Opisano protokół przygotowania i charakterystyki lipofilowych miceli 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-fosphoethanolamine-N-[amino(glikol polietylenowy)-2000] (DSPE-PEG).
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Przygotowanie i charakterystyka lipofilowych miceli prolekowych doksorubicyny
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Micele były z powodzeniem wykorzystywane do dostarczania leków przeciwnowotworowych. Polimery amfifilowe tworzą micele o strukturze rdzeń-powłoka w środowisku wodnym poprzez samoorganizację. Hydrofobowy rdzeń miceli działa jako rezerwuar leków hydrofobowych i zamyka leki hydrofobowe. Otoczka hydrofilowa zapobiega agregacji miceli, a także przedłuża ich krążenie ogólnoustrojowe in vivo. W tym protokole opisujemy metodę syntezy lipofilowego proleku doksorubicyny, kwasu doksorubicynowo-palmitynowego (DOX-PA), który zwiększy ładowanie leku do miceli. Do koniugacji doksorubicyny z lipidem użyto łącznika hydrazonu wrażliwego na pH, który ułatwia uwalnianie wolnej doksorubicyny do komórek nowotworowych. Zsyntetyzowany DOX-PA oczyszczono za pomocą kolumny z żelem krzemionkowym przy użyciu dichlorometanu/metanolu jako eluentu. Oczyszczony DOX-PA analizowano za pomocą chromatografii cienkowarstwowej (TLC) i 1spektroskopii H-jądrowego rezonansu magnetycznego (1H-NMR). Do przygotowania miceli DSPE-PEG obciążonych DOX-PA wykorzystano metodę dyspersji foliowej. Ponadto opisano kilka metod charakteryzowania preparatów micelowych, w tym oznaczanie stężenia DOX-PA i skuteczności enkapsulacji, pomiar wielkości i rozmieszczenia cząstek oraz ocenę aktywności przeciwnowotworowej in vitro. Protokół ten dostarcza użytecznych informacji na temat przygotowania i charakterystyki miceli obciążonych lekiem, a tym samym ułatwi badania i rozwój nowych nanoleków przeciwnowotworowych na bazie micel.
Wprowadzenie
Chemioterapia jest powszechnie stosowana w leczeniu różnych form raka. Większość, jeśli nie wszystkie, leki stosowane w chemioterapii mają toksyczne skutki uboczne, które mogą wahać się od łatwych do opanowania drobnych schorzeń, takich jak nudności i biegunka, do stanów bardziej zagrażających życiu. Ponieważ większość leków przeciwnowotworowych jest toksyczna, nieselektywna ekspozycja tych leków na normalne tkanki nieuchronnie powoduje toksyczność. W związku z tym istnieje ogromne zapotrzebowanie na podejście terapeutyczne, które może selektywnie dostarczać leki do komórek nowotworowych. Kolejnym wyzwaniem związanym z podawaniem leków przeciwnowotworowych jest ich słaba rozpuszczalność w wodzie. Zwykle do sformułowania tych słabo rozpuszczalnych leków potrzebne są środki solubilizujące. Jednak większość środków rozpuszczających, takich jak dimetylosulfotlenek (DMSO), Cremophor EL i Polysorbate 80 (Tween 80) może powodować toksyczne działanie na wątrobę i nerki, hemolizę, ostre reakcje nadwrażliwości i neuropatie obwodowe. 1 Dlatego do klinicznego stosowania słabo rozpuszczalnych leków przeciwnowotworowych potrzebne są bezpieczne i biokompatybilne preparaty. Nanonośniki są obiecującymi systemami dostarczania leków, które pozwolą sprostać powyższym wyzwaniom. Te nanonośniki obejmują liposomy2, nanocząstki, 3 micele,4-7 koniugaty polimer-lek,8 i materiały nieorganiczne. 9 Kilka produktów nanomedycznych (np. Doxil, Abraxane i Genexol) zostało zatwierdzonych przez agencje regulacyjne do leczenia pacjentów z rakiem. 10
Micele polimerowe są obiecującymi nośnikami leków na nanoskalę, które zostały z powodzeniem wykorzystane do dostarczania leków przeciwnowotworowych. 4-7,11,12 Typowe micele polimerowe są otrzymywane z polimerów amfifilowych w procesie samoorganizacji. Micele polimerowe o strukturze rdzeń-powłoka obejmują powłokę hydrofilową i rdzeń hydrofobowy. Hydrofilowa otoczka może sterycznie stabilizować micele i przedłużać ich krążenie w krwiobiegu. Hydrofobowy rdzeń może skutecznie kapsułkować leki hydrofobowe. Ze względu na mały rozmiar miceli (zwykle mniej niż 200 nm) i właściwości długiego krążenia, uważa się, że micele polimerowe osiągają celowanie w guz poprzez efekty zwiększonej przepuszczalności i retencji (EPR) (pasywne celowanie w guz).
