Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Dostrajanie kolumny przepływu z równoległymi segmentami i włączanie detekcji multipleksowej

7.4K wyświetleń

DOI:

10.3791/53448

15 grudnia 2015

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj prezentujemy protokół działania i dostrajania kolumn chromatografii przepływowej z równoległymi segmentami, aby umożliwić detekcję multipleksowaną.

Streszczenie

Technologia aktywnego przepływu (AFT) to nowa forma technologii kolumnowej, która została zaprojektowana w celu przezwyciężenia niejednorodności przepływu w celu zwiększenia wydajności separacji pod względem wydajności i czułości oraz umożliwienia multipleksowanej detekcji. Ta forma AFT wykorzystuje kolumnę o przepływie równoległym (PSF). Końcówka wylotu kolumny PSF składa się z 2 lub 4 portów, które można multipleksować w celu podłączenia do 4 detektorów. Kolumna PSF umożliwia nie tylko platformę do detekcji multipleksowej, ale także na jednoczesne połączenie detektorów niszczących i nieniszczących, bez dodatkowych przewodów o martwej objętości. Wielkość przepływu przez każdy port można również dostosować za pomocą zarządzania ciśnieniem, aby dopasować ją do wymagań konkretnego detektora (detektorów). Aby osiągnąć detekcję multipleksową za pomocą kolumny PSF, istnieje szereg parametrów, które można kontrolować, aby zapewnić optymalną wydajność separacji i jakość wyników; To są wymiary rurki dla każdego portu, wybór portu dla każdego typu detektora i regulacja przepływu. Protokół ten ma na celu pokazanie, jak używać i dostrajać kolumnę PSF działającą w multipleksowanym trybie wykrywania.

Wprowadzenie

Kolumny technologii Active Flow

Kolumny chromatograficzne z technologią aktywnego przepływu (AFT) zostały niedawno opracowane w celu przezwyciężenia nieefektywności separacji związanej z niejednorodnością przepływu1-6, a także w celu umożliwienia detekcji multipleksowej. W tej konkretnej komunikacji szczegółowo opisujemy proces operacyjny kolumny z równoległym przepływem segmentowym (PSF) z detekcją multipleksową. Kluczowymi zaletami funkcjonalnymi kolumny PSF są: (1) przepływ z promieniowego obszaru centralnego łoża kolumny jest odizolowany od obwodowego lub ściennego obszaru przepływu, (2) objętość fazy ruchomej, która musi być przetworzona przez źródło detekcji, jest zmniejszona, oraz (3) źródła detekcji mogą być multipleksowane w celu rozszerzenia informacji o próbce bez wprowadzania opóźnień wykrywania w każdym procesie wykrywania, lub w związku z tym konieczne jest rozszczepienie strumienia przepływu na słupie7,8. Kluczową cechą konstrukcji kolumny PSF, która umożliwia korzystanie z detekcji multipleksowej, jest nowatorska armatura wylotowa i zespół frytki. Rysunek 1 przedstawia zdjęcie kolumny AFT w porównaniu z konwencjonalną kolumną. Ważne jest, aby zrozumieć, że proces podziału uzyskany przy użyciu równoległych segmentowanych kolumn przepływu nie jest taki sam, jak podział strumienia przepływu po kolumnie. W podzielonym strumieniu przepływu po kolumnie próbkowanie odbywa się równomiernie (tj. osiowo) w całym paśmie próbki od krawędzi natarcia do krańców ogona, w wyniku czego każdy strumień przepływu jest równy pod względem wydajności i czułości; Wielkość czułości jest w ten sposób dzielona przez liczbę rozdwojoną. Jednak w PSF proces rozdzielania próbkuje pasmo promieniowo, a nie osiowo. W związku z tym port centralny pobiera próbki z wierzchołka piku — najbardziej skoncentrowanego obszaru szczytu. W związku z tym czułość jest tutaj najwyższa, ponieważ pik nie jest rozcieńczany przez rozproszony obszar ogonowy. Elucja próbki z portów peryferyjnych nie jest tak wydajna jak w strefie centralnej, ale ponieważ pasmo jest próbkowane promieniowo, a nie osiowo, szerokość piku jest węższa niż w przypadku procesu próbkowania, który dzieli pik w kierunku osiowym, tj. podział kolumny końcowej. W związku z tym czułość z detektorem zależnym od stężenia nie jest zmniejszona.

