Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Badania kompleksu Ga(III) EOB-DTPA i jego analogu znakowanego radioizotopowo o masie 68Ga

9.6K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/54334

⸱

17 sierpnia 2016

 ,  ,  , 
1Clinic of Nuclear Medicine, University Hospital Jena, 2Friedrich Schiller University

W tym artykule

Podsumowanie

Przedstawiono tu procedurę izolacji EOB-DTPA i późniejszej kompleksacji z naturalnym Ga(III) i 68Ga, a także dokładną analizę wszystkich związków i badania nad skutecznością znakowania, stabilnością in vitro i współczynnikiem dystrybucji n-oktanol/woda w radioznakowanym kompleksie.

Streszczenie

Pokazujemy metodę izolacji EOB-DTPA (kwas 3,6,9-triaza-3,6,9-tris(karboksymetylo)-4-(etoksybenzylo)-undekanodioinowy) z jego kompleksu Gd(III) oraz protokoły przygotowania jego nowego nieradioaktywnego, tj. naturalnego kompleksu Ga(III) oraz radioaktywnego kompleksu 68Ga. Zarówno ligand, jak i kompleks Ga(III) scharakteryzowano za pomocą spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR), spektrometrii mas i analizy pierwiastkowej. 68 RozdziałGa otrzymano standardową metodą elucji z generatora 68Ge/68Ga. Przeprowadzono eksperymenty mające na celu ocenę skuteczności znakowania 68Ga EOB-DTPA przy pH 3,8–4,0. Do określenia czystości radiochemicznej znacznika wykorzystano sprawdzone techniki analityczne radiowe TLC (chromatografia cienkowarstwowa) i radiowe HPLC (wysokosprawna chromatografia cieczowa). W pierwszym badaniu lipofilowości znaczników 68Ga określono współczynnik dystrybucji n-oktanol/woda 68gatunków Ga obecnych w roztworze o pH 7,4 metodą ekstrakcji. Przeprowadzono pomiary stabilności znacznika in vitro w różnych pożywkach przy fizjologicznym pH, ujawniając różne tempo rozkładu.

Wprowadzenie

Kwas gadoksetowy, potoczna nazwa kompleksu Gd(III) liganda EOB-DTPA1, jest często stosowanym środkiem kontrastowym w rezonansie magnetycznym wątroby i dróg żółciowych (MRI). 2,3 Ze względu na specyficzny wychwyt przez hepatocyty wątroby i wysoki procent wydalania przez wątrobę i drogi żółciowe, umożliwia lokalizację zmian ogniskowych i guzów wątroby. 2-5 Jednak pewne ograniczenia techniki MRI (np. toksyczność środków kontrastowych, ograniczona możliwość zastosowania u pacjentów z klaustrofobią lub metalowymi implantami) wymagają alternatywnego narzędzia diagnostycznego.

Pozytonowa tomografia emisyjna (PET) to metoda obrazowania molekularnego, w której podawana jest niewielka ilość substancji radioaktywnej (znacznika), na której rejestrowana jest jej dystrybucja w organizmie przez skaner PET. 6 PET to metoda dynamiczna, która pozwala na uzyskanie wysokiej rozdzielczości przestrzennej i czasowej obrazów, a także kwantyfikację wyników, bez konieczności radzenia sobie ze skutkami ubocznymi środków kontrastowych MRI. Wartość informacyjną uzyskanych informacji metabolicznych można dodatkowo zwiększyć poprzez połączenie z danymi anatomicznymi otrzymanymi z dodatkowych metod obrazowania, co najczęściej uzyskuje się za pomocą obrazowania hybrydowego z tomografią komputerową (CT) w skanerach PET/CT.

Struktura chemiczna znacznika odpowiedniego dla PET musi zawierać radioaktywny izotop służący jako emiter pozytonów. Pozytony mają krótką żywotność, ponieważ niemal natychmiast anihilują elektronami otoczek atomowych otaczającej tkanki. Poprzez anihilację emitowane są dwa fotony gamma o natężeniu 511 keV o przeciwnym kierunku ruchu, które są rejestrowane przez skaner PET. 7,8 Aby utworzyć znacznik, nuklidy PET mogą być kowalencyjnie wiązane z cząsteczką, jak ma to miejsce w przypadku 2-deoksy-2-[18F]fluoroglukozy (FDG), najszerzej stosowanego znacznika PET. 7 Jednak nuklid może również tworzyć wiązania koordynacyjne z jednym lub kilkoma ligandami (np. [68Ga]-DOTATOC9,10) lub być stosowany jako rozpuszczone sole nieorganiczne (np. [18F] fluorek sodu11). Ogólnie rzecz biorąc, struktura znacznika ma kluczowe znaczenie, ponieważ determinuje jego biodystrybucję, metabolizm i zachowanie wydalanie.

