Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Ekspresja transgenu za pośrednictwem HSV konstruktów chimerycznych w celu zbadania funkcji behawioralnej heteromerów GPCR u myszy

6.5K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/53717

⸱

9 lipca 2016

 ,  , 
1Department of Psychiatry, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 2Department of Neurology, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 3Friedman Brain Institute, Icahn School of Medicine at Mount Sinai, 4Department of Physiology and Biophysics, Virginia Commonwealth University Medical School

W tym artykule

Podsumowanie

Ten artykuł opisuje, jak wstrzyknąć wektory wirusowe do kory czołowej myszy w celu przetestowania testów behawioralnych, które wymagają tworzenia heteromerycznego GPCR.

Streszczenie

Heteromeryczny kompleks receptorowy pomiędzy 5-HT2A i mGlu2 został zamieszany w niektóre fenotypy behawioralne w mysich modelach psychozy1,2. W związku z tym badanie szczegółów strukturalnych interakcji między 5-HT2A i mGlu2 wpływających na zachowania związane ze schizofrenią stanowi potężne narzędzie translacyjne. Jak wykazano wcześniej, reakcja skurczu głowy (HTR) u myszy jest wywoływana przez leki halucynogenne i ta reakcja behawioralna jest nieobecna u myszy z nokautem 5-HT2A (KO)3,4. Dodatkowo, poprzez warunkową ekspresję receptora 5-HT2A tylko w korze, wykazano, że zależne od receptora 5-HT2A szlaki sygnałowe na korowych neuronach piramidowych są wystarczające do wywołania zachowania drgawek głowy w odpowiedzi na leki halucynogenne3. Wreszcie, wykazano, że reakcja behawioralna drgań głowy wywołana przez halucynogeny DOI i dietyloamid kwasu lizergowego (LSD) jest znacznie zmniejszona u myszy mGlu2-KO5. Odkrycia te sugerują, że mGlu2 jest przynajmniej częściowo niezbędny dla zależnych od receptora 5-HT2A efektów behawioralnych podobnych do psychozy, indukowanych przez leki podobne do LSD. Nie dostarcza to jednak dowodów na to, czy kompleks receptora5-HT 2A-mGlu2 jest niezbędny dla tego fenotypu behawioralnego. Aby odpowiedzieć na to pytanie, wykorzystano konstrukty wirusa opryszczki pospolitej (HSV) do ekspresji mGlu2 lub mGlu2ΔTM4N (chimeryczny konstrukt mGlu2 / mGlu3, który nie tworzy kompleksu receptora 5-HT2A-mGlu2) w korze czołowej myszy mGlu2-KO, aby zbadać, czy ten heteromeryczny kompleks GPCR jest potrzebny do efektów behawioralnych wywołanych przez leki podobne do LSD6.

Wprowadzenie

Halucynogeny, takie jak LSD, psylocybina i meskalina powodują znaczące zmiany w ludzkiej świadomości, poznaniu i emocjach7-9. Inaktywacja sygnalizacji receptora serotoniny 5-HT2A za pomocą metod genetycznych lub farmakologicznych powoduje znacznie osłabione reakcje behawioralne na halucynogeny zarówno u gryzoni3,10, jak i u ludzi11. Chociaż halucynogeny wiążą inne podtypy receptorów8, receptor5-HT 2A jest uważany za niezbędny dla unikalnej aktywności behawioralnej tych substancji chemicznych.

Metabotropowe receptory glutaminianu grupy II (tj. mGlu2 i mGlu3) były przedmiotem znacznego zainteresowania w związku z molekularnym mechanizmem halucynogenów i ich integralną rolą leżącą u podstaw psychozy12. Wcześniej wykazano, że myszy bez ekspresji białka mGlu2 (myszy mGlu2-KO) są niewrażliwe na komórkowe i behawioralne działanie halucynogenów5. Zasugerowano również, że receptory 5-HT2A i mGlu2 tworzą specyficzny kompleks heteromeryczny, za pomocą którego ligandy serotoniny i glutaminianu modulują wzór sprzężenia białka G w żywych komórkach 1,2.