Stabilność ładowania leku jest kluczowa dla zdolności miceli do celowania w nowotwór. Aby osiągnąć optymalne celowanie w guz, micele powinny mieć minimalny wyciek leku przed dotarciem do miejsca guza, a jednocześnie szybko uwalniać lek po dostaniu się do komórek rakowych. Ponadto stabilność receptury jest również niezbędnym wymogiem dla rozwoju produktu, ponieważ stabilność formuły decyduje o wykonalności opracowania produktu, a także o okresie trwałości opracowanych produktów. W ostatnim czasie podjęto wiele wysiłków w celu usprawnienia załadunku leków do przewoźników. Lipofilowe podejście prolekowe to strategia, która została zbadana w celu poprawy ładowania leków do nanocząsteczek lipidowych i emulsji. 13,14 Koniugacja lipidów z lekami może znacznie poprawić ich lipofilowość oraz zwiększyć obciążenie i retencję w lipofilowych składnikach nanonośników.
Tutaj opisujemy protokół przygotowania lipofilowych miceli naładowanych pro-lekami doksorubicyny. Po pierwsze, opisano procedurę syntezy lipofilowego proleku doksorubicyny. Następnie wprowadzany jest protokół generowania miceli metodą dyspersji filmowej. Metoda ta została z powodzeniem zastosowana w naszych poprzednich badaniach. 5 DSPE-PEG został wybrany jako materiał nośny do otrzymywania miceli, ponieważ jest z powodzeniem stosowany do dostarczania leków micelowych. 15,16 Na koniec opisujemy kilka testów in vitro stosowanych do charakteryzowania preparatów miceli i oceny aktywności przeciwnowotworowej.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
1. Synteza DOX-PA
- Odważyć 390 mg doksorubicyny i 243 mg hydrazydu kwasu palmitynowego i przenieść do kolby okrągłodennej.
- Dodać 150 ml bezwodnego metanolu do kolby za pomocą szklanej strzykawki. Dodać pipetą 39 μl kwasu trifluorooctowego (TFA). Za pomocą mieszadła magnetycznego mieszać mieszaninę reakcyjną przez 18 godzin w temperaturze pokojowej w ciemności.
nuta: Ilości materiałów reakcyjnych można skalować w górę lub w dół, aby uzyskać różne ilości DOX-PA. Stosunek reagentów powinien być utrzymany w tych samych proporcjach. Reakcje z użyciem ilości DOX w zakresie od 78 mg do 1 170 mg można przeprowadzić w zwykłym laboratorium chemicznym. - Oczyszczanie DOX-PA za pomocą kolumny z żelem krzemionkowym. 17
- Usunąć rozpuszczalnik z mieszaniny reakcyjnej za pomocą wyparki obrotowej. Dodać 3 g żelu krzemionkowego po zmniejszeniu objętości mieszaniny do około 20 ml. Kontynuuj odparowywanie rotacyjne, aby uzyskać suche proszki i umożliwić adsorpcję produktów na żelu krzemionkowym. Próbkę należy przechowywać w próżni przez dodatkowe 30 minut po uformowaniu się suchych proszków.
- Umieścić 50 g żelu krzemionkowego w kolumnie, używając dichlorometanu jako rozpuszczalnika. Ostrożnie dodać do kolumny próbkę żelu krzemionkowego zawierającą zaadsorbowany produkt.
- Eluować kolumnę mieszaniną dichlorometanu i metanolu, stopniowo zwiększając zawartość procentową metanolu, zwiększając w ten sposób polarność rozpuszczalnika (tabela 1).
- Zebrać frakcje eluentu w probówkach (25 ml / probówkę) i monitorować postęp za pomocą chromatografii cienkowarstwowej (TLC).
- Połączyć wszystkie frakcje zawierające czysty DOX-PA i usunąć rozpuszczalnik za pomocą wyparki obrotowej, aż do uzyskania suchego proszku. Dalej suszyć produkt pod próżnią O/N.