Odpowiedni nuklid PET powinien łączyć korzystne cechy, takie jak dogodna energia pozytonowa i dostępność, a także okres półtrwania odpowiedni dla zamierzonego badania. Nuklid 68Ga stał się istotną siłą w dziedzinie PET w ciągu ostatnich dwóch dekad. 12,13 Wynika to głównie z jego dostępności za pośrednictwem systemu generatora, który umożliwia etykietowanie na miejscu niezależnie od otoczenia cyklotronu. W generatorze nuklid macierzysty 68Ge jest absorbowany na kolumnie, z której eluuje się nuklid potomny 68Ga, a następnie znakuje go odpowiednim chelatorem. 6,14 Ponieważ nuklid 68Ga występuje jako kation trójwartościowy, podobnie jak Gd(III)10,13, chelatowanie EOB-DTPA za pomocą 68Ga dałoby zamiast tego kompleks o takim samym ogólnym ładunku ujemnym jak kwas gadoksetowy. W związku z tym znacznik 68Ga może łączyć podobną charakterystyczną specyficzność wątrobową z przydatnością do obrazowania PET. Chociaż kwas gadoksetowy jest kupowany i podawany jako sól disodowa, w następnym kontekście będziemy go nazywać Gd[EOB-DTPA], a nieradioaktywny kompleks Ga(III) jako Ga[EOB-DTPA] lub 68Ga[EOB-DTPA] w przypadku składnika znakowanego radioaktywnie dla wygody.

Aby ocenić ich przydatność jako znaczników dla PET, kompleksy metali radioaktywnych muszą być najpierw dokładnie zbadane w eksperymentach in vitro, in vivo lub ex vivo. Aby określić przydatność dla danego problemu medycznego, należy zbadać różne cechy znacznika, takie jak zachowanie biodystrybucji i profil klirensu, stabilność, swoistość narządowa oraz wychwyt komórek lub tkanek. Ze względu na ich nieinwazyjny charakter, oznaczenia in vitro są często wykonywane przed eksperymentami in vivo. Powszechnie uznaje się, że DTPA i jego pochodne mają ograniczoną przydatność jako chelatory dla 68Ga ze względu na brak obojętności kinetycznej tych kompleksów, co powoduje porównywalnie szybki rozkład po podaniu in vivo. 14-20 Jest to spowodowane przede wszystkim przez apo-transferynę działającą jako konkurent dla 68Ga w osoczu. Niemniej jednak zbadaliśmy ten nowy znacznik pod kątem jego możliwego zastosowania w obrazowaniu wątroby i dróg żółciowych, w którym informacje diagnostyczne mogą być dostarczone w ciągu kilku minut po wstrzyknięciu3,4,21-23, co niekoniecznie wymaga długoterminowej stabilności znacznika. W tym celu wyizolowaliśmy EOB-DTPA z kwasu gadoksetowego i wstępnie przeprowadziliśmy kompleksowanie z naturalnym Ga(III), który występuje jako mieszanina dwóch stabilnych izotopów, 69Ga i 71Ga. Otrzymany w ten sposób kompleks posłużył jako nieradioaktywny wzorzec dla następującej chelatacji 68Ga. Zastosowaliśmy sprawdzone metody i jednocześnie oceniliśmy ich przydatność do określenia skuteczności 68Galabeling EOB-DTPA oraz do zbadania lipofilowości nowego znacznika 68Ga i jego stabilności w różnych mediach.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Przygotowanie EOB-DTPA i Ga[EOB-DTPA]

Ostrzeżenie: Przed użyciem należy zapoznać się ze wszystkimi odpowiednimi kartami charakterystyki substancji niebezpiecznych (MSDS) stosowanych rozpuszczalników organicznych, kwasów i zasad. Wszystkie czynności należy wykonywać pod wyciągiem i stosować środki ochrony osobistej (okulary ochronne, rękawice, fartuch laboratoryjny).

