Prosta metoda automatycznej ekstrakcji próbek wody do fazy stałej do analizy immunologicznej małych zanieczyszczeń

Summary

Przedstawiono protokół ekstrakcji i wstępnego zatężania estradiolu z próbek wody za pomocą zautomatyzowanego i zminiaturyzowanego systemu.

Abstract

Zaproponowano nową metodę ekstrakcji do fazy stałej (SPE) próbek wody ze środowiska. Opracowany prototyp jest ekonomiczny i przyjazny dla użytkownika, a także umożliwia szybkie, zautomatyzowane i proste wykonanie SPE. Wstępnie stężony roztwór jest zgodny z analizą za pomocą testu immunologicznego, o niskiej zawartości rozpuszczalnika organicznego. Opisano metodę ekstrakcji i wstępnego zatężania naturalnego hormonu 17β-estradiolu w 100 ml próbek wody. SPE z odwróconą fazą przeprowadza się za pomocą sorbentu oktadecylokrzemionkowego, a elucję przeprowadza się za pomocą 200 μl metanolu 50% v/v. Eluent rozcieńcza się przez dodanie dwuwody w celu zmniejszenia ilości metanolu. Po ręcznym przygotowaniu kolumny SPE, cała procedura jest wykonywana automatycznie w ciągu 1 godziny. Pod koniec procesu stężenie estradiolu mierzy się za pomocą komercyjnego testu immunoenzymatycznego i sorbentowego (ELISA). Osiągane jest 100-krotne stężenie wstępne, a zawartość metanolu wynosi zaledwie 10% v/v. Pełne odzyski cząsteczki uzyskuje się za pomocą 1 ng/l wzbogaconych, dejonizowanych i syntetycznych próbek wody morskiej.

Introduction

Przygotowanie próbki jest ważnym krokiem w każdym procesie analitycznym. W szczególności usunięcie efektów matrycowych, zmniejszenie zakłóceń i wzbogacenie analitu są niezbędne do uzyskania precyzyjnych wyników i osiągnięcia niskich granic wykrywalności. Związki zaburzające funkcjonowanie układu hormonalnego (EDC) budzą szczególne obawy ze względu na ich działanie na organizmy żywe, nawet jeśli są obecne w bardzo niskich stężeniach w środowisku. Naturalny hormon 17β-estradiol znajduje się na unijnej liście obserwacyjnej zanieczyszczenia wody i może zostać dodany do listy substancji priorytetowych regulowanych przez Europejską Ramową Dyrektywę Wodną. Ekstrakcja do fazy....

Protocol

Uwaga: Poniższy protokół opisuje SPE przeprowadzoną na 100 ml próbki wody z sorbentem C18 i elucją, z 50% v/v metanolem. Wzbogaconą próbkę rozcieńcza się do 10% v/v metanolu przed analizą za pomocą zestawu do testu immunoenzymatycznego (ELISA).

1. Przygotowanie odczynników

1. Przygotuj próbki wody
   1. Przed przystąpieniem do jakiegokolwiek innego kroku przefiltrować każdą 100 ml próbki wody za pomocą filtrów o wielkości porów 0,2 μm.
   2. Zwiększyć próbkę o pożądanym stężeniu, rozcieńczając odpowiednią objętość roztworu odniesienia w objętości wody. Na przykład, przygotować 100 ml próbki wody z 100 ng/l E2, rozcieńcza....

Results

Powtarzalność pakowania sorbentu została oceniona poprzez suszenie i ważenie pipetowanego sorbentu w szklanych fiolkach, a wynik pokazano na rysunku 1. Odtwarzalność czasu wstrzyknięcia badano dla próbek o objętości 100 ml, jak pokazano na rysunku 2. Stężenie w początkowych i wstępnie zagęszczonych próbkach kolczastych określono przy użyciu komercyjnego zestawu ELISA dla 17β-estradiolu i pokazano je na rysunku 3.

Discussion

Zaproponowano nową metodę przygotowania próbek wody, a następnie analizy za pomocą testu immunologicznego. Urządzenie umożliwia przeprowadzenie ekstrakcji fazy stałej w sposób zautomatyzowany i przyjazny dla użytkownika.

Filtracja próbki wody przed jej wstrzyknięciem do systemu ma kluczowe znaczenie. Wszelkie cząstki stałe nadal obecne w roztworze mogłyby potencjalnie spowodować zatkanie sieci płynów i zatkać kolumnę SPE. Kolejnym ważnym krokiem jest przygotowanie kolumny SPE. Ilość cząstek w .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Membrana filtracyjna 0,2 μ m wielkość porów	Merck Millipore	GNWP04700	Do filtracji próbek
Membrana nylonowa 11 μ m wielkość porów	Merck Millipore	NY1104700	Do kolumny SPE
Jednorazowy dziurkacz do biopsji 5 mm	Budżet medyczny	39302439
Nucleodur C18 ec	Macherey Nagel	713550.01	50 μ m średnica cząstek
Syntetyczna woda morska	Sigma Aldrich	SSWS500-500ML
Metanol	VWR
17beta-estradiol standard	Enzo Life Science		300 ng/ml
17beta-estradiol Zestaw ELISA	Enzo Life Science	ADI-900-008	96 studzienek, zakres 30 - 3,000 ng/L