- Analiza DOX-PA przez TLC.
- Wytnij odcinek płytki TLC o wymiarach 4 cm x 8 cm. Roztwory próbek punktowych w odległości 0,5 cm od dna płytki należy umieścić w kapilarnach punktowych TLC, stosując metanol jako rozpuszczalnik.
- Umieścić płytkę TLC w komorze wywoływania zawierającej mieszaninę dichlorometanu i metanolu (3/1, v/v). Głębokość rozpuszczalnika powinna być mniejsza niż 0,5 cm.
- Wyjąć płytkę z komory wywoływania, gdy czoło rozpuszczalnika dotrze do górnej części płytki. Zaznacz ołówkiem położenie czoła rozpuszczalnika i pozostaw płytkę do wyschnięcia. Umieścić płytkę TLC w komorze barwiącej zawierającej nasycone opary jodu w celu wizualizacji próbek.
- Analiza DOX-PA za pomocą 1spektroskopii magnetycznego rezonansu jądrowego 1 H-(1H-NMR). Rozdział 18
- Rozpuścić 15 mg DOX-PA w 1 ml suloctku metylu-d6 (DMSO) i przenieść próbkę do probówki NMR.
- Włóż rurkę NMR do magnesu przyrządu NMR. Zmierz widmo protonów, wybierając DMSO jako rozpuszczalnik. Wyjmij rurkę NMR z magnesu. Przeanalizuj wynik NMR18.
2. Przygotowanie miceli DOX-PA metodą dyspersji filmu
- Rozpuścić DSPE-PEG (40 mg) i DOX-PA (4 mg) w 2 ml metanolu w szklanej fiolce o pojemności 10 ml.
- Usunąć rozpuszczalnik organiczny pod próżnią za pomocą wyparki obrotowej, aż w fiolce utworzy się cienka warstwa.
UWAGA: Alternatywnie, należy odparować rozpuszczalniki organiczne w gazie obojętnym (np. argonie lub azotze) w celu utworzenia filmu i przechowywać fiolkę w eksykatorze próżniowym w celu dalszego usunięcia pozostałości rozpuszczalnika. - Przenieść 2 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (pH 7,4, DPBS) firmy Dulbecco do szklanej fiolki.
- Umieść fiolkę w kąpieli ultradźwiękowej na 3 minuty w temperaturze pokojowej w celu wytworzenia miceli.
UWAGA: Moc ultradźwięków różni się w zależności od różnych modeli wanien ultradźwiękowych. Wybierz jednostkę, która może wygenerować wystarczającą moc ultradźwiękową do rozproszenia cienkiego filmu polimerowo-lekowego. Moc wyjściowa łaźni ultradźwiękowej zastosowanej w tym protokole wynosi 110 W. - Micele należy przechowywać w temperaturze 4 °C do krótkotrwałego przechowywania i -20 °C do długotrwałego przechowywania.
UWAGA: Alternatywnie, micele można również liofilizować i rozpuścić w wodzie przed użyciem. Zwykle do tego preparatu nie jest potrzebny krioprotektant ani lioprotektant.
3. Charakterystyka miceli DOX-PA
- Oznaczanie stężenia DOX-PA w micelach i skuteczności kapsułkowania leków
- Rozpuścić DOX-PA zsyntetyzowany w poprzednich etapach w DMSO, aby przygotować roztwory DOX-PA o pięciu różnych stężeniach: 1 μg/ml, 5 μg/ml, 20 μg/ml, 50 μg/ml i 100 μg/ml. Zmierzyć absorpcję roztworów DOX-PA za pomocą spektrometru UV-VIS przy 490 nm. Wygeneruj krzywą wzorcową na podstawie stężeń leku DOX-PA i odpowiadającej im absorpcji przy 490 nm.
- Rozcieńczyć 25 μl miceli naładowanej lekiem w 500 μl DMSO. Zmierzyć absorpcję przy długości fali 490 nm za pomocą spektrometru UV-VIS. Obliczyć stężenia leku za pomocą krzywej wzorcowej utworzonej w ppkt 3.1.1.
- Oblicz wydajność hermetyzacji, korzystając z następującego równania:
Skuteczność kapsułkowania leku (%) = (ilość leków w miceli)/(ilość dodanego leku) × 100%
- Charakterystyka wielkości cząstek za pomocą dynamicznego rozpraszania światła (DLS)
- Rozcieńczyć micele preparatem DPBS (pH 7,4) do końcowego stężenia DSPE-PEG 1 mg/ml. Przeanalizować próbkę o objętości 2 ml za pomocą analizatora wielkości cząstek, aby uzyskać średnią wielkość Z i wskaźnik polidyspersyjności (PDI).