  1. Izolacja EOB-DTPA z kwasu gadoksetowego
    1. Umieścić 3 ml 0,25 M roztworu do wstrzykiwań kwasu gadoksetowego do kolby. Dodać 500 mg (5,6 mmol) kwasu szczawiowego do wymieszanego roztworu.
    2. Po mieszaniu przez 1 godzinę przefiltrować zawiesinę przez frytę pod zmniejszonym ciśnieniem. Pozostałość umyć trzykrotnie odpowiednio 3 ml wody.
    3. Połączyć filtraty wodne i wyposażyć roztwór w elektrodę pH. Dodać 12 M kwasu solnego do filtratu, aż pH osiągnie około -0,1.
    4. Usunąć rozpuszczalnik w próżni, aby uzyskać bezbarwną pozostałość. Przechowywać w atmosferze gazu obojętnego.
    5. Pozostałość dokładnie umyć (co najmniej trzy razy) octanem etylu w celu usunięcia nadmiaru kwasu szczawiowego. Wysuszyć pozostałość w próżni.
    6. Ponownie rozpuść pozostałość w 2 ml wody o temperaturze pokojowej, a następnie schłodzić roztwór w łaźni lodowej. Nie usuwając łaźni lodowej, dodawać kroplami 0,5 M wodny roztwór wodorotlenku sodu, aż do zaobserwowania tworzenia się bezbarwnej lepkiej substancji stałej.
    7. Usunąć wodę przez dekantację. Umyj ciało stałe jeszcze dwa razy 1 ml zimnej wody. Wysuszyć ciało stałe w próżni, aby uzyskać pierwszą frakcję produktu.
    8. Wyizolować drugą frakcję produktu z połączonych frakcji zdekantowanej wody za pomocą chromatografii kolumnowej (krzemionka, metanol/woda 4/1). 24 Usunąć rozpuszczalnik w próżni.
    9. Jeżeli otrzymane w ten sposób ciało stałe nie jest czysto białe, należy je ponownie rozpuścić w 1 ml wody, dodać 10 ml etanolu, a następnie 10 ml eteru dietylowego w celu wytrącenia produktu. Przefiltrować przez frytę pod zmniejszonym ciśnieniem i wysuszyć w próżni.
    10. Połącz obie frakcje stałe EOB-DTPA i wykonaj spektroskopowe analizy NMR,25 spektrometryczne26 i pierwiastkowe27.
  2. Synteza Ga[EOB-DTPA]
    UWAGA: Stały chlorek Ga(III) należy przechowywać w suchej, obojętnej atmosferze, ponieważ w kontakcie z powietrzem dochodzi do rozkładu wilgoci lub tłuszczu, co powoduje powstawanie oparów i tworzenie się żółtych, brązowych lub czarnych zanieczyszczeń.
    1. Przygotować 0,11 M roztwór podstawowy, rozpuszczając 1,94 g (11,0 mmol) chlorku Ga(III) w 100 ml wody. Rozcieńczyć 1 ml 25% wodnego roztworu amoniaku w 4 ml wody.
    2. Rozpuścić 80 mg (0,15 mmol) EOB-DTPA w kolbie w 10 ml wody. W razie potrzeby podgrzej rozpuszczalnik do całkowitego rozpuszczenia.
    3. Dodać 1,4 ml (0,15 mmol) roztworu podstawowego chlorku Ga(III). Wyposażyć kolbę w mieszadło i elektrodę pH. Dodawać kroplami rozcieńczony wodny roztwór amoniaku, aż pH roztworu wyniesie około 4,1. Mieszać w temperaturze pokojowej przez 30 minut.
    4. Usunąć rozpuszczalnik w próżni. Umieścić pozostałość w kolbie wyposażonej w destylator z centralną i równoległą boczną szyjką. Wyposaż środkową szyjkę w palec chłodzący, a boczną szyjkę w wylot pompy próżniowej
    5. Podgrzać pozostałość pod zmniejszonym ciśnieniem (125 °C, 0,6 mbar). Okresowo usuwać sublimowany chlorek amonu (widoczny jako biały nalot powierzchni szkła) z chłodzącego palca i destylatora, a także z górnych części kolby lekko wilgotną szmatką. Kontynuuj proces, aż nie będzie widocznego tworzenia się nowego sublimatu.
    6. Aby usunąć końcowe ślady chlorku amonu, przemyj pozostałość trzykrotnie odpowiednio 0,5 ml gorącego metanolu. Wysuszyć bezbarwną pozostałość w próżni. Wykonaj spektroskopowe analizy NMR,25 spektrometrycznemas 26 i pierwiastkowe27.

2. Ogólna procedura etykietowania

UWAGA: Wszystkie eksperymenty obejmujące bezpośredni lub pośredni kontakt z substancjami radioaktywnymi mogą być wykonywane wyłącznie przez przeszkolony personel. Proszę używać odpowiedniego sprzętu ekranującego. Wszelkie odpady radioaktywne należy zbierać oddzielnie, a następnie przechowywać i utylizować zgodnie z obowiązującymi przepisami.

