Wszyscy uczestnicy biorący udział w eksperymentach przeszli procedury świadomej zgody zatwierdzone przez Radę Przeglądu Instytucjonalnego (IRB) Uniwersytetu West Virginia.
1. Ogólna charakterystyka systemu, projekt i ogólne zadanie eksperymentalne
Uwaga: Kompletna konfiguracja składa się z następujących głównych komponentów: sprzętu EMG i powiązanego sprzętu do cyfrowej akwizycji danych (DAQ); systemu przechwytywania ruchu (ten protokół wykorzystuje aktywny system LED); jednostki TMS z cewką w kształcie ósemki i sprzętem do lokalizacji stereotaksycznej; zestawu VR wraz z powiązanym komputerem i oprogramowaniem oraz niestandardowego obwodu synchronizacji. Rysunek 1 schematycznie przedstawia połączenia między komponentami protokołu.
- Podłączenie komponentów systemu
- Podłącz przedwzmacniacz EMG do wzmacniacza głównego.
- Podłącz wyjście wzmacniacza EMG do bloku wejściowego sprzętu rejestracyjnego DAQ za pomocą złączy BNC lub podobnych.
- Podłącz sprzęt rejestracyjny DAQ do dedykowanego komputera, który będzie uruchamiał skrypt akwizycji danych (plik uzupełniający).
- Podłącz wyjście równoległe komputera sterującego VR do jednostki dedykowanego układu elektronicznego (szczegóły w następnej sekcji).
- Podłącz wyjścia synchronizacji i wyzwalania przechwytywania ruchu (motion capture) z dedykowanego układu do bloku rejestracyjnego DAQ obok połączeń sygnału EMG.
- Rozdziel sygnał wyzwalający motion capture i podłącz go do portu „Analog Input Start” w sprzęcie EMG DAQ oraz do złącza wyzwalającego w komputerze sterującym sprzętem do przechwytywania ruchu.
Uwaga: Różnica czasowa między początkami poszczególnych strumieni akwizycji danych dla opisanego sprzętu (motion capture i EMG) może wynosić od 160-190 msec. Ta różnica czasowa była podstawą do zaprojektowania układu synchronizacji opisanego w niniejszym protokole i prawdopodobnie wynika z różnic programowych i sprzętowych między tymi dwoma systemami.
- Podłącz port wyzwalający TMS w jednostce dedykowanego układu do wejścia wyzwalającego BNC w jednostce sterującej TMS.
- Ustanów łączność sieciową między komputerami VR i motion capture, korzystając z oprogramowania dostarczonego przez producenta i fizycznych połączeń sieciowych.
- Podłącz gogle VR do komputera VR i upewnij się, że działają one z wszelkimi skryptami/programami wyświetlającymi środowiska wirtualne uczestnikom.

Rycina 1: Połączenia całego układu. Ten schemat przedstawia ogólne połączenia między elementami naszego systemu. Obwód synchronizacji został opisany szczegółowo w innej części tekstu. Niebieska linia odpowiada sygnałowi, który uruchamia zarówno strumienie danych z przechwytywania ruchu, jak i EMG. Zdarzenie to jest źródłem opóźnienia czasowego wynoszącego do 190 msec przy użyciu sprzętu opisanego w niniejszym protokole. Czerwona linia odpowiada zdarzeniu synchronizacji zainicjowanemu przez VR, które jest jednocześnie rejestrowane przez systemy przechwytywania ruchu i EMG, a następnie wykorzystywane do wyrównania czasowego odpowiednich strumieni danych. Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.