W kolumnie PSF, złączka wylotowa składa się z wielu portów wyjściowych, a po wewnętrznej stronie tej końcowej złączki znajduje się pierścieniowa fryta. Wewnętrzna część tych pierścieniowych kanałów frytowych wypływa z kolumny przez promieniowy centralny port wylotowy, podczas gdy zewnętrzna promieniowa część kanałów wylotowych fryty wypływa z kolumny przez obwodowe lub ścienne porty wylotowe. Wewnętrzna i zewnętrzna część fryty wylotowej są oddzielone nieprzepuszczalną barierą, która zapobiega przepływowi krzyżowemu między tymi obszarami przepływu2. W wyniku tej konstrukcji centralny strumień promieniowy przepływający przez łoże słupa jest oddzielony od przepływu obszaru ściany wewnątrz słupa. Względna część przepływu z tych dwóch obszarów może być zmieniana do prawie dowolnego pożądanego stosunku poprzez zarządzanie ciśnieniem w celu optymalizacji różnych aspektów funkcjonalnych technologii kolumn, takich jak wydajność separacji lub czułość wykrywania. Zasadniczo, projekt ten skutecznie ustanawia w kolumnie o większym formacie "wirtualną" kolumnę o węższej średnicy wewnętrznej, a zatem kolumna funkcjonuje jako prawdziwa kolumna bezścienna, pokonując niejednorodność łoża kolumny i efekt ściany9,10.

Głównymi zaletami kolumn PSF są poprawa wydajności kolumn, minimalizacja przetwarzania rozpuszczalnika dla źródła (źródeł) detekcji i umożliwienie detekcji multipleksowej. Jednak dodatkową zaletą jest to, że ponieważ obszary ogonowe i czołowe dowolnego pasma są usuwane z ogólnego profilu elucji, substancja rozpuszczona podczas elucji lub wykrywania jest obecna w wyższym stężeniu, niż byłoby to obserwowane dla tego samego wtrysku substancji rozpuszczonej i obciążenia stężeniem na konwencjonalnej kolumnie, w zależności od zastosowanego współczynnika segmentacji. W konsekwencji często obserwuje się wzrost intensywności sygnału dla separacji przeprowadzanych na kolumnach PSF2. W rzeczywistości, jeśli współczynnik segmentacji zostanie dostosowany w taki sposób, że 25% przepływu wychodzi z każdego z czterech portów wyjściowych, intensywność sygnału obserwowana za pomocą detekcji ultrafioletowej (UV) pokazuje praktycznie dokładnie taką samą intensywność sygnału, jak pokazano przy użyciu konwencjonalnej kolumny, w której analizowana jest cała (100%) faza ruchoma7. Ponadto precyzyjne dostrojenie stosunku wylotu między obszarami przepływu centralnego i ściennego pozwala na optymalizację wydajności kolumny. Przyrost wydajności kolumny zaobserwowany przy użyciu kolumn AFT nie może być określony w jednej wartości, ponieważ ten przyrost wydajności jest funkcją trzech czynników: (1) natężenia przepływu, (2) współczynnika segmentacji i (3) współczynnika retencji substancji rozpuszczonej. Niemniej jednak prawie zawsze obserwuje się wzrost wydajności w porównaniu z konwencjonalnymi kolumnami, a czasami wzrost ten wynosi ponad 100% w liczbie teoretycznych tabliczek1,2. Możliwość dostrojenia współczynnika segmentacji pozwala analitykowi na skuteczne dopasowanie średnicy "wirtualnej" kolumny, a to jest ważny czynnik w odniesieniu do procesu detekcji. Na przykład wirtualna kolumna o średnicy wewnętrznej (ID) 2,1 mm jest tworzona z fizycznej kolumny o średnicy wewnętrznej 4,6 mm, gdy współczynnik segmentacji wynosi 21% elucji fazy ruchomej z promieniowego centralnego portu wyjściowego. W tych warunkach wirtualna kolumna o średnicy wewnętrznej 2,1 mm działa z wydajnością, która może być o ponad 70% większa niż konwencjonalna kolumna o średnicy wewnętrznej 2,1 mm, w zależności od natężenia przepływu i współczynnika retencji substancji rozpuszczonej10.

