Opisujemy kluczowe etapy biodetekcji za pomocą tranzystorów polowych z polikrzemu nanoprzewodowego, w tym przygotowanie urządzenia oraz immobilizację i potwierdzenie sondy molekularnej DNA na powierzchni nanodrutu, a także warunki do wykrywania DNA.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Opisujemy kluczowe etapy biodetekcji za pomocą tranzystorów polowych z polikrzemu nanoprzewodowego, w tym przygotowanie urządzenia oraz immobilizację i potwierdzenie sondy molekularnej DNA na powierzchni nanodrutu, a także warunki do wykrywania DNA.
Nadzór za pomocą biomarkerów ma kluczowe znaczenie dla wczesnego wykrywania, szybkiej interwencji i zmniejszenia częstości występowania chorób. W niniejszej pracy opisano przygotowanie polikrystalicznych tranzystorów polowych z nanodrutu krzemowego (pSNWFET), które służą jako urządzenia biosensoryczne do wykrywania biomarkerów. Przedstawiono protokół detekcji chemicznej i biomolekularnej z wykorzystaniem tranzystorów pSNWFET. Wykazano, że urządzenie pSNWFET jest obiecującym przetwornikiem do zastosowań biosensorycznych w czasie rzeczywistym, bez znaczników i o bardzo wysokiej czułości. Przewodność kanału źródłowego/drenowego tranzystora pSNWFET jest wrażliwa na zmiany w środowisku wokół powierzchni nanodrutu krzemowego (SNW). Tak więc, poprzez unieruchomienie sond na powierzchni SNW, pSNWFET może być używany do wykrywania różnych celów biodocelowych, od małych cząsteczek (dopamina) po makrocząsteczki (DNA i białka). Unieruchomienie biosondy na powierzchni SNW, które jest procedurą wieloetapową, ma kluczowe znaczenie dla określenia specyficzności biosensora. Istotne jest, aby każdy etap procedury unieruchomienia został wykonany prawidłowo. Zweryfikowaliśmy modyfikacje powierzchni, bezpośrednio obserwując zmianę właściwości elektrycznych pSNWFET po każdym kroku modyfikacji. Dodatkowo wykorzystano rentgenowską spektroskopię fotoelektronów do zbadania składu powierzchni po każdej modyfikacji. Na koniec zademonstrowaliśmy wykrywanie DNA na pSNWFET. Protokół ten zawiera procedury krok po kroku dotyczące weryfikacji unieruchomienia biosondy i późniejszego zastosowania bioczujnika DNA.
Tranzystory polowe z nanodrutu krzemowego (SNWFET) mają zalety ultra-wysokiej czułości i bezpośrednich reakcji elektrycznych na zmiany ładunku otoczenia. Na przykład w SNWFET typu n, gdy ujemnie (lub dodatnio) naładowana cząsteczka zbliża się do nanodrutu krzemowego (SNW), nośniki w SNW są wyczerpane (lub akumulują się). W konsekwencji przewodność SNWFET zmniejsza się (lub wzrasta)1. W związku z tym można wykryć każdą naładowaną cząsteczkę w pobliżu powierzchni SNW urządzenia SNWFET. Niezbędne biomolekuły, w tym enzymy, białka, nukleotydy i wiele cząsteczek na powierzchni komórki, są nośnikami ładunku i mogą być monitorowane za pomocą SNWFET. Dzięki odpowiednim modyfikacjom, w szczególności unieruchomieniu sondy biomolekularnej na SNW, SNWFET może zostać przekształcony w bioczujnik bez znaczników.
Nadzór za pomocą biomarkerów jest kluczowy dla diagnozowania chorób. Jak pokazano w Tabeli 1, w kilku badaniach wykorzystano bioczujniki oparte na NWFET do bezznacznikowego, bardzo czułego i w czasie rzeczywistym wykrywania różnych celów biologicznych, w tym pojedynczego wirusa2, trifosforanu adenozyny i wiązania kinazy3, sygnałów neuronalnych4, jonów metali5,6, toksyn bakteryjnych7, dopaminy8, DNA9-11, RNA12,13, biomarkerów enzymatycznych i nowotworowych14-19, hormonów ludzkich20i cytokin21,22. Badania te wykazały, że bioczujniki oparte na NWFET stanowią potężną platformę wykrywania dla szerokiej gamy gatunków biologicznych i chemicznych w roztworze.