2. Ogólne szczegóły integracji i synchronizacji systemu
Uwaga: Synchronizacja oddzielnych systemów akwizycji danych w niniejszym protokole ( przechwytywanie ruchu i EMG) jest realizowana za pomocą sygnału zdarzenia wspólnego dla wszystkich strumieni rejestracji. Dzięki zastosowaniu wspólnego zdarzenia wszystkie sygnały mogą zostać wyrównane czasowo po zebraniu danych, aby zminimalizować rozbieżności w zapisie w czasie rzeczywistym (wynoszące powyżej 190 msec przy użyciu sprzętu opisanego w tym protokole). W niniejszym protokole sygnał wspólny pochodzi z systemu VR jako sygnał portu równoległego. Sygnał wspólny jest kierowany do obwodu, który umożliwia synchronizację oddzielnych strumieni danych poprzez bezpośrednią rejestrację wraz z sygnałami EMG oraz jednoczesne wygaszenie diody LED systemu przechwytywania ruchu. Obwód ten został skonstruowany przy użyciu podstawowych narzędzi i technik budowy komponentów elektronicznych, podobnie jak obwody opisane w innych źródłach9.
- Projekt, układ i konstrukcja obwodu synchronizacji
- Zidentyfikuj wszelkie analogowe mechanizmy wyzwalania oparte na standardzie TTL w jednostkach sterujących urządzeniami (np. TMS, systemy motion capture) i zapoznaj się z wymaganiami dotyczącymi wyzwalania, takimi jak kierunek impulsu TTL (dodatni/ujemny) oraz amplituda. Analogowe mechanizmy wyzwalania często posiadają wspólne współosiowe złącza „BNC”, co ułatwia łączenie komponentów.
- Dodaj do systemu motion capture dodatnią diodę LED, która będzie służyć do synchronizacji sygnału; poprowadź przewody diody LED przez obwód synchronizacji (Rysunek 3).
- Określ parametry komponentów elektrycznych (t.j. rezystancję, pojemność) niezbędne do wyłączenia synchronizującej diody LED na określony czas. Oblicz czas, przez który dioda synchronizacyjna w obwodzie pozostaje wyłączona, korzystając z równania: t = 1,1*R1*C1. Sugeruje się, aby czas ten był krótszy niż średni czas trwania ruchu eksperymentalnego. Na przykład aktualnie opisywany eksperyment wymagał rezystora i kondensatora o wartościach około jednego megaoma i jednego mikrofara-da, odpowiednio.
- Użyj lutownicy, aby przymocować komponenty elektryczne do drukowanej płytki prototypowej lub projektowej, zgodnie ze schematem przedstawionym na Rysunku 3. Umieść obwód w powszechnie dostępnej plastikowej obudowie projektowej; prawdopodobnie konieczne będzie wywiercenie w niej otworów na złącza BNC. Obwód może być zasilany z portu USB komputera stacjonarnego napięciem 5 V; konieczne będzie rozmontowanie kabla USB w celu wyizolowania przewodów zasilających i uziemiających. Mogą być również potrzebne kondensatory filtrujące w celu regulacji zasilania układu 555 (niewidoczne na Rysunku 3).
- Zbadaj płytkę drukowaną pod kątem niepożądanych mostków lutowniczych między komponentami elektrycznymi. W przypadku ich wykrycia usuń lut odsysaczem lub rozgrzej lut i mechanicznie usuń mostkujące połączenie.

Rycina 2: Schemat blokowy próby. Ten schemat przedstawia zdarzenia bodźca i sygnału, które występują podczas typowej próby eksperymentalnej obejmującej stymulację TMS. Kody portu równoległego występujące w trakcie próby są przedstawione w symbolach schematycznych DB25 (jasnoniebieskie).
- Szczegóły synchronizacji
- Korzystając z schematu blokowego podobnego do Rysunku 2, określ, kiedy poszczególne elementy sprzętowe powinny zostać aktywowane w trakcie ruchu eksperymentalnego. Na przykład niektóre urządzenia mogą być aktywowane indywidualnie, podczas gdy inne mogą być uruchamiane jednocześnie.