Obecny projekt kolumny PSF, który jest używany do detekcji multipleksowej, zawiera 4-portową złączkę wylotową, ale kolumna może być również wyposażona w 2-portową końcówkę, jednak ogranicza to wykrywanie tylko do dwóch detektorów. Podstawowa zasada działania tych kolumn jest jednak taka sama, z wyjątkiem tego, że cztery detektory mogą być jednocześnie sprzężone z 4-portową kolumną PSF na wyjściu, co rozszerza zakres detekcji multipleksowej. Oprócz rurek łączących przed i po kolumnie, jedynymi dodatkowymi wymaganiami dotyczącymi obsługi kolumny PSF są rurki, które można podłączyć do peryferyjnych portów wylotowych, oraz sposób, za pomocą którego można zmierzyć ilość fazy ruchomej przechodzącej przez każdą rurkę, zwykle pomiar masy lub pomiar objętościowy. Aby ułatwić strojenie, średnica wewnętrzna wszystkich rurek wylotowych powinna być taka sama. Stosunek przepływu między obwodowymi i promieniowymi centralnymi portami wyjściowymi jest następnie zmieniany za pomocą zarządzania ciśnieniem, po prostu poprzez zmianę długości rurki znajdującej się na obwodowej złączce wylotowej lub długości detektora przewodów na promieniowym centralnym porcie wylotowym.

Wykrywanie multipleksowane za pomocą kolumn PSF

Ważną zaletą kolumn PSF jest to, że każdy z portów wyjściowych może być podłączony bezpośrednio do źródła detekcji, umożliwiając w ten sposób detekcję multipleksową. W dobrze zaprojektowanym systemie detekcji pojedyncza analiza z detekcją multipleksową może dostarczyć istotnych informacji na temat charakteru składników w próbce. Co ważne, badania niszczące i nieniszczące mogą być prowadzone dokładnie w tym samym czasie, bez opóźnień w wykrywaniu. Pozwala to na bezwzględne przypisanie np. przeciwutleniaczy za pomocą odczynnika DPPH•, przy czym zaobserwowano, że składniki eluują się w odpowiedzi wykrywania UV i/lub spektrometrii mas (MS)7,11. Dzięki temu cztery niezależne detektory mogą pracować jednocześnie, a odpowiednie porcje przepływu są kierowane do każdego detektora przez dowolny z czterech portów wylotowych. Ponieważ przepływ przez te porty można łatwo regulować, ilość substancji rozpuszczonej docierającej do dowolnego z detektorów można dostosować do czułości danego źródła detektora. Należy jednak zauważyć, że najbardziej efektywną migrację substancji rozpuszczonej obserwuje się przez promieniowy centralny port wylotowy. Każdy z portów peryferyjnych oferuje równoważną wydajność separacji, która po ustawieniu na 25% przez każdy port jest tylko nieznacznie mniej wydajna niż konwencjonalna kolumna. W związku z tym ważne jest, aby detektor ilościowy był ustawiony na analizę próbki z promieniowego centralnego portu wyjściowego.

Podczas ustawiania kolumny PSF w celu wykrywania multipleksowania należy wziąć pod uwagę szereg czynników, które należy wziąć pod uwagę, aby osiągnąć efektywne i wysokiej jakości wyniki; to są wymiary lamp dla każdego portu, wybór portu dla typu detektora i regulacja przepływu.

Wymiary rurki dla każdego portu

W chromatografii długość rurki po kolumnie odgrywa kluczową rolę w efektywności i wydajności separacji. Duża objętość martwa wynikająca z długich lub szerokich przewodów o średnicy wewnętrznej od wylotu kolumny do detektora spowoduje utratę wydajności, rozdzielczości i czułości. W związku z tym podczas ustawiania kolumny PSF należy zastosować odpowiednie wymiary przewodów, aby osiągnąć maksymalny potencjał w zapewnieniu wydajnej separacji przy jednoczesnym zapewnieniu korzyści płynących z multipleksowania.

