Pobieranie mleka u szczura za pomocą kapilar i oznaczanie zawartości tłuszczu w mleku za pomocą kremokrytu

Summary

Mleko jest podstawowym źródłem pożywienia dla noworodka. Analiza składników mleka może dostarczyć informacji na temat czynników matczynych, które wpływają na zdrowie potomstwa. Protokół ten opisuje ręczną metodę pobierania próbek mleka od szczura w okresie laktacji, które można następnie wykorzystać do dalszej analizy.

Abstract

Mleko, jako jedyne źródło pożywienia dla nowonarodzonego ssaka, dostarcza niezbędnych składników odżywczych i energii do wzrostu i rozwoju potomstwa. Zawiera również ogromną liczbę związków bioaktywnych, które w znacznym stopniu wpływają na rozwój noworodka. Analiza składników mleka pomoże wyjaśnić kluczowe czynniki, które łączą metabolizm i zdrowie matki ze wzrostem i rozwojem potomstwa. Szczur laboratoryjny jest popularnym organizmem modelowym do badań matek, a mleko szczura może być wykorzystywane do badania wpływu różnych interwencji fizjologicznych, żywieniowych i farmakologicznych matki na składniki mleka, co może następnie wpłynąć na zdrowie potomstwa. W tym artykule opisano prostą metodę ręcznego pobierania mleka od szczura w okresie laktacji, która może być wykonana przez jednego badacza, nie wymaga specjalistycznego sprzętu próżniowego ani ssącego i zapewnia wystarczającą ilość mleka do późniejszej analizy. Przedstawiono również metodę szacowania zawartości tłuszczu w mleku poprzez pomiar procentowej zawartości śmietany w próbce mleka, znaną jako creamatocrit. Metody te mogą być ostatecznie wykorzystane do zwiększenia wglądu w zdrowie matki i dziecka oraz do wyjaśnienia czynników matczynych, które są zaangażowane w prawidłowy wzrost i rozwój potomstwa.

Introduction

Mleko jest jedynym źródłem pożywienia dla nowonarodzonych ssaków, dostarczając energii i składników odżywczych dla wzrostu i rozwoju niemowląt^1,2. Podczas gdy mleko składa się głównie z komórek, lipidów i białka¹, zawiera również mnóstwo związków bioaktywnych, które modulują wczesny rozwój potomstwa, w tym enzymy, węglowodany, hormony, przeciwciała, czynniki wzrostu, cytokiny, egzosomy, mikropęcherzyki i małe RNA, takie jak mikroRNA^1,2. Fundamentalna rola mleka matki w kształtowaniu układu odpornościowego i zdrowia jelit u potomstwa^{3 w} połączeniu z dowodami na to, że niemowlęta karmione piersią są mniej podatne na choroby

Protocol

Ten protokół został zatwierdzony przez Komitet Opieki nad Zwierzętami Uniwersytetu w Calgary i był zgodny z Przewodnikiem po opiece i użytkowaniu zwierząt laboratoryjnych.

1. Oddziel matkę od potomstwa

1. Odseparuj matkę od jej potomstwa na co najmniej 5 minut przed dojeniem¹²,
   UWAGA: Matka może być dojona do 5-6 godzin po oddzieleniu^1,6,13, jednak okresy separacji dłuższe niż 4 godziny mogą zmienić skład mleka¹⁴. Chociaż wydaje się, że czas separacji nie ma wpływu na objętość odbioru mleka¹², zaleca się utrzymanie stałego czasu separacji przez cały czas trwania badania. S....

Results

Mleko zostało zebrane zgodnie z opisem podczas odsadzenia od matek Wistar (w wieku około 22 tygodni, ważących od 350 do 400 g), które spożywały dietę kontrolną (AIN-93G, n = 5), wysokobiałkową (40% kazeiny wag/wag., n = 5) lub o wysokiej zawartości błonnika prebiotycznego (21,6% wag/wag., stosunek oligofruktozy i inuliny 1:1, n = 4) przez cały okres ciąży i laktacji. Dawka oksytocyny wynosiła 2 j.m. Mleko zebrano za pomocą kapilarnych rurek, a jedną rurkę odwirowano za pomocą wirówki hematokrytu w celu określenia kremato.......

Discussion

Badania nad składnikami mleka matki nasiliły się wraz ze wzrostem zainteresowania badaniami nad rozwojem we wczesnym okresie życia. Jako jedyne źródło pożywienia w okresie noworodkowym, związki bioaktywne zawarte w mleku są niezbędne dla idealnego wzrostu i rozwoju, zwłaszcza w kontekście zdrowia jelit i układu odpornościowego³. Przedstawiona tutaj metoda jest prostą, nieinwazyjną metodą pobierania mleka od szczura w okresie laktacji w ilościach wystarczających do dalszej analizy, takiej jak profilowanie oligo.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Equipment - Strzykawki do dojenia
1 ml	BD-Canada	309602
Igły 25 G	BD-Canada	305122
18 G	BD-Canada	305196
50 μ l Mikrodozownik Kapilary	Fisher Scientific	21-169D
Oksytocyna (20 jednostek USP / ml)	Bimeda-MTC	1OXY015
PPC Vet Izofluran wziewny środek znieczulający, 250 ml	Fresenius Kabi	M60302	Używany na zlecenie lekarza weterynarii
Sterylny podkład nasączony alkoholem	Dukal	853
Chłonny podkład pod ławkę	VWR	82020-845
Koc Maxi-Therm Hyper/Hypothermia	Cincinnati Sub-Zero	274
Maszyna do znieczulenia gryzoni z parownikiem	Benson Medical Industries Inc.		W zależności od indywidualnych potrzeb laboratoryjnych
Maski dla zwierząt,	Benson Medical Industries, Inc.	50100/50102
Probówki do mikrowirówek	Axygen	MCT-060-C
ChroMini Profesjonalny trymer	Wahl
Equipment - Creamatocrit
StatSpin SafeCrit Plastikowe rurki do mikrohematokrytu (nieobrobione)	Fisher Scientific	22-274-914
Critoseal Taca na uszczelniacz rurki kapilarnej	VWR	470161-478
StatSpin CritSpin Wirówka do mikrohematokrytu	Beckman Coulter, Inc	X00-004999-001