- W punktach czasowych wymagających wyzwolenia lub sygnalizacji (np. niebieskie symbole portu równoległego na Rysunku 2), ustal, których linii sygnałowych portu równoległego należy użyć i wprowadź je do systemu VR. Osiąga się to poprzez wysyłanie wartości liczbowych do portu równoległego w określonych momentach podczas ruchów, gdzie każda linia reprezentuje cyfrę binarną. Więcej szczegółów na temat sygnalizacji opartej na porcie równoległym znajduje się w sekcji Dyskusja.

Rycina 3: Obwód synchronizacji. Niniejszy schemat przedstawia układ naszego autorskiego obwodu synchronizacji. Domyślnym wyjściem bramki NAND jest wysoki stan napięcia; wyjście to jest kierowane na bramkę tranzystora, przez który przepływa prąd w obwodzie diody LED synchronizacji. Ten stan domyślny sprawia, że obwód jest zamknięty, co utrzymuje diodę LED w stanie świecenia. Po otrzymaniu sygnału wyzwalającego synchronizację z portu równoległego (czerwona linia na wstawce), wewnętrzny stan układu 555 ulega zmianie, co wprowadza wyjście w stan wysoki i wygasza diodę LED (niebieska linia). W tym momencie napięcie na C1 (zielona linia) wzrasta do wartości, która resetuje stan wewnętrzny układu 555, ponownie aktywując diodę LED. Sygnał wyzwalający synchronizację z portu równoległego jest również kierowany bezpośrednio do złącza BNC połączonego z portem wyzwalającym wejście TMS. Uwaga: Kierunek tego sygnału wyzwalającego może wymagać odwrócenia (z dodatniego na ujemny lub odwrotnie), w zależności od specyficznych wymagań sprzętowych badacza. Zadanie to można łatwo zrealizować poprzez dodanie układu „inwertera” na tym wyjściu wyzwalającym. Aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny, kliknij tutaj.
3. Procedury eksperymentalne
- Procedury bezpieczeństwa i świadoma zgoda
- Upewnij się, że wszystkie procedury eksperymentalne zostały zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję Rewizyjną (IRB). Wyjaśnij wszystkie procedury uczestnikom i uzyskaj świadomą zgodę z wykorzystaniem dokumentacji zatwierdzonej przez IRB.
- Po uzyskaniu świadomej zgody przeprowadź u uczestników podstawowe badanie przesiewowe pod kątem bezpieczeństwa TMS, aby upewnić się, że nie cierpią oni na szumy uszne, nie mają w rodzinie historii epilepsji lub napadów ani innych schorzeń wiążących się z podwyższonym ryzykiem wystąpienia napadów.
- Podczas stymulacji TMS wymagaj bezwzględnego stosowania ochronnych zatyczek do uszu, aby zapobiec uszkodzeniu słuchu.
- Rejestracja elektromiografii
- W zależności od celów naukowych badania określ, z których mięśni ramienia należy rejestrować sygnały EMG. W badaniu opisanym w niniejszym protokole analizowano momenty obrotowe generowane w stawie barkowym i łokciowym podczas ruchu. Zatem sygnały EMG rejestrowano z głównych powierzchownych mięśni działających na te dwa stawy, takich jak mięsień naramienny, mięsień piersiowy, mięsień dwugłowy ramienia, mięsień trójgłowy ramienia oraz mięsień ramienno-promieniowy.
- Wykonaj wszystkie niezbędne połączenia elektryczne pomiędzy poszczególnym sprzętem EMG, w tym wzmacniaczami, przedwzmacniaczami, przewodami czujników i elektrodami, zgodnie ze specyfikacją producenta, łącząc pasujące złącza.
- Przygotuj każde miejsce aplikacji elektrody, delikatnie oczyszczając je wacikiem nasączonym alkoholem, usuwając nadmiar włosów brzytwą i nakładając łagodny żel ścierny. Prawidłowe przygotowanie miejsca zapewni spójne i niskie wartości impedancji między elektrodą a skórą (<10 kOhms) oraz wysoki stosunek sygnału do szumu rejestrowanych sygnałów EMG.