W biosensorach opartych na SNWFET, sonda unieruchomiona na powierzchni SNW urządzenia rozpoznaje konkretny cel biologiczny. Unieruchomienie biosondy zwykle obejmuje szereg kroków i bardzo ważne jest, aby każdy krok był prawidłowo wykonany, aby zapewnić prawidłowe działanie bioczujnika. Opracowano różne techniki analizy składu powierzchni, w tym rentgenowską spektroskopię fotoelektronów (XPS), elipsometrię, pomiar kąta zwilżania, mikroskopię sił atomowych (AFM) i skaningową mikroskopię elektronową (SEM). Metody takie jak AFM i SEM dostarczają bezpośrednich dowodów na unieruchomienie sondy biologicznej na urządzeniu nanoprzewodowym, podczas gdy metody takie jak XPS, elipsometria i pomiar kąta zwilżania są zależne od równoległych eksperymentów przeprowadzonych na innych podobnych materiałach. W tym raporcie opisujemy potwierdzenie każdego kroku modyfikacji przy użyciu dwóch niezależnych metod. XPS służy do badania stężeń określonych atomów na płytkach polikrzemowych, a zmiany właściwości elektrycznych urządzenia są mierzone bezpośrednio w celu potwierdzenia zmian ładunku na powierzchni SNW. Wykorzystujemy biodetekcję DNA, używając polikrystalicznych tranzystorów SNWFET (pSNWFET) jako przykładu w celu zilustrowania tego protokołu. Unieruchomienie sondy DNA na powierzchni SNW obejmuje trzy etapy: modyfikację grupy aminowej na natywnej powierzchni hydroksylowej SNW, modyfikację grupy aldehydowej i immobilizację sondy DNA 5'-aminomodyfikowaną. Na każdym etapie modyfikacji urządzenie może bezpośrednio wykryć zmianę ładunku grupy funkcyjnej unieruchomionej na powierzchni SNW, ponieważ ładunki powierzchniowe powodują lokalne zmiany potencjału międzyfazowego na dielektryku bramki, które zmieniają prąd kanału i przewodność1. Ładunki otaczające powierzchnię SNW mogą elektrycznie modulować właściwości elektryczne urządzenia pSNWFET; w związku z tym właściwości powierzchni SNW odgrywają kluczową rolę w określaniu charakterystyki elektrycznej urządzeń pSNWFET. W raportowanych procedurach unieruchomienie biosondy na powierzchni SNW może być bezpośrednio określone i potwierdzone za pomocą pomiaru elektrycznego, a urządzenie jest przygotowane do zastosowań biosensorycznych.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
1. Produkcja i konserwacja urządzeń pSNWFET
2. Wstępna obróbka urządzenia
3. Unieruchomienie sondy DNA na powierzchni urządzenia
4. Potwierdzenie i analiza modyfikacji powierzchni na pSNWFET
5. Biodetekcja DNA
Uwaga: W typowym eksperymencie, krzywa ID-V BG jest wyznaczana trzy razy, aby upewnić się, że nie zaobserwuje się dalszych zmian.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W literaturze opisano różne tranzystory polowe z nanowłókien półprzewodnikowych (SNWFET), które służą jako przetworniki biosensorów (Tabela 1). Pojedynczo krystaliczne SNWFET (sSNWFET) oraz pSNWFET wykazują porównywalne właściwości elektryczne jako przetworniki w roztworach wodnych i oba typy były stosowane w wielu aplikacjach biosensorycznych. Zaletą urządzenia pSNWFET wykorzystanego w niniejszym badaniu jest prosta i niskokosztowa procedura jego wytwarzania. Na ...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Komercjalizacja odgórnych i oddolnych podejść do produkcji sSNWFET jest uważana za trudną ze względu na koszt32,33, kontrolę pozycji SNW34,35 i niską skalę produkcji36. Z kolei wytwarzanie tranzystorów pSNWFET jest proste i tanie37. Dzięki podejściu odgórnemu i połączeniu z techniką formowania przekładki ścian bocznych (ilustracja 1), rozmiar SNW można kontrolować, dostosowując czas trwania reaktywnego trawienia plazmowego. Procedury przygotowania nanoprzewodów...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
To badanie było finansowane przez Ministerstwo Nauki i Technologii Tajwanu (104-2514-S-009 -001, 104-2627-M-009-001 i 102-2311-B-009-004-MY3). Dziękujemy National Nano Device Laboratories (NDL) za cenną pomoc podczas produkcji i analizy urządzeń.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Aceton | ECHO | AH-3102 | |
| (3-amonopropylo)trietoksysilan (APTES), ≥ 98% | Sigma-Aldrich | A3648 | Niebezpieczny |
| etanol, bezwodny, 99,5% | ECHO | 484000203108A-72EC | |
| Roztwór aldehydu glutarowego (GA), 50% | Sigma-Aldrich | G7651 | Unikaj lekkiego |
| cyjanoborowodorku sodu, ≥ 95.0% | Fluka | 71435 | Niebezpieczeństwo i rozpływanie |
| się Fosforan sodu trójzasadowy dwunastowodny, ≥ 98% | Sigma | 04277 | |
| Kwas fosforowy, ≥ 99,0% | Fluka | 79622 | Rozpływający |
| fotorezystuł (iP3650) | Tokyo Ohka Kogyo Co., LTD | THMR-iP3650 HP | |
| Syntetyczne oligonukleotydy, oczyszczone HPLC | Protech Technology | ||
| Tris (hydroksymetylo) aminometan (Tris), ≥ 99,8% | USB | 75825 | |
| Keithley 2636 System SourceMeter | Keithley | ||
| SR830 DSP Lock-In Amplifier | Stanford Research Systems | ||
| SR570 Niskoszumowy przedwzmacniacz prądowy | Stanford Research Systems | ||
| Ni PXI Express | National Instruments |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.