Port do detektora

Rysunek 2 jest ilustracją przykładowej konfiguracji detekcji multipleksowanej (wykrywanie ultrafioletowo-widzialnej (U-Vis), spektrometru masowego (MS) i 2,2-difenylo-1-pikrylohydrazylu (DPPH•)). Ilustracja pokazuje, że port centralny jest podłączony do detektora MS, podczas gdy detektory DPPH i UV-Vis są podłączone do portów peryferyjnych. Ponieważ MS jest najbardziej czułym detektorem z trzech, przepływ do tego detektora był kierowany z centralnego portu wylotowego. Ponieważ detekcja DPPH jest selektywna w stosunku do obecności przeciwutleniaczy, a najmniej czuła i najbardziej tolerancyjna na poszerzanie pasma, przepływ do tego detektora był kierowany z portu peryferyjnego. UV-Vis był wtórnym detektorem "ogólnym", więc przepływ do tego detektora był kierowany z drugiego portu peryferyjnego.

Regulacja przepływu

Po podłączeniu odpowiedniego przewodu z portu do detektora, przepływ wyjściowy z każdego z detektorów może być dostosowany do wymaganej ilości. Prostym sposobem pomiaru wielkości przepływu wychodzącego z każdego detektora jest zważenie ilości fazy ruchomej, która wymywa się przez każdy port w danym okresie czasu. W ten sposób można określić przepływ procentowy, a współczynniki przepływu można regulować poprzez skrócenie lub wydłużenie rurki podłączonej do przewodu wylotowego detektorów, odpowiednio do wymagań wybranych detektorów. Różne detektory mają różne wymagania dotyczące przepływu, na przykład cela przepływowa detektora fluorescencyjnego (FLD) nie jest ograniczona natężeniem przepływu, ale należy zachować ostrożność, aby uniknąć nadmiernego ciśnienia w komorze przepływowej. W związku z tym kontrolę przepływu przez FLD uzyskuje się zwykle poprzez regulację spadku ciśnienia na innych detektorach, a pozostała część przepływu przechodzi następnie przez FLD. Detektorem, który jest czuły na wielkość dostarczanego przepływu, jest MS. Ogólnie rzecz biorąc, obecne wysokiej klasy spektrometry masowe mogą z łatwością przetwarzać około 1 do 1,5 ml / min umiarkowanie wodnej fazy ruchomej. Powyżej tego natężenia przepływu zalanie źródła może spowodować, że MS nie będzie działał. Jednak czułość wykrywania w większości spektrometrów masowych jest korzystna dzięki zastosowaniu niższych natężeń przepływu; w związku z tym możliwości rozdzielania przepływu PSF są niezwykle przydatne w zastosowaniach związanych z wykrywaniem stwardnienia rozsianego. Można wykorzystać wysokie objętościowe natężenia przepływu w kolumnie, ale przy małych obciążeniach transportowanych do detektora MS. Dostrojenie przepływu do detektora MS musi być jednak wykonane poprzez regulację spadku ciśnienia przed detektorem MS, a nie po MS. W tym przypadku bardzo przydatne jest zastosowanie wężyka o wąskim otworze (średnica wewnętrzna 0,1 mm), ponieważ ciśnienie można łatwo regulować bez dodawania nieodpowiedniej objętości martwej.

W zależności od typu detektora, dostosowanie współczynnika segmentacji może być wykonane zarówno przed jak i po detektorze. Jeśli używany jest detektor nieniszczący, taki jak UV-Vis, procent przepływu zostanie zmierzony i dostrojony po detektorze. Jeśli w konfiguracji multipleksu używany jest pojedynczy detektor niszczący, procent przepływu jest określany przez wsteczne obliczenia w odniesieniu do innych procentów przepływu w portach. Jeśli używany jest detektor oparty na odczynniku, taki jak DPPH•, procent przepływu jest mierzony po detektorze bez dodawania odczynnika; A jeśli używane są dwa lub więcej detektorów niszczących, wówczas stosunek przepływu jest mierzony przez detektor wstępny. Systemy detekcji, które mogą wymagać dodatkowego oprzyrządowania, takie jak DPPH•, będą miały dodatkowe ciśnienie w układzie, które może zmienić procent przepływu po podłączeniu do systemu wykrywania. Dlatego należy zwrócić szczególną uwagę na ciśnienie w układzie detektora niszczącego podczas regulacji procentowego przepływu detektora wstępnego. Niezależnie od współczynnika przepływu, który jest ustalany przez którykolwiek z portów, informacje ilościowe powinny być uzyskiwane poprzez odpowiednią standaryzację. Jednak po ustaleniu stosunków przepływu są one wytrzymałe i nie zmieniają się nawet w warunkach elucji gradientowej7,

