knockdown genów będących przedmiotem zainteresowania za pomocą RNAi jest szybki i łatwy u C. elegans. Regulację genów w dół można osiągnąć poprzez karmienie zwierząt bakteriami E. coli, które zawierają plazmid wyrażający dwuniciowy RNA, który celuje w mRNA będące przedmiotem zainteresowania19. Dlatego określenie funkcji genów za pomocą wielkoskalowych badań przesiewowych RNAi ma ogromny wpływ na zrozumienie chorób człowieka, w tym nowotworów 20,21.

Badania odporności na stres oksydacyjny u C. elegans doprowadziły do zidentyfikowania zachowanych mechanizmów odporności na stres oksydacyjny13,22. Niektóre zidentyfikowane szlaki są powszechnymi szlakami, które modulują długowieczność i odporność na inne stresy, takie jak niedotlenienie, ciepło i stres osmotyczny. Szlaki te obejmują sygnalizację insuliny, sygnalizację TOR i autofagię. Inne kluczowe szlaki obejmują detoksykację ROS, takich jak enzymy dysmutazy ponadtlenkowej i enzymy katalazy, lub naprawę uszkodzeń, takich jak szok cieplny i białka opiekuńcze11,13,22.

Ten protokół opisuje, jak określić odporność na stres oksydacyjny C. elegans w cieczy. Użyliśmy flcn-1 (ok975) i zwierząt typu dzikiego, aby zademonstrować protokół, ponieważ wcześniej wykazaliśmy zwiększoną odporność na stres oksydacyjny po utracie flcn-1 (ok975) u C. elegans23. Wykazaliśmy również, że ta zwiększona odporność zależy od AMPK i autofagii, osi sygnalizacyjnej, która poprawia bioenergetykę komórkową i promuje odporność na stres 23. PQ jest stresorem oksydacyjnym, który zakłóca łańcuch transportu elektronów w celu wytworzenia reaktywnych form tlenu24. Ten sam test można dostosować i zastosować inne źródła ROS lub związki wytwarzające ROS, takie jakH2O2i rotenon. Podobne testy opracowano na płytkach, na których stosuje się niskie stężenia PQ25,26. Zaletą tego testu jest to, że jest bardzo szybki, a wyniki można uzyskać w ciągu jednego dnia. Ponadto całkowita objętość cieczy użytej do przeprowadzenia testu odporności na stres oksydacyjny w 96-dołkowych płytkach jest niska w porównaniu z objętością użytą do przygotowania płytek zawierających PQ. W związku z tym ilość PQ użytego w teście ciekłym jest niska, co sprawia, że test jest niedrogi i ogranicza produkcję odpadów toksycznych. Jednak ograniczenia tego testu w porównaniu z testami na płytkach obejmują brak pokarmu w teście ciekłym oraz niższe stężenie tlenu w cieczy w porównaniu z powietrzem. Są to ważne czynniki, które w niektórych przypadkach mogą mieć wpływ na wyniki. Dlatego zaleca się potwierdzenie odtwarzalności przy użyciu innych metod odporności na stres oksydacyjny w celu wsparcia wyników uzyskanych w tym teście.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Przygotowanie odczynników

