Ten protokół opisuje proces konstruowania hybrydowego systemu owado-maszynowego i przeprowadzania bezprzewodowej elektrycznej stymulacji mięśni lotu wymaganych do kontrolowania ruchu skrętu latającego owada.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ten protokół opisuje proces konstruowania hybrydowego systemu owado-maszynowego i przeprowadzania bezprzewodowej elektrycznej stymulacji mięśni lotu wymaganych do kontrolowania ruchu skrętu latającego owada.
Wzrost liczby cyfrowych urządzeń elektronicznych z obsługą radiową skłonił do użycia małych bezprzewodowych rejestratorów nerwowo-mięśniowych i stymulatorów do badania zachowania owadów podczas lotu. Technologia ta umożliwia opracowanie hybrydowego systemu owad-maszyna z wykorzystaniem platformy żywych owadów opisanej w tym protokole. Ponadto w protokole przedstawiono konfigurację systemu i procedury eksperymentalne swobodnego lotu do oceny funkcji mięśni lotu u owada nieuwiązanego. W celu demonstracji skupiliśmy się na trzecim mięśniu sklerytu pachowego (3Ax), aby kontrolować i osiągać skręt w lewo lub w prawo latającego chrząszcza. Cienka elektroda z drutu srebrnego została wszczepiona w mięsień 3Ax po obu stronach chrząszcza. Były one podłączone do wyjść bezprzewodowego plecaka (tj. elektrycznego stymulatora nerwowo-mięśniowego) zamontowanego na przedpleczu chrząszcza. Mięsień był stymulowany w locie swobodnym poprzez naprzemienną stronę stymulacji (lewą lub prawą) lub zmianę częstotliwości stymulacji. Chrząszcz obrócił się na stronę ipsilateralną, gdy mięsień był stymulowany i wykazywał stopniowaną reakcję na rosnącą częstotliwość. Proces implantacji i kalibracji objętości systemu trójwymiarowej kamery do przechwytywania ruchu należy przeprowadzić ostrożnie, aby uniknąć odpowiednio uszkodzenia mięśnia i utraty orientacji markera. Ta metoda jest bardzo korzystna w badaniu lotu owadów, ponieważ pomaga ujawnić funkcje mięśnia lotnego, który jest przedmiotem zainteresowania w locie swobodnym.
System hybrydowy owado-maszyna, często określany jako owad cyborg lub biobot, to fuzja platformy żywego owada z miniaturowym zamontowanym urządzeniem elektronicznym. Urządzenie elektroniczne, które jest bezprzewodowo sterowane przez zdalnego użytkownika, wysyła sygnał elektryczny do elektrycznej stymulacji miejsc nerwowo-mięśniowych u owada za pomocą wszczepionych elektrod drucianych, aby wywołać pożądane przez użytkownika działania i zachowania motoryczne. We wczesnej fazie tej dziedziny badań naukowcy ograniczyli się do bezprzewodowego rejestrowania działania mięśni owada, używając prostych obwodów analogowych składających się z elementów montowanych na powierzchni1-3. Opracowanie technologii system-on-a-chip z funkcją częstotliwości radiowej umożliwiło nie tylko bezprzewodowe rejestrowanie sygnałów nerwowo-mięśniowych, ale także elektryczną stymulację miejsc nerwowo-mięśniowych u żywych owadów. Obecnie wbudowany mikrokontroler radiowy jest na tyle mały, że można go zamontować na żywych owadach, nie powodując żadnych przeszkód w ich poruszaniu się4-13.
Rozwój wbudowanego mikrokontrolera radiowego pozwala naukowcom określić protokoły stymulacji elektrycznej w celu wywołania pożądanych działań motorycznych w celu kontrolowania lokomocji interesującego owada. Na ziemi naukowcy zademonstrowali kontrolę chodu poprzez stymulację miejsc nerwowo-mięśniowych karaluchów4,12,14, pająków15 i chrząszczy16,17. W powietrzu inicjację i zaprzestanie lotu osiągnięto za pomocą różnych metod, takich jak stymulacja płatów wzrokowych (masywnego skupiska nerwowego oka złożonego) u chrząszczy7,9 i podregionów mózgu u pszczół 18, podczas gdy kontrolę skrętu wykazano poprzez stymulację mięśni czułków i układu nerwowego brzucha u ciem11,19 oraz mięśni lotu u chrząszczy7,9,13. W większości przypadków wbudowany mikrokontroler radiowy był zintegrowany ze specjalnie zaprojektowaną płytką drukowaną w celu wytworzenia miniaturowego stymulatora bezprzewodowego (plecaka), który był montowany na interesującym owadzie. Pozwala to na zastosowanie bezprzewodowej stymulacji elektrycznej do swobodnie chodzącego lub latającego owada. Taki owad montowany na mikrokontrolerze jest tym, co określa się mianem hybrydowego systemu owad-maszyna.