Strukturalnie, domeny transbłonowe (TM) 4 i 5 mGlu2 odgrywają fundamentalną rolę w tworzeniu heteromerycznym z receptorem 5-HT2A 5. Ponadto dalsze badania wykazały, że trzy reszty znajdujące się na wewnątrzkomórkowym końcu TM4 mGlu2 są niezbędne do utworzenia heterokompleksu receptora 5-HT2A-mGlu2 w żywych komórkach6.

Na podstawie tych wyników zaobserwowanych w heterologicznych systemach ekspresji, tutaj opisujemy użycie za pośrednictwem HSV ekspresji chimerycznych konstruktów mGlu2 i mGlu2/mGlu3 typu dzikiego w korze czołowej myszy mGlu2-KO, aby sprawdzić, czy heteromeryczne tworzenie się między 5-HT2A i mGlu2 jest konieczne dla zachowania drgań głowy wywołanego przez halucynogennych agonistów receptora 5-HT2A.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

UWAGA: Wszystkie procedury związane z hodowlą i opieką nad zwierzętami zostały przeprowadzone zgodnie z rozporządzeniem Instytucjonalnego Komitetu ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC) Icahn School of Medicine w Mount Sinai. Pamiętaj, aby używać sterylnych rękawiczek przez cały czas trwania zabiegu.

1. Przygotowanie leków i wirusów

  1. Przygotowanie leku
    1. Przygotować 15,0 ml środka znieczulającego ketamina/ksylazyna, rozpuszczając 1,35 ml 100 mg/ml ketaminy i 0,75 ml 20 mg/ml ksylazyny w 12,9 ml 0,9% roztworu soli fizjologicznej. Dokładnie wymieszaj roztwór.
  2. Przygotowanie wirusa
    1. Sklonuj konstrukty mGlu2 i mGlu2ΔTM4N do wektora wirusa opryszczki pospolitej (HSV) zgodnie ze standardowymi protokołami opisanymi wcześniej6. Upakuj cząsteczki wirusa zgodnie z wcześniejszym opisem6,13,14. Substytucja reszt Ala-6774,40, Ala-6814,44 i Ala6854,48 w mGlu2 dla Ser6864,40, Phe6904,44 i Gly-6944,48 w mGlu3 (HA-mGlu2ΔTM4N) została opisana wcześniej6,
      UWAGA: Wcześniej wykazano, że chimeryczny konstrukt HA-mGlu2ΔTM4N ulega ekspresji w błonie plazmatycznej z nienaruszoną sygnalizacją zależną od białka G6.
    2. Wektory wirusowe należy przechowywać w temperaturze -80 °C, gdy nie są używane. Rozmrozić wektor wirusowy na lodzie, a następnie podzielić na 10 μl podwielokrotności. Przed zabiegiem chirurgicznym przechowywać na lodzie.