  1. Przygotowanie pożywki do wzrostu C. elegans (w tym przypadku zwierząt typu dzikiego i zwierząt z mutacją flcn-1(ok975)).
    1. Przygotuj zmodyfikowaną suchą mieszankę Bacto-peptone (MYOB) firmy Youngren's Only zawierającą 5,5 g Tris HCl, 2,4 g zasady Tris, 31 g baktopetonu, 20 g NaCl i 0,08 g cholesterolu. Dobrze wymieszać z potrząsaniem.
      UWAGA: Ta mieszanka wystarcza do przygotowania 10 L pożywki MYOB.
      UWAGA: Zamiast płytek MYOB 27 można użyć normalnych płytek wzrostu (NGM)27. Jednak ten sam typ płytek powinien być używany do prawidłowych porównań między szczepami i między niezależnymi powtórzeniami. W tym protokole zastosowaliśmy wyłącznie płytki MYOB.
    2. Przygotować 1 l pożywki MYOB, dodając 6 g suchej mieszanki MYOB, 17 g agaru i uzupełnić do 1 l roztworemH2Oi sterylizować w autoklawie przez 45 minut w temperaturze 122 °C. Wlać płytki i pozostawić do wyschnięcia w temperaturze pokojowej przez 2 dni.
    3. Stosując sterylną technikę, zaszczepić 100 ml kultury pożywki bulionowej LB bakteriami E. coli OP50 i wyhodować O/N w temperaturze 37 °C.
    4. Płytki nasienne MYOB z bakteriami E. coli OP50. Pozwól mu rosnąć w temperaturze pokojowej przez 48 godzin.
  2. Przygotowanie do regulacji w dół genów za pomocą RNAi
    1. Przygotuj płytki do karmienia RNAi MYOB. Postępuj jak w krokach 1.1.1 i 1.1.2. Po autoklawowaniu pozostawić pożywkę do ostygnięcia do około 55 °C i dodać 1 ml 1 M izopropylo β-D-1-tiogalaktopiranozydu (IPTG) i 1 ml 100 mM ampicyliny.
    2. Bakterie Streak E. coli HT115 przekształcone plazmidem, który wyraża kontrolne EV lub RNAi specyficzne dla flcn-1 na płytkach agarowych ampicyliny (50 μg / ml) / tetracykliny (15 μg / ml). Uprawiaj kulturę O/N w temperaturze 37 °C.
    3. Zebrać kolonie i zaszczepić bakterie E. coli HT115 przekształcone plazmidem, który wyraża kontrolne EV lub RNAi specyficzne dla flcn-1 i hodować kulturę w pożywce LB/Ampicillin (50 μg/ml) i O/N w temperaturze 37 °C.
    4. Płytki nasienne z bakteriami E. coli HT115 EV lub bakteriami HT115 flcn-1 RNAi.
      UWAGA: Przechowuj talerze przez 48 godzin w temperaturze RT przed użyciem. Jeśli knockdown RNAi przez karmienie jest skuteczny, należy zastosować inne metody dostarczania ds-RNA 28.
  3. Wywoływanie stresu oksydacyjnego za pomocą parakwatu (PQ):
    1. Przygotować bufor M9 mieszając 3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4, 5 g NaCl i 0,25 g MgSO4·7 H2O. Uzupełnić do 1 l wodą destylowaną. Roztwór w autoklawie przez 45 minut w temperaturze 122 °C i przechowywać butelki w temperaturze pokojowej.
    2. W dniu wykonania testu należy przygotować roztwór zawierający M9/PQ. Do tego protokołu należy użyć 100 mM PQ (0,1028 g PQ rozpuszczone w 4 ml buforu M9 wypełnia całe 96-dołkowe płytki 40 μl M9/PQ na studzienkę).
      UWAGA: PQ jest niebezpiecznym i wysoce toksycznym związkiem. Obchodzić się zgodnie z odpowiednimi wytycznymi.
      UWAGA: Przy pierwszym uruchomieniu nowego szczepu lub nowego schorzenia zaleca się oznaczenie przeżycia przy rosnących stężeniach PQ w celu określenia najlepszego stężenia do użycia w celu zabicia zwierząt w ciągu 7-10 godzin.

2. Przygotowanie populacji L4 zsynchronizowanej pod względem wieku

  1. Przenieś 20 grawitacyjnych dorosłych hermafrodytów na świeżą płytkę MYOB wysianą bakteriami E. coli OP50. Przygotuj kilka płytek w zależności od liczby robaków potrzebnych podczas testu.
  2. Pozwól im złożyć jaja przez 6 godzin, a następnie za pomocą platynowego drucianego kilofa usuń matki. Sprawdź płytki pod mikroskopem, aby ocenić liczbę złożonych jaj.
  3. Pozostawić jaja do wyklucia się i wzrostu w temperaturze 20 °C przez 48 godzin. W tym czasie zwierzęta znajdują się w późnym stadium L4 / młodego dorosłego osobnika. Wybrać zwierzęta w tym samym stadium i przenieść do studzienek zawierających roztwór PQ.
    UWAGA: Ponieważ 48-godzinna inkubacja dotyczy tylko mutantów, które rosną podobnie do zwierząt typu dzikiego, ważne jest, aby monitorować tempo rozwoju nowo przetestowanych mutantów, aby upewnić się, że jest ono zgodne z tempem rozwoju typu dzikiego, w przeciwnym razie należy zastosować inne ramy czasowe.
  4. Alternatywnie użyj technik synchronizacji. Wygeneruj zsynchronizowaną populację larw robaków L1 za pomocą roztworu podchlorynu (25 ml wody, 125 ml 5,25% podchlorynu sodu, 50 ml 4 M NaOH; owinąć butelkę folią aluminiową w celu odizolowania od światła). Jednak w przypadku tego testu nie jest to zalecane, ponieważ intensywne bielenie może wpłynąć na zachowanie zwierząt podczas testu.
    UWAGA: Z roztworem podchlorynu należy obchodzić się zgodnie z wytycznymi.
    UWAGA: W przypadku stosowania RNAi do obniżania poziomu genu będącego przedmiotem zainteresowania, należy zsynchronizować hermafrodyty zgodnie z opisem w sekcji 2, z wyjątkiem przeniesienia matek na płytki RNAi wysiane specyficznymi bakteriami RNAi. Gdy knockdown z RNAi jest słaby, zaleca się karmienie przez wiele pokoleń.