To badanie opisuje eksperymentalne protokoły budowy hybrydowego systemu owado-maszyny, w którym żywy chrząszcz jest wykorzystywany jako platforma dla owadów, i instruuje, jak obsługiwać robota i testować jego systemy sterowania lotem. Trzeci mięsień sklerytowy pachowy (3Ax) został wybrany jako mięsień będący przedmiotem zainteresowania do stymulacji elektrycznej i demonstracji kontroli skrętu w lewo lub w prawo13. Para cienkich elektrod ze srebrnego drutu została wszczepiona zarówno w lewy, jak i prawy mięsień 3Ax. Ponadto na żywym chrząszczu zamontowano plecak. Pozostałe końce drutu elektrodowego zostały podłączone do pinów wyjściowych mikrokontrolera. Plecak był na tyle mały, że chrząszcz mógł go nosić w locie. W ten sposób eksperymentator może zdalnie stymulować mięsień zainteresowania owada w swobodnym locie i badać jego reakcje na stymulacje.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
1. Zwierzę badawcze
2. Implantacja elektrod
3. Bezprzewodowy plecak montażowy
Uwaga: Plecak składał się z wbudowanego mikrokontrolera radiowego na 4-warstwowej płytce FR-4 (1,6 x 1,6 cm2). Plecak był napędzany mikrobaterią litowo-polimerową (3,7 V, 350 mg, 10 mAh). Całkowita masa plecaka wraz z baterią wynosiła 1,2 ± 0,26 g, czyli mniej niż ładowność garbusa (30% z 10 g masy ciała). Plecak był wstępnie zaprogramowany do odbioru komunikacji bezprzewodowej i posiadał dwa kanały wyjściowe.
4. Bezprzewodowy system sterowania
Uwaga: W tym przypadku termin bezprzewodowy system sterowania obejmuje odbiornik pilota zdalnego sterowania, laptop do uruchamiania niestandardowego oprogramowania do sterowania lotem, stację bazową, plecak i system przechwytywania ruchu.
5. Eksperyment z swobodnym lotem
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Procedurę wszczepiania elektrod przedstawiono na ryc. 2. Cienkie elektrody wykonane z drutu srebrnego wszczepiono w mięsień 3Ax chrząszcza poprzez niewielkie otwory wykonane w miękkim kutikule pokrywającym mięsień (ryc. 2d–e). Miękki kutikula ten znajduje się bezpośrednio nad apodemą mięśnia bazalarnego, po usunięciu przedniej części metepisternum (ryc. 2d–c). Elektrody umocowano następnie za pomocą wosku...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Proces implantacji jest ważny, ponieważ wpływa na wiarygodność eksperymentu. Elektrody należy wprowadzić do mięśnia na głębokość 3 mm lub mniejszą, w zależności od wielkości chrząszcza (unikając kontaktu z pobliskimi mięśniami). Jeśli elektrody dotkną pobliskich mięśni, mogą wystąpić niepożądane działania i zachowania motoryczne z powodu skurczu pobliskich mięśni. Obie elektrody powinny być dobrze ustawione, aby nie doszło do zwarć. Podczas topienia i ponownego przelewania wosku pszczelego za pomocą lutownicy eksperyment...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy oświadczają, że nie występują konflikty interesów.