  1. Elucja generatora
    Uwaga: Zastosowano generator 40 mCi 68Ge/68Ga z nuklidem macierzystym związanym jako tlenek na krzemionce dodecylo-3,4,5-trihydroksybenzoesanowej. Elucja i oczyszczanie mogą być przeprowadzane ręcznie lub, jak miało to miejsce w przypadku tej procedury, jako połączony proces zautomatyzowany z wykorzystaniem pompy perystaltycznej i dozownika.
    1. Przygotować roztwory kwasu solnego o stężeniu 5,5 M, 1,0 M i 0,05 M. Przygotować roztwór 5,0 M chlorku sodu zawierający 25 μl 5,5 M kwasu solnego na ml. Przygotować roztwór buforowy o pH 4,6, łącząc 4,1 g octanu sodu, 1 ml HCl (30%) i 2,5 ml lodowatego kwasu octowego i rozcieńczając mieszaninę wodą do 50 ml.
    2. Przygotowanie wkładu PS-H+ należy powoli przepłukać 1 ml 1,0 M kwasu solnego, a następnie 5 ml wody.
    3. Eluować kolumnę krzemionkową generatora za pomocą 4 ml 0,05 M HCl.12 Załadować eluat 68Ga na wkład PS-H+.
    4. Przepłukać wkład 5 ml wody, a następnie osuszyć go 5 ml powietrza. Wypłukać 68Ga z wkładu za pomocą 1 ml 5,0 M zakwaszonego roztworu chlorku sodu. 28
  2. Etykietowanie EOB-DTPA za pomocą 68Ga
    1. Rozpuścić 1 mg (1,9 μmol) EOB-DTPA w 1 ml wody. Z tego roztworu pobrać 100 μl (0,19 μmol) i rozcieńczyć je 9,9 ml wody, aby przygotować 19 μM (10 μg/ml) roztwór podstawowy EOB-DTPA.
    2. Usunąć 50 μl (co odpowiada 22-29 MBq) roztworu zawierającego 68Ga i umieścić w fiolce. Dodać 50 μl (0,5 μg) 19 mM roztworu podstawowego EOB-DTPA i 300 μl buforu, aby podnieść pH do 4,0. Wstrząśnij krótko i inkubuj roztwór w temperaturze pokojowej przez 5 minut. Usunąć podwielokrotność 1-5 μl i poddać analizie HPLC lub TLC.
    3. Przeprowadzić analizę radiową HPLC na kolumnie C18 z odwróconą fazą (RP). 29 Zastosować następującą fazę ruchomą: A - woda/kwas trifluorooctowy (99,9%/0,1%), B - acetonitryl/kwas trifluorooctowy (99,9%/0,1%), gradient: 06 min 80% A → 0% A (0,5 ml/min), 610 min 0% A (0,5 ml/min).
    4. Określ szczytowe intensywności sygnałów radiowych HPLC jako obszar pod krzywą. Obliczyć wydajność znakowania jako czystość radiochemiczną (RCP) znacznika w następujący sposób:
      RCP = AGa-EOB-DTPA/(AGa + AGa-EOB-DTPA) ∙ 100%
      AGa-EOB-DTPA: obszar pod krzywą 68Ga[EOB-DTPA]
      AGa: obszar pod krzywą swobodną 68Ga

3. Efektywność etykietowania

  1. Wykonaj procedury etykietowania zgodnie z opisem w sekcji 2. Stosować stały zakres aktywności wyjściowej 68Ga eluatu, np. 22-29 MBq (40-140 μl, w zależności od świeżości eluatu).
  2. Dodać wymaganą ilość roztworu buforowego, aby dostosować pH do 3,8-4,0 (40-190 μl, w zależności od objętości eluianu 68Ga). Dodać wymaganą ilość roztworu podstawowego liganda (10-70 μl roztworu o stężeniu 19 mM).
  3. Dodać wymagane ilości wody, aby dostosować całkowitą objętość każdej sondy do etykietowania do 1,75 ml. Dokładnie wymieszać i odstawić próbkę na 5 minut w temperaturze pokojowej. Przeprowadzić analizę HPLC zgodnie z opisem w sekcji 2 w celu określenia wydajności etykietowania.
  4. Przeprowadzić procedury znakowania z ilością liganda od 0,1 μg do 0,7 μg w krokach co 0,1 μg. Przeprowadzić eksperymenty w trzech egzemplarzach dla każdego stężenia liganda. Oblicz średnią wydajność i odchylenie standardowe.