Szczegółowy protokół wideo towarzyszący temu rękopisowi ma na celu pokazanie, jak używać i dostroić kolumnę PSF działającą w multipleksowanym trybie wykrywania.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Uwaga: Ten protokół zawiera instrukcje, jak używać kolumny PSF w systemie HPLC sprzężonym z wieloma detektorami do detekcji multipleksowej. Protokół został napisany przy założeniu, że czytelnik posiada podstawową wiedzę i doświadczenie w zakresie chromatografii i różnych metod detekcji HPLC.

Uwaga: Proszę zapoznać się z kartami charakterystyki substancji niebezpiecznych (MSDS) dla wszystkich materiałów i odczynników przed użyciem (np. MSDS dla metanolu). Należy zapewnić stosowanie wszystkich odpowiednich praktyk bezpieczeństwa podczas obchodzenia się z rozpuszczalnikami i eluentem z wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC). Należy zapewnić właściwe wykorzystanie kontroli inżynieryjnych HPLC, wagi analitycznej i oprzyrządowania detektora oraz zapewnić stosowanie środków ochrony osobistej (okulary ochronne, rękawice, fartuch laboratoryjny, długie spodnie i buty z zakrytymi palcami).

1. Konfiguracja instrumentu HPLC

  1. Przygotować przyrząd do HPLC z ultraczystą wodą (np. 100% wodą Milli-Q) dla linii A i 100% metanolem dla linii B jako fazą ruchomą i przepłukać pompy zgodnie z wymaganiami producenta. Jeśli jednym z używanych detektorów jest stwardnienie rozsiane, tak jak w tym przypadku, dodaj 0,1% kwasu mrówkowego do obu faz ruchomych A i B.
  2. Skonfiguruj komponenty instrumentalne i detektory HPLC, jak pokazano na rysunku 2. Wymaga to wygodnego rozmieszczenia detektorów względem kolumny, tak aby zminimalizować martwą objętość między detektorem a kolumną. Pożądana jest elastyczność w konfiguracji systemu HPLC.

2. Konfiguracja detektorów UV-Vis i MS

  1. Ustaw detektor UV-Vis na żądaną długość fali w zależności od interesującej nas próbki (np. 280 nm).
  2. Ustaw detektor MS w trybie dodatnim do analizy całkowitej liczby jonów (TIC) przy użyciu metody wykrywania Full Scan. Dostosuj również odpowiednio następujące parametry MS: temperatura parownika 500 °C, temperatura kapilary 350 °C, gaz osłonowy ustawiony na szybkość 60 jednostek, przepływ gazu pomocniczego 40 i przepływ gazu wymiatającego na poziomie 5 jednostek oraz napięcie natrysku 3,5 kV. Ustawienia te można później dostosować do konkretnych wymagań użytkownika w zależności od analizowanej próbki.

3. Przygotowanie odczynnika 2,2-difenylo-1-pikrylohydrazylu (DPPH) Konfiguracja odczynnika DPPH Detektor systemu

  1. Odważyć 25 mg DPPH i rozpuścić w 250 ml metanolu w kolbie miarowej.
  2. Dodać 250 μl kwasu mrówkowego do odczynnika DPPH•. Przykryć kolbę folią, aby zapobiec ekspozycji na światło.
  3. Sondować kolbę zawierającą odczynnik DPPH przez 10 minut.
  4. Przedmuchnąć pompę DPPH przygotowanym odczynnikiem DPPH zgodnie z wymaganiami producenta.
  5. Skonfiguruj system DPPH• zgodnie z rysunkiem 2, podłączając przewód pompy do wlotu trójnika.
  6. Podłącz cewkę reakcyjną o pojemności 100 μl do wylotu trójnika, a drugi koniec cewki reakcyjnej podłącz do detektora.
  7. Zamknąć cewkę reakcyjną w grzałce kolumnowej i ustawić temperaturę grzałki kolumnowej na 60 °C.
  8. Ustaw detektor DPPH UV-Vis na 520 nm.