- Ocena aktywności przeciwnowotworowej in vitro
UWAGA: Stosuj odpowiednią sterylną technikę i pracuj w komorze bezpieczeństwa biologicznego.- Wyjąć pożywkę do hodowli komórkowych z kolby do hodowli komórkowych (np. T25) zawierającej DU-145 ludzkie komórki raka gruczołu krokowego i przepłukać komórki 2 ml DPBS (pH 7,4).
- Odessać DPBS, dodać 1 ml roztworu trypsyny (0,25%) i inkubować przez 2 minuty w temperaturze 37 °C w celu odłączenia komórek.
- Dodać 10 ml pożywki do hodowli komórkowych (RPMI 1640 + 10% płodowej surowicy bydlęcej + 1% antybiotyku-antybiotyku przeciwgrzybiczego), gdy większość komórek zostanie odłączona od kolby. Przenieść komórki do probówki wirówkowej o pojemności 15 ml i odwirować komórki przy sile 1 000 x g przez 5 minut.
- Ponownie zawiesić osad komórkowy za pomocą 5 ml pożywki do hodowli komórkowych i usunąć próbkę do obliczenia liczby komórek za pomocą hemocytometru. Rozcieńczyć komórki pożywką do hodowli komórkowych do gęstości 50 000 komórek/ml. Dodać zawiesiny rozcieńczonych komórek do 96-dołkowej płytki do hodowli komórkowej (100 μl/dołek). Inkubować komórki w inkubatorze do hodowli komórkowych (37 °C, 5% CO2 ) przez 18 godzin, aby umożliwić przyłączenie komórek.
- Rozcieńczyć roztwór dimetylosulfotlenku DOX (DMSO) i roztwór DOX-PA DMSO z pożywką do hodowli komórkowych, aby uzyskać końcowe stężenia leku odpowiednio 0,1 μM, 0,5 μM, 2 μM, 5 μM i 10 μM. Utrzymuj końcowe stężenie DMSO we wszystkich powyższych próbkach na poziomie 0,5%. Rozcieńczyć micelę DOX-PA pożywką do hodowli komórkowych, aby uzyskać końcowe stężenia leku odpowiednio 0,1 μM, 0,5 μM, 2 μM, 5 μM i 10 μM. Użyć pożywki do hodowli ślepych komórek jako kontroli.
- Wyjąć 96-dołkową płytkę do hodowli komórkowych z inkubatora i zastąpić pożywkę do hodowli komórkowych 100 μl pożywki zawierającej różne środki poddane działaniu substancji, przygotowane w kroku 3.3.5 (n = 4 dla każdej grupy). Inkubować komórki w inkubatorze do hodowli komórkowych (37 °C, 5% CO2 ) przez dodatkowe 72 godziny.
- Odessać pożywkę i dodać 100 μl pożywki zawierającej 0,5 mg/ml bromku 3-(4,5-dimetylo-tiazol-2-ylo)-2,5-difenylotetrazolu (MTT).
- Inkubować komórki w inkubatorze do hodowli komórkowych przez dodatkowe 2 godziny. Ostrożnie usunąć pożywkę i dodać 100 μl DMSO, aby rozpuścić kryształy formazanu.
- Zmierzyć absorbancję za pomocą spektrofotometru mikropłytkowego przy długości fali 570 nm i długości fali odniesienia 670 nm.