3. Przeprowadzanie testu odporności na stres oksydacyjny

  1. Odpipetować 40 μl 100 mM roztworu PQ (przygotowanego na świeżo) do każdego dołka na płytce 96-dołkowej. Użyj co najmniej 12 studzienek jako powtórzeń każdego stanu (leczenie, mutant itp.). Za pomocą platynowego kilofa drucianego przenieś 5-8 larw L4 do każdej studzienki, wskazując czas rozpoczęcia i czas zakończenia.
  2. Uruchamiając inny warunek, zanotuj czas rozpoczęcia i czas zakończenia. Umieścić płytkę w temperaturze 20 °C w czasie inkubacji między przeniesieniem robaków a nacięciem martwych zwierząt godzinę później od czasu rozpoczęcia.
  3. Za pomocą mikroskopu preparacyjnego policz przeżycie co godzinę. Delikatnie potrząśnij płytką przed rozpoczęciem liczenia. Wskaż robaki, które się nie poruszają, nawet po zauważeniu światła o dużej intensywności, jako martwe zwierzęta. Należy również podać liczbę żyjących zwierząt.
    UWAGA: Patrząc na kształt robaka, ogony i ruchy głowy w dużym powiększeniu, pomóż odróżnić martwe robaki od żywych.
  4. Powtarzaj ten krok co godzinę, aż większość robaków umrze.

4. Określanie procentu przeżycia w każdym punkcie czasowym

  1. Oblicz całkowitą liczbę zwierząt na warunek, dodając całkowitą liczbę zwierząt przeniesionych do każdej studzienki. Zignoruj zwierzęta, które są uszkodzone lub zabite podczas przenoszenia.
  2. Dla każdego punktu czasowego oblicz całkowitą liczbę martwych zwierząt na warunek (suma martwych zwierząt w 12 dołkach). Dla każdego punktu czasowego oblicz procent śmierci (liczba martwych zwierząt podzielona przez całkowitą liczbę zwierząt i pomnożona przez 100) oraz procent przeżycia (100 minus procent śmierci).
  3. Powtórz ten test co najmniej 3 niezależne razy.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Porównanie zwierząt typu dzikiego C. elegans z mutantami flcn-1(ok975)

W tym doświadczeniu zastosowano 100 mM PQ, aby określić odporność zwierząt C. elegans typu dzikiego w porównaniu do flcn-1(ok975), u których wykazano odporność na stres oksydacyjny, ciepło oraz anoksję23. Po 4 h traktowania przeżywalność typu dzikiego wyniosła 48,3%, w porównaniu do 77,8% przeżywalności zwierząt flcn-1(ok975). Zgodnie z oczekiwaniami, zwierzęta mutanty...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

C. elegans jest atrakcyjnym organizmem modelowym do badania genetycznej odporności na stres oksydacyjny in vivo, ponieważ może być łatwo hodowany i szybko prowadzi do dużej liczby genetycznie identycznego potomstwa. Wcześniej opisano wiele metod pomiaru odporności na stres oksydacyjny, które opierają się na suplementacji płytek hodowlanych różnymi źródłami ROS, takimi jak PQ, rotenon,H2O2i juglon25,26,29-32. Tutaj opisujemy protokół, który mierzy odporność na stres oksyd...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Podziękowania