4. Stabilność in vitro

  1. Ogólna procedura i przygotowania
    1. Rozpuścić tabletkę soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) w 200 ml wody dejonizowanej, aby przygotować roztwór podstawowy PBS o stężeniu fosforanów 10 mM.
    2. Wykonać etykietowanie 22-29 MBq 68Ga za pomocą 0,5 μl roztworu podstawowego EOB-DTPA, jak opisano w sekcji 2. W zależności od objętości eluatu 68Ga dostosować ilość buforu, jak opisano w sekcji 3. Pobrać próbki roztworu do etykietowania zawierającego 6-12 MBq znacznika w celu wykonania pomiarów stabilności.
    3. Przeprowadzić analizę radiową TLC na płytkach aluminiowych pokrytych żelem krzemionkowym o średnicy 80 mm, używając 0,1 M wodnego roztworu cytrynianu sodu jako eluentu i przeanalizować płytki za pomocą skanera radioaktywności TLC. Rozdział 30 Określ intensywność sygnałów TLC jako obszar pod krzywą. Oblicz RCP znacznika w następujący sposób:
      RCP = AGa-EOB-DTPA/(Abez Ga +A Ga-EOB-DTPA + AGa-koloidalny) ∙ 100%
      AGa-EOB-DTPA: obszar pod krzywą 68Ga[EOB-DTPA]
      Awolny od Ga: obszar pod krzywą swobody 68Ga
      AGa-koloidalny: pole pod krzywą koloidalnego 68Ga
    4. Oblicz RCPt/RCP0 dla każdego punktu czasowego. Wykreślić tak ustandaryzowany RCP w funkcji różnicy czasu od punktu początkowego t = 0 min.
      RCPt = RCP 68Ga[EOB-DTPA] w punkcie czasowym t.
      RCP0 = RCP 68Ga[EOB-DTPA] przy t = 0 min.
  2. Stabilność w roztworze soli fizjologicznej (A) buforowanym fosforanem
    1. Do 65 μl roztworu do znakowania dodać 150 μl roztworu podstawowego PBS i 60 μl roztworu wodorotlenku sodu (0,1 M) w celu podniesienia pH do 7,4. Dokładnie wymieszaj.
    2. Usunąć podwielokrotność 1-5 μl, aby przeprowadzić analizę TLC ("punkt początkowy"). Roztwór należy natychmiast przechowywać w inkubatorze w temperaturze 37 °C i usunąć podwielokrotności w celu przeprowadzenia analizy TLC w reprezentatywnych punktach czasowych przez 3 godziny.
  3. Stabilność w stosunku do nadmiaru apo-transferyny w PBS (B)
    1. Do 120 μl roztworu do znakowania dodać 50 μl roztworu podstawowego PBS i 430 μl roztworu wodorotlenku sodu (0,1 M) w celu podniesienia pH do 7,4. Dodać 40 μl roztworu apo-transferyny (25 mg/ml). Dokładnie wymieszaj.
    2. Usunąć podwielokrotność 1-5 μl, aby przeprowadzić analizę TLC ("punkt początkowy"). Roztwór należy natychmiast przechowywać w inkubatorze w temperaturze 37 °C i usunąć podwielokrotności w celu przeprowadzenia analizy TLC w reprezentatywnych punktach czasowych przez 3 godziny.
  4. Stabilność w surowicy ludzkiej (C)
    1. Do 500 μl surowicy ludzkiej dodać 25 μl roztworu do znakowania i 45 μl roztworu wodorotlenku sodu (0,1 M), aby podnieść pH do 7,4. Dokładnie wymieszaj.
    2. Usunąć podwielokrotność 1-5 μl, aby przeprowadzić analizę TLC ("punkt początkowy"). Roztwór należy natychmiast przechowywać w inkubatorze w temperaturze 37 °C i usunąć podwielokrotności w celu przeprowadzenia analizy TLC w reprezentatywnych punktach czasowych przez 3 godziny.

5. Wyznaczanie współczynnika dystrybucji LogD

  1. Wykonaj procedury etykietowania zgodnie z opisem w sekcji 2. Do 50 μl roztworu do znakowania dodać 20 μl roztworu podstawowego PBS i 170 μl roztworu wodorotlenku sodu (0,1 M) w celu podniesienia pH do 7,4.
  2. Pobrać 200 μl z tego roztworu i umieścić go w plastikowej V-fiolce. Dodać 200 μl n-oktanolu. Zamknąć fiolkę i wirować przez 2 minuty. Następnie odwirować próbkę o masie 1 600 x g przez 5 minut.
  3. Usunąć trzy egzemplarze po 40 μl z fazy n-oktanolowej i fazy wodnej i umieścić je w oddzielnych V-fiolkach. Uważaj, aby nie pomieszać warstw.
  4. Mierz aktywność każdej próbki w liczniku studzienek gamma przez 30 sekund. Dla każdej próbki natychmiast powtórzyć pomiar dwa razy i na tej podstawie obliczyć średnią aktywność Ᾱt w zliczeniach na minutę (cpm). Wymień uzyskane w ten sposób Ᾱt,W1, Ᾱt,W2 i Ᾱt,W3 (aktywności w próbkach wodnych) oraz Ᾱt,O1, Ᾱt,O2, Ᾱt,O3 (aktywności w n-oktanolu) wraz z odpowiednim punktem czasowym t ich oznaczenia.
  5. Określ punkt czasowy pomiaru ostatniej próbki jako t0. Określ i wymień Δt w min, obliczając Δt = t-t0. Wykonaj korekcję zaniku Ᾱt, używając następującego wzoru:
    Ᾱ0 = Ᾱt · 2(Δt/68 min).
  6. Oblicz Ᾱ0,W jako średnią Ᾱ0,W1, Ᾱ0,W2 i Ᾱ0,W3 oraz Ᾱ0,O jako średnią Ᾱ0,O1, Ᾱ0,O2 i Ᾱ0,O3. Oblicz logD za pomocą następującego wzoru:
    logD = log[(Ᾱ0,O · 40 μg)/(Ᾱ0,W · 33 μg)].
  7. Wykonaj cały eksperyment w trzech egzemplarzach i oblicz średnią logD wraz z jej odchyleniem standardowym.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Przeanalizowano ligand EOB-DTPA oraz nieradiacyjny kompleks Ga(III) poprzez 1H i 13C{1Spektroskopia H NMR, spektrometria mas i analiza elementarna. Wyniki wymienione w Tabela 1 i przedstawione na Rysunki 1-6 zweryfikuj czystość substancji.