- Oblicz żywotność komórki, korzystając z następującego równania:
Żywotność komórek (%) = (Test A ⁄ Kontrola A) × 100%
UWAGA: Porównaj żywotność komórek między różnymi grupami za pomocą testu statystycznego jednokierunkowej analizy wariancji (ANOVA). Oblicz IC50 na podstawie danych dotyczących żywotności komórek w porównaniu ze stężeniem leku.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Rysunek 1 przedstawia schemat syntezy DOX-PA. DOX-PA został zsyntezowany poprzez koniugację kwasu palmitynowego z doksorubicyną za pomocą wrażliwego na pH wiązania hydrazonowego. Aby ułatwić całkowite przeprowadzenie reakcji, zastosowano niewielki nadmiar hydrazydy kwasu palmitynowego. Ta metoda reakcji charakteryzuje się bardzo wysoką wydajnością, a po 18 h reakcji pozostała jedynie niewielka ilość doksorubicyny (Rysunek 2). Wydajność wyniosła około 88%....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
W niniejszej pracy opisujemy nieskomplikowaną, szybką metodę dyspersji filmowej do otrzymywania miceli. Metoda ta wykorzystuje właściwości samoorganizacji polimeru amfifilowego (np. DSPE-PEG) do tworzenia miceli o strukturze rdzeń-powłoka w środowisku wodnym. Ta metoda przygotowania miceli ma kilka zalet. 1. Obejmuje prosty proces formulacji, który pozwala uniknąć stosowania skomplikowanych etapów zmniejszania rozmiaru (takich jak wytłaczanie lub homogenizacja) powszechnie stosowanych w przygotowaniu liposomów, ...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez następujące granty: grant NIH-SC3, grant NSF-PREM, grant badawczy Hampton University. Chcielibyśmy podziękować Pani Michele A. Cochran z Virginia Institute of Marine Science (VIMS) za korzystanie z analizatora wielkości cząstek. Chcielibyśmy również podziękować Pani Corinne R. Ramaley za zrecenzowanie manuskryptu.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| DSPE-PEG2K | Cordenpharm | LP-R4-039 | >95% |
| Doxorubicin | LC Laboratories | D-4000 | >99% |
| Hydrazyd kwasu palmitynowego | TCI AMERICA | P000425G | >98,0% |
| Metanol | ACROS Organics | 610981000 | Bezwodny |
| chlorek metylenu | RYBACY | D151-4 | 99,90% |
| Sultlenek metylu-d6 | ACROS Organics | AC320760075 | Rozpuszczalnik NMR |
| Kwas trifluorooctowy | ACROS Organics | AC293811000 | 99,50% |
| żel krzemionkowy | FISHER | L-7446 | 230-400 siatka |
| Baker Flex TLC | FISHER  | ||
| DPBS | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| DU 145 Komórki raka prostaty | ATCC | HTB-81 | |
| MTT | ACROS Organics | 158990050 | 98% |
| RPMI 1640 Średni | MEDIATECH INC | 10041CV | |
| Antybiotyk-Antybiotyk Przeciwgrzybiczy | TECHNOLOGIE ŻYCIA | 15240062 | 100x roztwór podstawowy |
| Surowica bydlęca płodu | TECHNOLOGIE ŻYCIA | ||
| Spektroskopia magnetycznego rezonansu jądrowego | Varian, Inc | 300 NMR | |
| Bü chi R-3 Rotavapor | Buchi | 1103022V1 | Parownik obrotowy |
| Kąpiel ultradźwiękowa | BRANSON ULTRASONICS CORPORATION | ||
| Spektrometr UV-VIS Biomate 3 | Thermo Spectronic | ||
| Zetasizer Nano ZS90 | Malvern Instruments | Analizator wielkości cząstek | |
| Spektrofotometr mikropłytkowy | Rio-Rad | Benchmark Plus | |
| Inkubator Kultur Komórkowych | Napco | CO2 6000 | |
| Szafa Bezpieczeństwa Biologicznego | Nuaire | ||
| SigmaPlot | Systat Software, Inc. | Oprogramowanie analityczne | |
| 96-dołkowa płytka do hodowli komórkowych | Becton Dickinson | 353072 | |
| Trypsyna 0,25% | Corning Cellgro | 25-053-CI |
Bibliografia
- Hennenfent, K. L., Govindan, R. Novel formulations of taxanes: a review. Old wine in a new bottle? ESMO. 17 (5), 735-749 (2006).
- Paliwal, S. R., Paliwal, R., Agrawal, G. P., Vyas, S. P. Liposomal nanomedicine for breast cancer therapy. Nanomedicine. 6 (6), 1085-1100 (2011).
- Mahapatro, A., Singh, D. K. Biodegradable nanoparticles are excellent vehicle for site directed in vivo delivery of drugs and vaccines. J Nanobiotechnology. 9 (55), (2011).
- Danquah, M., Li, F., Duke, C. B., Miller 3rd,, D, D., Mahato, R. I. Micellar delivery of bicalutamide and embelin for treating prostate cancer. Pharm Res. 26 (9), 2081-2092 (2009).
- Li, F., Danquah, M., Mahato, R. I. Synthesis and characterization of amphiphilic lipopolymers for micellar drug delivery. Biomacromolecules. 11 (10), 2610-2620 (2010).