- Poproś badanych o wykonanie skurczów izometrycznych zaprojektowanych tak, aby wyizolować poszczególne interesujące nas mięśnie, w oparciu o przyjęte opisy anatomiczne i biomechaniczne10. Na przykład, aby wyizolować mięsień dwugłowy, poproś uczestnika o przeciwstawienie się wymuszonemu wyprostowi w łokciu.
- Po wykonaniu przez badanych skurczów izolujących mięśnie, przymocuj różnicowe bipolarne elektrody EMG nad najgrubszą, centralną częścią, tzw. „brzuścem” każdego mięśnia w przyjętych lokalizacjach11. Zapewnia to objęcie maksymalnej liczby włókien mięśniowych i minimalizuje zjawisko „przesłuchu” (crosstalk) między sąsiednimi mięśniami. Pamiętaj, aby najdłuższe osie elektrod bipolarnych były ustawione wzdłuż mięśni, równolegle do włókien.
- Przymocuj elektrodę uziemiającą EMG zgodnie ze specyfikacją sprzętu (np. na skórze nad kręgiem C7).
- Rejestruj wzmocnione sygnały EMG za pomocą sprzętu DAQ sterowanego przez niestandardowy skrypt komputerowy. Skrypt użyty w obecnym protokole jest dołączony jako plik uzupełniający.
- Dostosuj wzmocnienie stosowane do rejestrowanych sygnałów do pożądanego poziomu, przesuwanym pokrętłami przedwzmacniacza EMG. Unikaj wartości wzmocnienia, które powodują, że rejestrowane sygnały przekraczają zakres wejściowy sprzętu rejestrującego (zazwyczaj 5V). Typowe wartości wzmocnienia EMG mieszczą się w zakresie 1 000-4 000.
- Wykonaj skurcze izometryczne analogiczne do tych z kroku 3.2.4 i wizualnie sprawdź sygnały EMG, aby upewnić się, że są one wysokiej jakości (t.j. mają wysoki stosunek sygnału do szumu). W razie potrzeby zmień położenie elektrod lub wzmocnienie sygnału.
- Przygotowanie systemu przechwytywania ruchu
- Zkalibruj kamery śledzenia ruchu, korzystając z dostarczonych przez dostawcę instrukcji i sprzętu, zgodnie z wytycznymi producenta.
- Używając taśmy i innych materiałów mocujących, przymocuj aktywne czujniki LED do punktów kostnych w pobliżu stawów ramienia oraz innych interesujących anatomicznie punktów wykorzystywanych w konstrukcji modeli biomechanicznych: paliczka dalszego palca wskazującego, wyrostka rzylca kości promieniowej i łokciowej w nadgarstku, wyrostka łokciowego w łokciu, wyrostka kruczego i akromionu łopatki w barku, wcięcia mostkowo-obojczykowego, wyrostka mieczykowatego oraz wyrostka kolczystego C7. Przymocuj kolejny LED do zestawu VR, aby ustawić punkt widzenia w środowisku wirtualnym.
- Podłącz każdy LED do wiązki przewodów przymocowanej do bezprzewodowej jednostki sterującej. Włącz jednostkę sterującą i upewnij się, że wszystkie diody LED są prawidłowo podświetlone.
- Umieść synchronizującą diodę LED w dogodnym miejscu, z dala od badanego, ale w zasięgu widzenia kamer.
- Stereotaktyczna lokalizacja stymulacji magnetycznej przezczaszkowo
- Zkalibruj sprzęt i oprogramowanie przeznaczone do rejestracji TMS12, aby umożliwić dokładne umieszczenie cewki. Zazwyczaj polega to na koregistracji cewek TMS z punktami anatomicznymi, takimi jak nasion, punkty przeduszne i czubek nosa. Rejestracja stereotaktyczna między uczestnikiem a cewką stymulującą jest niezbędna dla spójnej lokalizacji stymulacji.