4. Konfiguracja kolumny PSF

  1. Podłączyć wlot kolumny PSF do przyrządu HPLC.
  2. Podłącz centralny port do detektora MS za pomocą rurki o średnicy wewnętrznej 0.13 mm o długości 15 cm.
  3. Podłącz port peryferyjny do detektora UV-Vis za pomocą rurki o średnicy wewnętrznej 0,13 mm o długości 15 cm.
  4. Podłącz kolejny port peryferyjny do trójnika systemu detekcji DPPH• za pomocą rurki o długości 15 cm z rurką identyfikacyjną 0.13 mm.
  5. Zablokuj nieużywany port peryferyjny za pomocą ogranicznika kolumny.
  6. Doprowadzić natężenie przepływu pompy HPLC do 1 ml min-1 przy 100% linii B - 100% metanolu (0,1% kwasu mrówkowego).
  7. Zrównoważyć kolumnę fazą ruchomą 100% metanolu przez 20 minut, aby uzyskać kolumnę o średnicy wewnętrznej 4,6 mm x długości 250 mm. Czas ten jest skalowany zgodnie z wymiarami innych kolumn, z których użytkownik może skorzystać.

5. Dostrajanie kolumny PSF do detekcji multipleksowej

  1. Zmierzyć masę co najmniej dwóch pustych naczyń zbiorczych (jednego dla portu podłączonego do detektora UV-Vis i jednego dla detektora DPPH•) za pomocą wagi analitycznej.
  2. Zebrać fazę ruchomą z portów UV-Vis i DPPH• do dwóch oddzielnych, wstępnie zważonych naczyń zbiorczych (5.1). Zapisz okres zbierania danych. Zebrać co najmniej 500 mg rozpuszczalnika w każdym naczyniu.
  3. Zważyć naczynia zbiorcze i określić masę fazy ruchomej. Biorąc pod uwagę, że gęstość metanolu wynosi 0,791 g ml-1, określ objętość fazy ruchomej pobranej z każdego portu.
  4. Różnica, to znaczy nominalne natężenie przepływu zestawu pompy pomniejszone o natężenie przepływu przez porty przepływu detektora DPPHi detektora UV-Vis, określ natężenie przepływu do detektora MS. Każdą proporcję przepływu należy wyrazić jako procent całkowitego przepływu.
    Uwaga: Idealnie, procentowe wartości przepływu wynoszą: do MS wynosi 18% całkowitego natężenia przepływu, do UV-Vis 22%, do detektora DPPH 60%.
  5. Jeśli nie, wyreguluj procenty przepływu, zmieniając ciśnienie wsteczne w detektorze UV-Vis. Na przykład, jeśli przepływ do UV-Vis jest zbyt duży, zmniejsz proporcję, dodając 15-centymetrowy odcinek rurki o średnicy wewnętrznej 0,13 mm do wylotu detektora UV-Vis. Następnie powtórz kroki od 5.1 do 5.5.