Elucja generatora 68Ge/68Ga pozwoliła na otrzymanie roztworów zawierających 400-600 MBq 6...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

EOB-DTPA jest dostępny w drodze wieloetapowej syntezy33 , ale równie dobrze może być izolowany z dostępnych środków kontrastowych zawierających kwas gadoksetowy. W tym celu centralny jon Gd(III) można wytrącić nadmiarem kwasu szczawiowego. Po usunięciu szczawianu Gd(III) i kwasu szczawiowego ligand można wyizolować przez wytrącanie w zimnej wodzie o pH 1,5. Jednakże w celu zwiększenia wydajności można przeprowadzić chromatografię kolumnową filtratu zamiast niego lub jako procedurę następczą. Każda z metod daje...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Autorzy nie mają żadnych podziękowań.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
primovistBayer-0,25 M
chlorek galu(III)Sigma-Aldrich Co.
woda (dejonizowana)-urządzenia do dejonizacji wody wodociągowej firmy Auma-Tec GmbH
kwas solny 12 MVWR20252.29
wodorotlenek soduPolskie Odczynniki Chemiczne S.A.
Kwas szczawiowySigma-Aldrich Co.75688
octan etyluBrenntag GmbH10010447
żel krzemionkowyMerck KGaA1.10832.9025Geduran Si 60 0,063-0,2  mm
Żel krzemionkowy TLC 60 F254Merck KGaA1.16834.0001
metanolVWR20903.55
etanolBrenntag GmbH10018366
eiethyletherVWR23807.468przechowywany na płytkach KOH
roztwór amoniaku (25%)VWR1133.1
Elektroda pHVWR662-1657
jednostka mieszająco-grzewczaPompa Heidolph505-20000-00
Ilmvac GmbH322002
fryta- niestandardowa konstrukcja
Spektrometr NMR Spektrometrmasowy Bruker Coorporation-UltraShield 400
Thermo Fisher Scientific Inc.-
analizator elementarnyHekatech GmbH Analysentechnik-EuroVectorEA 3000 CHNS
deuterowana D2Oeuriso-topD21499,90% D
Materiał/Sprzęt wymagany do procedur etykietowania
68Ge/68GaITG Isotope Technologies Garching GmbHA150
ScintomicsGmbH-Variosystem
kwas solny 30% (suprapur)Merck KGaA1.00318.1000
woda (ultrapur)Merck KGaA1.01262.1000
chlorek sodu (suprapur)Merck KGaA1.06406.0500
octan sodu (suprapur)Merck KGaA1.06264.0050
lodowaty kwas octowy (suprapur)Merck KGaA1.00066.0250
dwuwodny cytrynian soduVEB Laborchemie Apolda10782>98,5%
PS-H+ Cartridge (S)Macherey-Nagel731867Chromafix
apo-TransferrinSigma-Aldrich Co.Bufor T2036
PBS (tabletki)Sigma-Aldrich Co.79382
surowica ludzkaSigma-Aldrich Co.H4522z ludzkich męskich kolb plazmowych AB
, kolumn, etc.< / em>niestandardowa elektroda
pHKnick Elektronische Messgerä te GmbH & Co. KG765-Set
pompa binarna (HPLC)Hewlett-PackardG1312A (HP 1100)
Detektor UV/Vis (HPLC)Hewlett-PackardG1315A (HP 1100)detektor
radioaktywny (HPLC)EGRC Berthold
HPLC C-18-PFPkolumna Advanced Chromatography Technologies Ltd.ACE-1110-1503/A100528
Fiolki szklane HPLCGTG Glastechnik Graefenroda GmbH8004-HP-H/i3µ
pipetaEppendorf-fiolki
plastikoweSarstedt AG & Co.6542.007
fiolki plastikoweGreiner Bio-One International GmbH717201
activimeterMED Nuklear-Medizintechnik DresdenGmbH-Isomed2010
pęsetaprojektowania
inkubatorHeraeus Instruments GmbH51008815
mieszalnik wirowyFisons-Whirlimixer
wirówkaHeraeus Instruments GmbH75003360
licznik studni gammaMED Nuklear-Medizintechnik DresdenGmbH-Isomed 2100
woda do chromatografiiMerck KGaA1.15333.2500
acetonitryl do chromatografiiMerck KGaA1.00030.2500
kwas trifluorooctowySigma-Aldrich91707
Skaner radioaktywności TLCraytest Isotopenmessgerä te GmbHB00003875wyposażona w detektor tworzywa sztucznego beta
450898810925429 woda generator System pomp i dozowników do na zamówienie