- Procedury lokalizacji „hot-spotu” MEP i wyznaczania progu MEP
- Zastosuj techniki tzw. „hot-spot” w celu zlokalizowania obszarów kory wrażliwych na TMS, które generują MEP o największej amplitudzie przy najniższym progu stymulacji8,13,14. Stymulacja magnetyczna przezczaszkowa w badaniach nad systemami ruchowymi zazwyczaj polega na stymulowaniu obszaru kory kontrolującego ruch w określonej części ciała (np. ramieniu i dłoni)15.
- Zarejestruj lokalizację idealnych punktów stymulacji na skórze głowy uczestnika za pomocą skalibrowanego sprzętu do rejestracji stereotaktycznej i powiązanego oprogramowania. Po zarejestrowaniu każdej lokalizacji w oprogramowaniu upewnij się co do jej dokładności, ponownie lokalizując punkt i stymulując go, szukając podobnych odpowiedzi MEP.
- Zadanie behawioralne w rzeczywistości wirtualnej
- Zaprojektuj parametry zadania behawioralnego (np. ruchy sięgania), które zostanie wykorzystane w eksperymencie. W obecnym badaniu zadaniem jest sięganie do wirtualnych celów umieszczonych sekwencyjnie w różnych lokalizacjach przestrzennych. Wielkość celów definiuje dokładność ruchów uczestników. Zaprojektuj ruchy tak, aby podczas sięgania do celów wywoływane były zróżnicowane kierunki i wartości momentów obrotowych w stawach.
- Skonfiguruj środowisko VR, które prowadzi badanych przez zadanie behawioralne, używając komercyjnego oprogramowania VR kompatybilnego z goglami i systemem śledzenia ruchu, zgodnie z protokołem producenta. Zapoznaj się z wymaganymi zasobami obliczeniowymi i wymaganiami dotyczącymi języka programowania dla danego pakietu oprogramowania. Powszechnie stosowane pakiety oprogramowania VR mogą być programowane w językach takich jak Python, C++, C# i innych. Dodatkowo zaprogramuj wyjścia analogowe poprzez port równoległy w celu synchronizacji i znakowania konkretnych interesujących zdarzeń (Rysunek 2). W obecnym eksperymencie oprogramowanie VR wysyła sygnały o zdarzeniach na początku każdego powtórzenia zadania oraz w momentach pożądanej stymulacji TMS.
- Podłącz wyjście VR do obwodu synchronizacyjnego (Rysunek 3) i/lub pozostałych urządzeń do synchronizacji, używając kabli z pasującymi złączami.
- Poleć badanym wykonanie zadania behawioralnego w VR. W obecnym badaniu środowisko VR prezentowano za pomocą wyświetlacza montowanego na głowie, w którym uczestnicy widzieli układy sferycznych celów. Używając oprogramowania VR, zaprogramuj konkretne sekwencje ruchów, zmieniając wygląd celów (kolor, lokalizacja, itp.) i zapoznaj uczestników z tymi działaniami. Dodatkowo poinformuj uczestników o wszelkich innych pożądanych ograniczeniach ruchowych. Na przykład uczestników w obecnym badaniu poproszono o utrzymanie wszystkich segmentów ramienia w pionowej płaszczyźnie ruchu podczas sięgania do celów.
- Gdy uczestnicy przyzwyczają się do ruchów eksperymentalnych, zarejestruj dane EMG i przechwytywania ruchu oraz sygnały synchronizacyjne za pomocą niestandardowych skryptów lub pakietów oprogramowania dostarczonych przez producenta. Dostosuj częstotliwość próbkowania każdego systemu akwizycji danych do pożądanych wartości; dodatkowo zapoznaj się z wszelkimi parametrami specyficznymi dla producenta i dostosuj je, np. intensywność diod LED śledzenia ruchu.