6. Ostateczne warunki konfiguracji

  1. Ustaw natężenie przepływu pompy odczynnika DPPH na takie samo natężenie przepływu wychodzącego z portu wylotowego podłączonego do detektora DPPH•.
    Uwaga: Kolumna PSF multipleksowana za pomocą UV-Vis, DPPH• i MS jest teraz gotowa do analizy.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Przeprowadzono multipleksową analizę HPLC z wykorzystaniem kolumny AFT w trybie PSF (Rysunek 1), zgodnie z układem przedstawionym na Rysunku 2. Taki układ umożliwił jednoczesną analizę próbki kawy przy użyciu detekcji UV-Vis, DPPH oraz MS w trybie całkowitej liczby jonów (TIC). Związki w próbce kawy wykazujące odpowiedź na DPPH można było następnie łatwo przypisać do odpowiedzi UV-Vis i MS-TIC na podstawie zgodności czasów retencji, co zilustrowano na Rysu...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Badanie to obejmuje charakterystykę i profilowanie kawy przy użyciu HPLC z detekcją multipleksową z wykorzystaniem kolumny o równoległym przepływie segmentowym (PSF). Multipleksowana HPLC z wykorzystaniem kolumn PSF umożliwia charakterystykę i identyfikację kluczowych jednostek chemicznych poprzez zmniejszenie złożoności danych próbki przy jednoczesnym uzyskaniu większego stopnia informacji specyficznych dla cząsteczki w ułamku czasu potrzebnego przy użyciu konwencjonalnych procesów wielokrotnej detekcji. Kolumna PSF umo...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez UWS i ThermoFisher Scientific. Jeden z autorów (DK) potwierdza otrzymanie australijskiej nagrody podyplomowej.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
PrzyrządWiele detektorów do wyboru do wykrywania multipleksowego. Wybrane detektory mogą wymagać dodatkowego oprzyrządowania, np. , pompy.
Kolumna HPLC z przepływem równoległymThermo Fisher ScientificNie zdefiniowanoWkrótce zostanie skomercjalizowany
MetanolDowolna markaRurki HPLC Grade
PEEKDowolna markaRóżne długości i średnica wewnętrzna
Ograniczniki kolumnDowolna markaDo blokowania nieużywanych portów peryferyjnych.
Obcinak do rur PEEKDowolna marka
Waga analitycznaDowolna marka
StoperDowolna marka
Naczynia do zbierania eluentówFiolki na próbki dowolnej marki1-2 ml mogą być używane jako naczynia do zbierania eluentu
HPLC

Bibliografia

  1. Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. The design of a new concept chromatography column. Analyst. 136 (24), 5127-5130 (2011).
  2. Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. Enhanced separation performance using a new column technology: Parallel segmented outlet flow. J. Chromatogr, A. 1232, 47-51 (2012).
  3. Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Ladine, J. R., Shalliker, R. A. Active flow management in preparative chromatographic separations: A preliminary investigation into enhanced separation using a curtain flow inlet fitting and segmented flow outlet. 35 (3), 410-415 (2012).
  4. Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. Gradient elution chromatography with segmented parallel flow column technology: A study on 4.6mm analytical scale columns. J. Chromatogr., A. 1270, 204-211 (2012).
  5. Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. Improving HPLC separation performance using parallel segmented flow chromatography. Microchem. J. 111, 3-7 (2013).
  6. Shalliker, R. A., Ritchie, H. Segmented flow and curtain flow chromatography: Overcoming the wall effect and heterogeneous bed structures. J. Chromatogr, A. 1335, 122-135 (2014).
  7. Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Shalliker, R. A. Evaluating active flow technology HPLC columns as a platform for multiplexed detection. Microchem. J. 110, 473-479 (2013).
  8. Camenzuli, M., et al. Parallel segmented outlet flow high performance liquid chromatography with multiplexed detection. Anal. Chim. Acta. 803, 154-159 (2013).
  9. Shalliker, R. A., Camenzuli, M., Pereira, L., Ritchie, H. J. Parallel segmented flow chromatography columns: Conventional analytical scale column formats presenting as a 'virtual' narrow bore column. J. Chromatogr., A. 1262, 64-69 (2012).
  10. Soliven, A., et al. Improving the performance of narrow-bore HPLC columns using active flow technology. Microchem. J. 116, 230-234 (2014).
  11. Camenzuli, M., Ritchie, H. J., Dennis, G. R., Shalliker, R. A. Parallel segmented flow chromatography columns with multiplexed detection: An illustration using antioxidant screening of natural products. Microchem. J. 110, 726-730 (2013).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Technologia aktywnego przepływuprocedura HPLCregulacja szybkości przepływukonfiguracja detektorastrojenie portówprzygotowanie fazy ruchomejanaliza rodnikowa DPPHdopasowanie czasu retencji