Bibliografia

  1. Weinmann, H. J., et al. A new lipophilic gadolinium chelate as a tissue-specific contrast medium for MRI. Magn. Reson. Med. 22, 233-237 (1991).
  2. Stroszczynski, C., et al. Aktueller Stand der MRT-Diagnostik mit leberspezifischen Kontrastmitteln. Radiologe. 44, 1185(2004).
  3. Van Beers, B. E., Pastor, C. M., Hussain, H. K. Primovist, Eovist - what to expect. J. Hepatol. 57, 421-429 (2012).
  4. Zech, C. J., Herrmann, K. A., Reiser, M. F., Schoenberg, S. O. MR Imaging in Patients with Suspected Liver Metastases: Value of Liver-specific Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Magn. Reson. Med. Sci. 6, 43-52 (2007).
  5. Leonhardt, M., et al. Hepatic Uptake of the Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA: Role of Human Organic Anion Transporters. Drug Metab. Dispos. 38, 1024-1028 (2010).
  6. Wadas, T. J., Wong, E. H., Weisman, G. R., Anderson, C. Coordinating Radiometals of Copper, Gallium, Indium, Yttrium, and Zirconium for PET and SPECT Imaging of Disease. J. Chem. Rev. 110, 2858-2902 (2010).
  7. Ametamey, S. M., Honer, M., Schubiger, P. A. Molecular Imaging with PET. Chem. Rev. 108, 1501-1516 (2008).
  8. Cutler, C. S., Hennkens, H. M., Sisay, N., Huclier-Markai, S., Jurisson, S. S. Radiometals for Combined Imaging and Therapy. Chem. Rev. 113, 858-883 (2013).
  9. Henze, M., et al. PET Imaging of Somatostatin Receptors Using [68GA]DOTA-D-Phe1-Tyr3-Octreotide: First Results in Patients with Meningiomas. J. Nucl. Med. 42, 1053-1056 (2001).
  10. Hofmann, M., et al. Biokinetics and imaging with the somatostatin receptor PET radioligand 68Ga-DOTATOC: preliminary data. Eur. J. Nucl. Med. 28, 1751-1757 (2001).
  11. Blau, M., Nagler, W., Bender, M. A. Fluorine-18: a new isotope for bone scanning. J. Nucl. Med. 3, 332-334 (1962).
  12. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium Radiopharmaceutical Chemistry. Int. J. Radiat. Appl. Instrum. B. 16, 435-448 (1989).
  13. Rösch, F. Past, present and future of 68Ge/68Ga generators. Appl. Radiat. Isot. 76, 24-30 (2013).
  14. Liu, S. The role of coordination chemistry in the development of target-specific radiopharmaceuticals. Chem. Soc. Rev. 33, 445-461 (2004).
  15. Haubner, R., et al. Development of (68)Ga-labelled DTPA galactosyl human serum albumin for liver function imaging. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 40 (68), 1245-1255 (2013).
  16. Yang, W., Zhang, X., Liu, Y. Asialoglycoprotein Receptor-Targeted Radiopharmaceuticals for Measurement of Liver Function. Curr. Med. Chem. 21, 4-23 (2014).
  17. Chauhan, K., et al. 68Ga based probe for Alzheimer's disease: synthesis and preclinical evaluation of homodimeric chalcone in β-amyloid imaging. Org. Biomol. Chem. 12, 7328-7337 (2014).
  18. Chakravarty, R., Chakraborty, S., Dash, A., Pillai, M. R. A. Detailed evaluation on the effect of metal ion impurities on complexation of generator eluted 68Ga with different bifunctional chelators. Nucl. Med. Biol. 40, 197-205 (2013).
  19. Clevette, D. J., Orvig, C. Comparison of ligands of differing denticity and basicity for the in vivo chelation of aluminum and gallium. Polyhedron. 9, 151-161 (1990).
  20. Prinsen, K., et al. Development and evaluation of a 68Ga labeled pamoic acid derivative for in vivo visualization of necrosis using positron emission tomography. Bioorg. Med. Chem. 18, 5274-5281 (2010).
  21. Vogl, T. J., et al. Liver tumors: comparison of MR imaging with Gd-EOB-DTPA and Gd-DTPA. Radiology. 200, 59-67 (1996).
  22. Reimer, P., et al. Phase II clinical evaluation of Gd-EOB-DTPA: dose, safety aspects, and pulse sequence. Radiology. , 177-183 (1996).