2. Chirurgia

  1. Przygotowanie do zabiegu
    1. Zważyć mysz i wstrzyknąć jej odpowiednią dawkę koktajlu ketamina/ksylazyna (szczegółowe informacje, patrz 1.1.1).
    2. Sprawdź mysz, aby zobaczyć, czy jest odpowiednio znieczulona, ściśnij stopę i ogon, aby uzyskać reakcję bólu, jeśli nie jest w stanie wywołać odpowiedzi, mysz jest odpowiednio znieczulona.
    3. Ogol głowę myszy od podstawy czaszki do czubka nosa za pomocą maszynki do strzyżenia. Następnie nałóż żel okulistyczny na mysz, aby zapobiec ślepocie myszy.
    4. Załadować każdą strzykawkę na ramkę stereotaktyczną. Następnie przechyl prostopadłą część każdego ramienia ramy stereotaktycznej tak, aby były oddalone o 10 stopni od normalnej. Upewnij się, że ramiona są przechylone, tak aby igły były skierowane do siebie.
    5. Oczyścić każdą strzykawkę, wypełniając igłę 70% etanolem. Napełnić igłę co najmniej trzy razy, aby upewnić się, że strzykawka jest czysta.
    6. Po oczyszczeniu igły przepłukać igłę, napełniając igłę podwójnie destylowanymH2O. Po przepłukaniu napełnić każdą igłę 1,3 μl podwójnie destylowanegoH2O. Przekręcić tłok strzykawki, aby uwolnić 0,3 μl podwójnie destylowanegoH2O. Jeśli woda skrapla się na końcu igły, ostrożnie wytrzyj wodę. Jeśli nic nie wydostaje się ze strzykawki, należy całkowicie wcisnąć tłok w dół, a następnie powtórzyć czyszczenie strzykawki.
    7. Po napełnieniu wodą należy wyciągnąć strzykawkę, napełniając strzykawkę 0,5 μl powietrza.
    8. Gdy powietrze i woda znajdą się w strzykawce, ostrożnie napełnij strzykawkę 1,3 μl roztworu wirusa. W tym momencie należy upewnić się, że całkowita objętość w strzykawce wynosi 2,8 μl. Ponownie przekręcić końcówkę strzykawki, aby uwolnić 0,3 μl wirusa. Jeśli płyn skrapla się na końcu igły, ostrożnie zetrzyj płyn. Jeśli nic nie wydostaje się ze strzykawki, należy całkowicie wcisnąć tłok w dół, a następnie powtórzyć czyszczenie strzykawki.
  2. chirurgia
    1. Przymocuj mysz do ramki stereotaktycznej, upewniając się, że ramka stereotaktyczna jest wyregulowana tak, aby czaszka była wypoziomowana i płaska. Nałóż povodine-jod na odsłoniętą skórę głowy. Za pomocą skalpela wykonaj strzałkowe nacięcie wzdłuż linii środkowej czaszki w odsłoniętym ogolonym obszarze. Następnie przymocuj zaciski biurety do skóry w miejscu nacięcia, aby upewnić się, że czaszka pozostaje odsłonięta.
    2. UżyjH2O2, aby rozpuścić okostną, aby odsłonić szwy czaszki. Teraz, gdy bregma i szwy są widoczne, pamiętaj o wyregulowaniu ramy stereotaktycznej, aby upewnić się, że czaszka jest wypoziomowana.