Ten materiał jest oparty na pracach wspieranych przez Nanyang Assistant Professorship (NAP, M4080740), Agency for Science, Technology and Research (A*STAR) Public Sector Research Funding (PSF, M4070190), A*STAR-JST (Japońska Agencja Nauki i Technologii) joint grant (M4070198) oraz Ministerstwo Edukacji Singapuru (MOE2013-T2-2-049). Autorzy pragną podziękować Panu Rogerowi Tan Kay Chia, prof. Low Kin Huat, panu Poon Kee Chun, panu Chew Hock See, panu Lam Kim Kheong i dr Mao Shixinowi ze School of MAE za ich wsparcie w tworzeniu i utrzymywaniu obiektów badawczych. Autorzy dziękują prof. Michelowi Maharbizowi (U.C. Berkeley) za jego rady i dyskusję, prof. Krisowi Pisterowi i jego grupie (U.C. Berkeley) za wsparcie w dostarczeniu GINA wykorzystanego w tym badaniu.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Chrząszcz Mecynorrhina torquata | Królestwo chrząszczy Tajwan | 10 g, 8 cm, nośność wynosi 30% masy ciała Zgoda na import i stosowanie przez Urząd ds. Rolnictwa i Żywności i Weterynarii Singapuru (AVA; Kod HS: 01069000, kod produktu: ALV002). | |
| Bezprzewodowy stymulator plecakowy | Custom | TI CC2431 micocontroler Tablica wykonana jest na zamówienie w oparciu o tablicę GINA od prof. Krisa Pistera s laboratorium. Układ tablicy GINA można znaleźć pod adresem https://openwsn.atlassian.net/wiki/display/OW/GINA | |
| Pilot zdalnego sterowania | Nintendo | Bluetooth, aby wysłać polecenie do operatora laptopa | |
| BeetleCommander v1.8 | Custom. Grupa Maharbiz na Uniwersytecie Kalifornijskim w Berkeley i grupa Sato na NTU | Nawiąż bezprzewodową komunikację plecaka i laptopa operatora. Skonfiguruj parametry bodźca i zapisz dane pozycyjne. Wizualizacja danych lotu. | |
| Stacja bazowa GINA | grupa Kris Pister na UC Berkeley | TI MSP430F2618 i AT86RF231 | |
| System przechwytywania ruchu | VICON | T160 | 8 kamer na arenę lotów o wymiarach 12,5 m x 8 m x 4 m |
| System przechwytywania ruchu | VICON | T40s | 12 kamer na arenę lotów o wymiarach 12,5 x 8 x 4 m |
| Bateria mikro | Fullriver | 201013HS10C | 3,7 V, 10 mAh |
| Taśma odblaskowa retro | Reflexite | V92-1549-010150 | Taśma odblaskowa V92, kolor srebrny |
| Drut izolowany PFA | Systemy A-M | 786000 | 127 i mikro; m goły, 177,8 &mikro; Powlekany m, 3 mm goły srebrny płomień odsłonięty na końcach |
| SMT Micro Header | SAMTEC | FTSH-110-01-L-DV | 0,3 mm x 6 mm, zagiąć w celu wykonania suwaka o długości 3 mm do zamocowania elektrody w nagłówku PCB. |
| pszczeli | Zabezpiecz elektrody | ||
| Wosk dentystyczny | Wierzchołek | Unieruchomij chrząszcza | |
| Szpilka do owadów | ROBOZ | RS-6082-30 | Rozmiar 00; 0,3 mm Średnica pręta; 0,03 mm szerokość końcówki; 38 mm Długość Wykonaj otwory prowadzące elektrody na |
| pęsetie | DUMONT | RS-5015 | Wzór #5; .05 mm x .01 mm Rozmiar końcówki; 110 mm Długość Nożyczki do preparowania i implantacji |
| ROBOZ | RS-5620 | Vannas Micro Nożyczki sprężynowe do preparowania; Prosty; Krawędź tnąca 3mm; 0.1 mm Szerokość końcówki; 3" Długość całkowita Preparacja i implantacja | |
| Lutownica do picia | DAIYO | DS241 | wosku pszczelego |
| CORNING | PC-400D | Topienie wosku pszczelego i wosku dentystycznego | |
| Lampa fluorescencyjna | Philips | TL5 14W | Oświetl całą arenę lotów za pomocą 30 paneli (60 x 60 cm2). Każdy panel posiada 3 lampy. 14 W, 549 mm x 17 mm |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.