Uznajemy Centrum Genetyki Caenorhabditis dla szczepów C. elegans. Wsparcia finansowego udzielił Terry Fox Research Institute. Wyrażamy również uznanie dla wsparcia udzielonego E.P. w ramach stypendium im. Rolande'a i Marcela Gosselinów oraz grantu szkoleniowego CIHR/FRSQ w zakresie badań nad rakiem FRN53888 w ramach McGill Integrated Cancer Research Training Program.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Agar klasy bakteriologicznejMulticell800-010-LG
Pepton bakteriologicznyOxoidLP0037
Chlorek sodu klasy biotechnologicznejBioshop7647-14-5
CholesterolSigmaC8503-25G
UltraPure tris chlorowodorekInvitrogen15506-017
Tris aminometanBio Basic Canada Inc77-86-1
IPTGSanta Cruz Biotechnologysc-202185A
AmpicillinBioshop69-52-3
Ekstrakt drożdżowyBio Basic Inc.8013-01-2
Dichlorek wioligogenu metylu hydratAldrich chemia856177-1G
Petriego 60 x15 mmFisherFB0875713A
Pipet 10 mlFisher1367520
Fosforan potasu jednozasadowyG-BiosciencesRC-084
Siarczan magnezu siedmiowodnySigmaM-5921
Fosforan sodu dwuzasadowyBioshop7558-79-4
Discovery v8 stereoskopowy mikroskop
96-dołkowa przezroczysta płytka
flcn-1 źródło RNAiBiblioteka
szalka zeiss do mikromiareczkowania Ahringer

Bibliografia

  1. Schieber, M., Chandel, N. S. ROS function in redox signaling and oxidative stress. Curr Biol. 24, R453-R462 (2014).
  2. Alfadda, A. A., Sallam, R. M. Reactive oxygen species in health and disease. J Biomed Biotechnol. 2012, 936486(2012).
  3. Finkel, T., Holbrook, N. J. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing. Nature. 408, 239-247 (2000).
  4. Di Carlo, M., Giacomazza, D., Picone, P., Nuzzo, D., San Biagio, P. L. Are oxidative stress and mitochondrial dysfunction the key players in the neurodegenerative diseases. Free Radic Res. 46, 1327-1338 (2012).
  5. Gandhi, S., Abramov, A. Y. Mechanism of oxidative stress in neurodegeneration. Oxid Med Cell Longev. 2012, 428010(2012).
  6. Trushina, E., McMurray, C. T. Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in neurodegenerative diseases. Neuroscience. 145, 1233-1248 (2007).
  7. Touyz, R. M., Briones, A. M. Reactive oxygen species and vascular biology: implications in human hypertension. Hypertens Res. 34, 5-14 (2011).
  8. Gorrini, C., Harris, I. S., Mak, T. W. Modulation of oxidative stress as an anticancer strategy. Nat Rev Drug Discov. 12, 931-947 (2013).
  9. Sosa, V., et al. Oxidative stress and cancer: an overview. Ageing research reviews. 12, 376-390 (2013).
  10. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. Reactive Oxygen Species and Aging in Caenorhabditis elegans: Causal or Casual Relationship. Antioxid Redox Signal. 13, 1911-1953 (2010).
  11. Baumeister, R., Schaffitzel, E., Hertweck, M. Endocrine signaling in Caenorhabditis elegans controls stress response and longevity. J Endocrinol. 190, 191-202 (2006).
  12. Markaki, M., Tavernarakis, N. Modeling human diseases in Caenorhabditis elegans. Biotechnol J. 5, 1261-1276 (2010).
  13. Rodriguez, M., Snoek, L. B., De Bono, M., Kammenga, J. E. Worms under stress: C. elegans stress response and its relevance to complex human disease and aging. Trends Genet. 29, 367-374 (2013).
  14. Hope, I. A. Practical approach series. , Oxford University Press. 282(1999).
  15. C. elegans Sequencing Consortium. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282, 2012-2018 (1998).
  16. Ahringer, J. Turn to the worm! Current opinion in genetics & development. 7, 410-415 (1997).
  17. Wheelan, S. J., Boguski, M. S., Duret, L., Makalowski, W. Human and nematode orthologs--lessons from the analysis of 1800 human genes and the proteome of Caenorhabditis elegans. Gene. 238, 163-170 (1999).
  18. Culetto, E., Sattelle, D. B. A role for Caenorhabditis elegans in understanding the function and interactions of human disease genes. Hum Mol Genet. 9, 869-877 (2000).
  19. Fire, A., et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
  20. Lamitina, T. Functional genomic approaches in C. elegans. Methods Mol Biol. 351, 127-138 (2006).
  21. Poulin, G., Nandakumar, R., Ahringer, J. Genome-wide RNAi screens in Caenorhabditis elegans: impact on cancer research. Oncogene. 23, 8340-8345 (2004).
  22. Moreno-Arriola, E., et al. Caenorhabditis elegans: A Useful Model for Studying Metabolic Disorders in Which Oxidative Stress Is a Contributing Factor. Oxid Med Cell Longev. , 705253(2014).