    3. Wyrównać końcówki igieł strzykawek z bregmą i zanotować współrzędne bregmy. Oblicz współrzędne miejsca, w którym zostaną wkłute igły.
      1. Dla płaszczyzny Rostral-Cauldal (R-C) dodać 1,6 mm do zarejestrowanych współrzędnych R-C bregma (+1,6 z Bregmy). Dla płaszczyzny grzbietowo-brzusznej (D-V) odejmij 2,4 mm od zarejestrowanych współrzędnych D-V bregma (-2,4 od Bregmy).
      2. Na koniec, dla płaszczyzny przyśrodkowej bocznej (M-L), dodaj 2,6 mm do zarejestrowanych współrzędnych M-L bregma (+2,6 od Bregma). Dla wszystkich współrzędnych należy zapisać zarówno lewą, jak i prawą współrzędną, ponieważ jest to wstrzyknięcie dwustronne.
    4. Doprowadź igły do żądanych współrzędnych. Zaznacz miejsca, w które mają zostać wbite igły i za pomocą wiertła wywierć zaznaczone obszary.
    5. Za pomocą aplikatora z bawełnianą końcówką zetrzyj nadmiar krwi lub fragment kości.
    6. Przyłóż igły do czaszki, gdzie końcówki igieł dotykają powierzchni mózgu. Następnie opuść igły do żądanych współrzędnych, powoli je obniżając.
    7. Gdy igły znajdą się w żądanych współrzędnych, powoli wstrzykiwać zawartość strzykawki, przekręcając tłok igły o 0,1 μl na minutę w ciągu 5 minut (łącznie 0,5 μl).
    8. Po wykonaniu wstrzyknięcia należy pozostawić strzykawkę w korze mózgowej na kolejne 5 minut.
  3. Zamykanie/Pielęgnacja
    1. Usuwaj igły z kory myszy równomiernie i powoli. Następnie wyjmij mysz z ramki stereotaktycznej.
    2. Nałóż cyjanoakrylan (klej skórny) na podstawowe płaty skóry z nacięcia, a następnie za pomocą kleszczy chwyć płaty skóry i umieść je razem.
    3. Pozostaw cyjanoakrylan do wyschnięcia. Umieść mysz w klatce nad poduszką grzewczą (poduszka grzewcza jest opcjonalna, jeśli sala operacyjna jest utrzymywana w temperaturze pokojowej 37 °C - w przeciwnym razie nie jest to konieczne). Pamiętaj, aby umieścić mysz na ręczniku papierowym, aby upewnić się, że pościel nie przylega do miejsca operacji.
    4. W zależności od długości zabiegu chirurgicznego należy upewnić się, że myszy są poza narkozą w ciągu 30 - 60 minut po zabiegu. Po operacji zwierzę umieszcza się je we własnej klatce i monitoruje do momentu utraty przytomności, zanim wróci do swojego pokoju, aby dojść do siebie. Nie stosuje się żadnych leków przeciwbólowych po operacji, ponieważ mogą one zmienić wyniki naszych eksperymentów poprzez modyfikację niektórych szlaków biochemicznych w mózgu. Jednak zwierzęta są monitorowane do czasu wyzdrowienia ze znieczulenia w dniu operacji i codziennie po operacji pod kątem objawów infekcji i oceny bólu/dystresu.