  23. Ba-Ssalamah, A., et al. MRT der Leber. Radiologe. 44, 1170-1184 (2004).
  24. Scott, R. P. W. Journal of Chromatography Library. 22A, Elsevier Scientific Publishing Co. A137-A160 (1983).
  25. Reichenbaecher, M., Popp, J. Strukturanalytik organischer und anorganischer Verbindungen. , 1st, B. G. Teubner Verlag. Wiesbaden. (2007).
  26. Gross, J. H. Mass Spectrometry: A Textbook. , Springer. (2004).
  27. Ma, T. S., Rittner, R. C. Modern Organic Elemental Analysis. , Marcel Dekker, Inc. (1979).
  28. Mueller, D., et al. Simplified NaCl Based 68Ga Concentration and Labeling Procedure for Rapid Synthesis of 68Ga Radiopharmaceuticals in High Radiochemical Purity. Bioconjugate Chem. 23, 1712-1717 (2012).
  29. Roberts, T. R. Radio-column chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 103-132 (1978).
  30. Roberts, T. R. Radio-thin-layer chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 45-83 (1978).
  31. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium radiopharmaceutical chemistry. Nucl. Med. Biol. 16, 435-448 (1989).
  32. Notni, J., Plutnar, J., Wester, H. J. Bone-seeking TRAP conjugates: surprising observations and their implications on the development of gallium-68-labeled bisphosphonates. EJNMMI Res. 2, 13(2012).
  33. Schmitt-Willich, H., et al. Synthesis and Physicochemical Characterization of a New Gadolinium Chelate: The Liver-Specific Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Inorg. Chem. 38, 1134-1144 (1999).
  34. 68Ga generator for positron emission tomography. , DE102010037964B3 (2012).
  35. Simecek, J., Hermann, P., Wester, H. J., Notni, J. How is 68Ga Labeling of Macrocyclic Chelators Influenced by Metal Ion Contaminants in 68Ge/68Ga Generator Eluates? ChemMedChem. 8, 95-103 (2013).
  36. Baur, B., et al. Synthesis, Radiolabelling and In Vitro Characterization of the Gallium-68-, Yttrium-90- and Lutetium-177-Labelled PSMA Ligand, CHX-A''-DTPA-DUPA-Pep. Pharmaceuticals (Basel). 7, 517-529 (2014).
  37. Boros, E., et al. RGD conjugates of the H2dedpa scaffold: synthesis, labeling and imaging with 68Ga. Nucl. Med. Biol. 39, 785-794 (2012).
  38. Beck, W. S. Hematology. , 5th, MIT press. Cambridge, Massachusetts. (1998).
  39. Patel, V., Morrissey, J. Practical and Professional Clinical Skills. , 1, Oxford University Press Inc. New York. (2001).
  40. Bartke, A., Constanti, A. Basic Endocrinology. , 1, CRC Press. (1998).
  41. Bernstein, L. R. Mechanisms of Therapeutic Activity for Gallium. Pharmacol. Rev. 50, 665-682 (1998).
  42. Clausen, J., Edeling, C. J., Fogh, J. 67Ga Binding to Human Serum Proteins and Tumor Components. Cancer Res. 34, 1931-1937 (1974).
  43. Dumont, R. A., et al. Novel 64Cu- and 68Ga-Labeled RGD conjugates show improved PET imaging of αvβ3 integrin expression and facile radiosynthesis [Erratum to document cited in CA156:116856. J. Nucl. Med. 52, 1498(2011).
  44. Pohle, K., et al. 68Ga-NODAGA-RGD is a suitable substitute for 18F-Galacto-RGD and can be produced with high specific activity in a cGMP/GRP compliant automated process. Nucl. Med. Biol. 39, 777-784 (2012).
  45. Notni, J., Pohle, K., Wester, H. J. Be spoilt for choice with radiolabelled RGD peptides: Preclinical evaluation of 68 Ga-TRAP(RGD)3. Nucl. Med. Biol. 40, 33-41 (2013).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

znaczniki z galem-68kompleks EOB-DTPAznakowanie radioaktywneanaliza radio-HPLCanaliza radio-TLCwspółczynnik rozdziałustabilność in vitroizolacja liganduczystość radiochemiczna
Badania kompleksu Ga(III) EOB-DTPA i jego analogu znakowanego radioizotopowo o masie 68Ga
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.