  23. Possik, E., et al. Folliculin regulates ampk-dependent autophagy and metabolic stress survival. PLoS Genet. 10, e1004273(2014).
  24. Fukushima, T., Tanaka, K., Lim, H., Moriyama, M. Mechanism of cytotoxicity of paraquat. Environ Health Prev Med. 7, 89-94 (2002).
  25. Van Raamsdonk, J. M., Hekimi, S. Superoxide dismutase is dispensable for normal animal lifespan. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 5785-5790 (2012).
  26. Schulz, T. J., et al. Glucose restriction extends Caenorhabditis elegans life span by inducing mitochondrial respiration and increasing oxidative stress. Cell Metab. 6, 280-293 (2007).
  27. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77, 71-94 (1974).
  28. Timmons, L. Delivery methods for RNA interference in. C. elegans. Methods Mol Biol. 351, 119-125 (2006).
  29. Wang, B. Y., et al. Caenorhabditis elegans Eyes Absent Ortholog EYA-1 Is Required for Stress Resistance. Biochemistry (Mosc). 79, 653-662 (2014).
  30. Paz-Gomez, D., Villanueva-Chimal, E., Navarro, R. E. The DEAD Box RNA helicase VBH-1 is a new player in the stress response in C. elegans. PLoS One. 9, 97924(2014).
  31. Ward, J. D., et al. Defects in the C. elegans acyl-CoA synthase, acs-3, and nuclear hormone receptor, nhr-25, cause sensitivity to distinct, but overlapping stresses. PLoS One. 9, 92552(2014).
  32. Staab, T. A., Evgrafov, O., Knowles, J. A., Sieburth, D. Regulation of synaptic nlg-1/neuroligin abundance by the skn-1/Nrf stress response pathway protects against oxidative stress. PLoS Genet. 10, e1004100(2014).
  33. Greer, E. L., et al. An AMPK-FOXO pathway mediates longevity induced by a novel method of dietary restriction in. C. elegans. Curr Biol. 17, 1646-1656 (2007).
  34. Allen, E., Walters, I. B., Hanahan, D. Brivanib, a dual FGF/VEGF inhibitor, is active both first and second line against mouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance to VEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, 5299-5310 (2011).
  35. Apfeld, J., O'Connor, G., McDonagh, T., DiStefano, P. S., Curtis, R. The AMP-activated protein kinase AAK-2 links energy levels and insulin-like signals to lifespan in C. elegans. Genes Dev. 18, 3004-3009 (2004).
  36. Lee, H., et al. The Caenorhabditis elegans AMP-activated protein kinase AAK-2 is phosphorylated by LKB1 and is required for resistance to oxidative stress and for normal motility and foraging behavior. J Biol Chem. 283, 14988-14993 (2008).
  37. Honda, Y., Honda, S. The daf-2 gene network for longevity regulates oxidative stress resistance and Mn-superoxide dismutase gene expression in Caenorhabditis elegans. FASEB J. 13, 1385-1393 (1999).
  38. Restif, C., Metaxas, D. Tracking the swimming motions of C. elegans worms with applications in aging studies. Med Image Comput Comput Assist Interv. 11, 35-42 (2008).
  39. Buckingham, S. D., Sattelle, D. B. Fast, automated measurement of nematode swimming (thrashing) without morphometry. BMC Neurosci. 10, 84(2009).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Sprostowanie


Formal Correction: Erratum: Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates
Posted by JoVE Editors on 1/01/1970. Citeable Link.

A reference was corrected in the publication of Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates. There was an error with reference 34 in the Citations section. It has been updated from:

Allen, E., Walters, I.B., Hanahan, D. Brivanib a dual FGF/VEGF inhibitor,is active both first and second line againstmouse pancreatic neuroendocrine tumors developing adaptive/evasive resistance toVEGF inhibition. Clin Cancer Res. 17, (16) 5299-310 (2011).

to:

Allen, A. T., Maher, K. N., Wani, K. A., Betts, K. E., & Chase, D. L. Coexpressed D1- and D2-like dopamine receptors antagonistically modulate acetylcholine release in Caenorhabditis elegans. Genetics. 188, 579-590 (2011).

Tagi

96-dołkowa płytka mikrotytrującatraktowanie parakwatemtest przeżywalnościzsynchronizowane młode dorosłe osobniki w stadium L4stereomikroskopbufor M9interferencja RNAprzesiewy genetyczne
Pomiar odporności Caenorhabditis elegans na stres oksydacyjny w 96-dołkowych płytkach mikromiareczkowych
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.