3. Eksperyment z reakcją głowy na Twitchu

  1. Konfiguracji
    1. Przeprowadź wszystkie testy behawioralne między 10:00 a 14:00, 2 - 3 dni po stereotaktycznym wstrzyknięciu cząstek wirusa.
    2. Rozpuścić (±)-1-(2,5-dimetoksy-4-jodofenylo)-2-aminopropan chlorowodorek (DOI) w 0,9% roztworze soli do 2,0 mg/kg. Przygotuj również 0,9% roztwór soli fizjologicznej.
    3. Przygotuj klatkę domową (28 x 18 x 15 cm) bez pościeli i za pomocą statywu wyreguluj kamerę tak, aby view kamery wideo znajdował się bezpośrednio nad klatką domową.
    4. Przyzwyczaj myszy do pokoju na co najmniej 4 godziny przed rozpoczęciem eksperymentu.
    5. Skonfiguruj kamerę, aby nagrywać drganie głowy.
  2. eksperyment
    1. Ustaw kamerę tak, aby znajdowała się bezpośrednio nad klatką domową. Skalibruj kamerę tak, aby cała klatka domowa znajdowała się w polu view.
    2. Zważyć mysz i wstrzyknąć jej dootrzewnowo odpowiednią dawkę 0,9% soli fizjologicznej lub DOI (0,01 ml/g). UWAGA: Jeśli mysz waży 25 gramów, należy podać dawkę do całkowitej objętości 0,25 ml.
    3. Umieść każdą mysz z powrotem w klatce domowej na 10 minut. Po 10 minutach umieść mysz na środku pustej klatki domowej i sprawdź, czy w polu widzenia kamery nie ma martwych punktów. Naciśnij przycisk nagrywania na kamerze. Opuść pokój.
      UWAGA: Ruchy myszy i różne reakcje behawioralne w nich (drganie głowy, drapanie w uchu itp. Proszę zapoznać się z tabelą danych uzupełniających 1 Gonzalez-Maeso i wsp. 2007 dla pełnej listy reakcji behawioralnych wywołanych przez DOI.)3, będzie nagrywany przez 30 minut. Dlatego ważne jest, aby w rejestrowanym polu widzenia nie było martwych punktów.
    4. Po 30 minutach zatrzymaj nagrywanie na kamerze i umieść mysz z powrotem w oryginalnej klatce domowej. Powtórz ten proces dla każdej myszy.
  3. recenzja
    1. Niech każdy sędzia przejrzy taśmy bez względu na warunki eksperymentalne u myszy (np. leki używane podczas eksperymentu z drganiem głowy lub wirusa używanego podczas wstrzyknięcia wewnątrzczaszkowego)). Ręcznie nagrywaj każde drgnięcie głowy w całym filmie.
      UWAGA: Drganie głowy definiuje się jako szybki ruch potrząsania głową wykonywany przez mysz (dodatkowe wideo).
    2. Dla każdej myszy uśrednij końcową odpowiedź HTR z trzech sum sędziów niewidomych. Następnie pogrupuj te wartości według warunków eksperymentalnych i przeprowadź analizę statystyczną (tj. test t lub ANOVA).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Poprzednie doniesienia wykazują, że mysia reakcja behawioralna w postaci potrząsania głową jest wywoływana w sposób wiarygodny i silny przez halucynogeny, a występuje ona w stopniu zerowym u myszy 5-HT2A-KO3. Ponadto wykazano, że reakcja potrząsania głową wywołana przez halucynogenne agoniści 5-HT2A, takie jak DOI i LSD, była znacznie zmniejszona u myszy mGlu2-KO5. Jednakże, mimo że poprzednie wyniki przekonująco dowodzą, iż 5-HT2A i ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Wraz z wcześniejszymi