- Li, F., Danquah, M., Singh, S., Hao, W., Mahato, R. Paclitaxel- and lapatinib-loaded lipopolymer micelles overcome multidrug resistance in prostate cancer. Drug Deliv. and Transl. Res. 1 (6), 9(2011).
- Li, F., Lu, Y., Li, W., Miller, D. D., Mahato, R. I. Synthesis, formulation and in vitro evaluation of a novel microtubule destabilizer, SMART-100. J Control Release. 143 (1), 151-158 (2010).
- Minko, T., Kopeckova, P., Pozharov, V., Kopecek, J. HPMA copolymer bound adriamycin overcomes MDR1 gene encoded resistance in a human ovarian carcinoma cell line. J Control Release. 54 (2), 223-233 (1998).
- Rosenholm, J. M., Mamaeva, V., Sahlgren, C., Linden, M. Nanoparticles in targeted cancer therapy: mesoporous silica nanoparticles entering preclinical development stage. Nanomedicine. 7 (1), 111-120 (2012).
- Kaur, I. P., et al. Issues and concerns in nanotech product development and its commercialization. J Control Release. 193, 51-62 (2014).
- Jones, M., Leroux, J. Polymeric micelles - a new generation of colloidal drug carriers. Eur J Pharm Biopharm. 48 (2), 101-111 (1999).
- Wang, H., Li, F., Du, C., Mahato, R. I., Huang, Y. Doxorubicin and lapatinib combination nanomedicine for treating resistant breast cancer. Mol Pharm. 11 (8), 2600-2611 (2014).
- Ma, P., Rahima Benhabbour, S., Feng, L., Mumper, R. J. 2'-Behenoyl-paclitaxel conjugate containing lipid nanoparticles for the treatment of metastatic breast cancer. Cancer Lett. 334 (2), 253-262 (2013).
- Lundberg, B. B., Risovic, V., Ramaswamy, M., Wasan, K. M. A lipophilic paclitaxel derivative incorporated in a lipid emulsion for parenteral administration. J Control Release. 86 (1), 93-100 (2003).
- Perche, F., Patel, N. R., Torchilin, V. P. Accumulation and toxicity of antibody-targeted doxorubicin-loaded PEG-PE micelles in ovarian cancer cell spheroid model. J Control Release. 164 (1), 95-102 (2012).
- Gill, K. K., Kaddoumi, A., Nazzal, S. Mixed micelles of PEG(2000)-DSPE and vitamin-E TPGS for concurrent delivery of paclitaxel and parthenolide: enhanced chemosenstization and antitumor efficacy against non-small cell lung cancer (NSCLC) cell lines. Eur J Pharm Sci. 46 (1-2), 67-71 (2012).
- Still, W. C., Kahn, M., Mitra, A. Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with Moderate Resolution. J. Org. Chem. 43 (14), 2923-2925 (1978).
- New Mexico State University. NMR Protocols and Specifications. , Available from: http://web.nmsu.edu/~kburke/Instrumentation/NMSU_NMR_300.html (2015).
- Morton, L. A., Saludes, J. P., Yin, H. Constant pressure-controlled extrusion method for the preparation of Nano-sized lipid vesicles. J Vis Exp. (64), (2012).
- Ulbrich, K., Etrych, T., Chytil, P., Jelinkova, M., Rihova, B. HPMA copolymers with pH-controlled release of doxorubicin: in vitro cytotoxicity and in vivo antitumor activity. J Controlled Release. 87 (1-3), 33-47 (2003).
- Patil, R., et al. Cellular Delivery of Doxorubicin via pH-Controlled Hydrazone Linkage Using Multifunctional Nano Vehicle Based on Poly(beta-L-Malic Acid). Int J Mol Sci. 13 (9), 11681-11693 (2012).
- Hu, X., Liu, S., Huang, Y., Chen, X., Jing, X. Biodegradable block copolymer-doxorubicin conjugates via different linkages: preparation, characterization, and in vitro evaluation. Biomacromolecules. 11 (8), 2094-2102 (2010).
- Huynh, L., Neale, C., Pomes, R., Allen, C. Computational approaches to the rational design of nanoemulsions, polymeric micelles, and dendrimers for drug delivery. Nanomedicine. 8 (1), 20-36 (2012).
- Shi, C., et al. A drug-specific nanocarrier design for efficient anticancer therapy. Nat Commun. 6, 7449(2015).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