odkryciami na myszach mGlu2-KO5, wyniki z chimerycznymi konstruktami mGlu2 i mGlu2/mGlu3, które nie tworzą kompleksu receptora 5-HT2A-mGlu2 w hodowanych komórkach, sugerują, że kompleks receptora heteromerycznego 5-HT2A-mGlu2 w korze czołowej myszy jest potrzebny do wywołania drgań głowy przez halucynogenny 5-HT2A podobny do LSD agonistów receptorów. Ograniczeniem tej metody jest to, że nie mierzy ona bliskiej bliskości molekularnej na poziomie subkomórkow...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

NIH R01MH084894 uczestniczył w finansowaniu tego badania. Chcielibyśmy podziękować doktorom Yasmin Hurd i Scottowi Russo z Mount Sinai School of Medicine za przekazanie myszy i wykorzystanie ich urządzeń chirurgicznych i behawioralnych podczas kręcenia tej pracy.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
mGlu2 wektor bitronicznego wirusa opryszczki pospolitej (HSV) MIT CoremGlu2 i mGlu2DTM4N poddano subklonowaniu do bicystronicznego wektora wirusa HSV-GFP p1005 + HSV eksprymującego GFP pod kontrolą promotora CMV. Cząsteczki wirusa zostały wyprodukowane przez Viral Core Facility w Instytucie McGoverna (MIT). Aby uzyskać więcej informacji, prosimy o kontakt z dyrektorem, dr Rachael Neve (rneve@mit.edu)
mGlu2Δ Wektor wirusa opryszczki pospolitej (HSV) bicitronic TM4N MIT CoremGlu2 i mGlu2DTM4N poddano subklonowaniu do bicystronicznego wektora wirusa HSV-GFP p1005 + HSV eksprymującego GFP pod kontrolą promotora CMV. Cząsteczki wirusa zostały wyprodukowane przez Viral Core Facility w Instytucie McGoverna (MIT). Aby uzyskać więcej informacji, skontaktuj się z dyrektorem, dr Rachael Neve (rneve@mit.edu)
GFP wektor wirusa opryszczki pospolitej (HSV) MIT CoremGlu2 i mGlu2DTM4N poddano subklonowaniu do bicystronicznego wektora wirusa HSV-GFP p1005 + HSV eksprymującego GFP pod kontrolą promotora CMV. Cząsteczki wirusa zostały wyprodukowane przez Viral Core Facility w Instytucie McGoverna (MIT). Aby uzyskać więcej informacji, prosimy o kontakt z dyrektorem, dr Rachael Neve (rneve@mit.edu)
Xylazine Nr LloydList 4811-20ml, NADA #139-236, kod NDC: 61311-481-101,35 ml ketaminy (100 mg/ml) + 0,75 ml ksylazyny (20 mg/ml) rozcieńcza się w 12,0 ml 0,9% roztworu soli
fizjologicznej Ketamina VedcoKetaVed-10ml, NADA #200-029, NDC Kod(y): 50989-161-061,35 ml ketaminy (100 mg/ml) + 0,75 ml ksylazyny (20 mg/ml) rozcieńcza się w 12,0 ml 0,9% roztworu soli
Żel okulistycznyFisher ScientificNC0550805
Klipsy do burwetFisher ScientificNC9268369
Wodór NadtlenekFisher Scientific19-898-919 
Strzykawka HamiltonFisher Scientific14815203
Hamilton™ Małe wyjmowane igły w piaście (33 Ga)Fisher Scientific14816206
akumulatorowa mikrowiertarkaFisher ScientificNC9089241
Dermabond Klej skórnyFisher ScientificNC0690470
(±)-1-(2,5-dimetoksy-4-jodofenylo)-2-aminopropan chlorowodorek (DOI)Sigma-Aldrich42203-78-1rozpuszczony w 0,9% roztworze soli do stężenia 2,0 mg/kg
fizjologicznej Feather Ostrze chirurgiczne Fisher Scientific NC9032736

Bibliografia

  1. Fribourg, M., et al. Decoding the Signaling of a GPCR Heteromeric Complex Reveals a Unifying Mechanism of Action of Antipsychotic Drugs. Cell. 147 (5), 1011-1023 (2011).
  2. Gonzalez-Maeso, J., et al. Identification of a serotonin/glutamate receptor complex implicated in psychosis. Nature. 452 (7183), 93-97 (2008).
  3. Gonzalez-Maeso, J., et al. Hallucinogens Recruit Specific Cortical 5-HT(2A) Receptor-Mediated Signaling Pathways to Affect Behavior. Neuron. 53 (3), 439-452 (2007).
  4. Gonzalez-Maeso, J., et al. Transcriptome fingerprints distinguish hallucinogenic and nonhallucinogenic 5-hydroxytryptamine 2A receptor agonist effects in mouse somatosensory cortex. J Neurosci. 23 (26), 8836-8843 (2003).
  5. Moreno, J. L., Holloway, T., Albizu, L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Metabotropic glutamate mGlu2 receptor is necessary for the pharmacological and behavioral effects induced by hallucinogenic 5-HT2A receptor agonists. Neurosci Lett. 493 (3), 76-79 (2011).
  6. Moreno, J. L., et al. Identification of Three Residues Essential for 5-HT2A-mGlu2 Receptor Heteromerization and its Psychoactive Behavioral Function. J Biol Chem. 287, 44301-44319 (2012).
  7. Geyer, M. A., Vollenweider, F. X. Serotonin research: contributions to understanding psychoses. Trends Pharmacol Sci. 29 (9), 445-453 (2008).
  8. Nichols, D. E. Hallucinogens. Pharmacol Ther. 101 (2), 131-181 (2004).
  9. Hanks, J. B., Gonzalez-Maeso, J. Animal models of serotonergic psychedelics. ACS Chem Neurosci. 4 (1), 33-42 (2013).
  10. Fiorella, D., Rabin, R. A., Winter, J. C. Role of 5-HT2A and 5-HT2C receptors in the stimulus effects of hallucinogenic drugs. II: Reassessment of LSD false positives. Psychopharmacology (Berl). 121 (3), 357-363 (1995).
  11. Vollenweider, F. X., Vollenweider-Scherpenhuyzen, M. F., Babler, A., Vogel, H., Hell, D. Psilocybin induces schizophrenia-like psychosis in humans via a serotonin-2 agonist action. Neuroreport. 9 (17), 3897-3902 (1998).
  12. Moreno, J. L., Sealfon, S. C., Gonzalez-Maeso, J. Group II metabotropic glutamate receptors and schizophrenia. Cell Mol Life Sci. 66 (23), 3777-3785 (2009).
  13. Kurita, M., et al. HDAC2 regulates atypical antipsychotic responses through the modulation of mGlu2 promoter activity. Nat Neurosci. 15 (9), 1245-1254 (2012).
  14. Kurita, M., et al. Repressive Epigenetic Changes at the mGlu2 Promoter in Frontal Cortex of 5-HT2A Knockout Mice. Mol Pharmacol. 83 (6), 1166-1175 (2013).
  15. Rives, M. L., et al. Crosstalk between GABAB and mGlu1a receptors reveals new insight into GPCR signal integration. Embo J. 28 (15), 2195-2208 (2009).
  16. Milligan, G. The Prevalence, Maintenance and Relevance of GPCR Oligomerization. Mol Pharmacol. (84), Epub ahead of print 158-169 (2013).
  17. Ferre, S., et al. G protein-coupled receptor oligomerization revisited: functional and pharmacological perspectives. Pharmacol Rev. 66 (2), 413-434 (2014).
  18. Gonzalez-Maeso, J. GPCR oligomers in pharmacology and signaling. Mol Brain. 4 (1), 20(2011).
  19. Gonzalez-Maeso, J. Family a GPCR heteromers in animal models. Front Pharmacol. 5, 226(2014).
  20. Dragulescu-Andrasi, A., Chan, C. T., De, A., Massoud, T. F., Gambhir, S. S. Bioluminescence resonance energy transfer (BRET) imaging of protein-protein interactions within deep tissues of living subjects. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (29), 12060-12065 (2011).
  21. Calebiro, D., et al. Single-molecule analysis of fluorescently labeled G-protein-coupled receptors reveals complexes with distinct dynamics and organization. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (2), 743-748 (2013).
  22. Fonseca, J. M., Lambert, N. A. Instability of a class a G protein-coupled receptor oligomer interface. Mol Pharmacol. 75 (6), 1296-1299 (2009).
  23. Hern, J. A., et al. Formation and dissociation of M1 muscarinic receptor dimers seen by total internal reflection fluorescence imaging of single molecules. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (6), 2693-2698 (2010).
  24. Hlavackova, V., et al. Sequential inter- and intrasubunit rearrangements during activation of dimeric metabotropic glutamate receptor 1. Sci Signal. 5 (237), 59(2012).
  25. Irannejad, R., et al. Conformational biosensors reveal GPCR signalling from endosomes. Nature. 495 (7442), 534-538 (2013).
  26. Calebiro, D., Nikolaev, V. O., Persani, L., Lohse, M. J. Signaling by internalized G-protein-coupled receptors. Trends Pharmacol Sci. 31 (5), 221-228 (2010).
  27. Celada, P., Puig, M. V., Diaz-Mataix, L., Artigas, F. The hallucinogen DOI reduces low-frequency oscillations in rat prefrontal cortex: reversal by antipsychotic drugs. Biol Psychiatry. 64 (5), 392-400 (2008).
  28. Béïque, J. -C., Imad, M., Mladenovic, L., Gingrich, J. A., Andrade, R. Mechanism of the 5-hydroxytryptamine 2A receptor-mediated facilitation of synaptic activity in prefrontal cortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (23), 9870-9875 (2007).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Ekspresja transgenu HSViniekcja do kory przedczo owejreakcja dr enia g owychirurgia stereotaktycznamyszy z knockoutem mGlu2receptor 5 HT2Afenotypy behawioralneimmunocytochemiaWestern blot
Ekspresja transgenu za pośrednictwem HSV konstruktów chimerycznych w celu zbadania funkcji behawioralnej heteromerów GPCR u myszy
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.